检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2003年第11期25卷 971-973页

作者：郝宏兴徐文岳段建华况明书黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　构建大劣按蚊成蚊cDNA文库 ,为进一步筛选、克隆按蚊免疫及疟原虫发育相关基因奠定基础。方法　分离大劣按蚊成蚊mRNA ,用Stratagene公司的ZAPExpress文库构建试剂盒构建cDNA文库并鉴定其质量。结果　所建文库滴度达 2 1× 1... 详细信息

目的　构建大劣按蚊成蚊cDNA文库 ,为进一步筛选、克隆按蚊免疫及疟原虫发育相关基因奠定基础。方法　分离大劣按蚊成蚊mRNA ,用Stratagene公司的ZAPExpress文库构建试剂盒构建cDNA文库并鉴定其质量。结果　所建文库滴度达 2 1× 10 6pfu/ml,重组效率达 98%以上 ,插入片段长度平均为 1kb以上。

关键词：大劣按蚊 cDNA文库

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Orexin:觉醒通路中一种重要的下丘脑神经肽

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第三军医大学学报 2003年第13期25卷 1207-1209页

作者：宋承辉胡志安第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

1998年有两组研究人员[1 ,2 ] 各自发现了一种由大鼠下丘脑外侧区 (Lateralhypothalamicarea ,LHA)合成和分泌的具有促进动物摄食作用的小分子肽 ,并分别命名为Hypocretin和Orexin。因为已知LHA是重要的摄食调节区 ,起初对orexin(为方... 详细信息

1998年有两组研究人员[1 ,2 ] 各自发现了一种由大鼠下丘脑外侧区 (Lateralhypothalamicarea ,LHA)合成和分泌的具有促进动物摄食作用的小分子肽 ,并分别命名为Hypocretin和Orexin。因为已知LHA是重要的摄食调节区 ,起初对orexin(为方便阐述 ,文中主要采用“orexin”的命名 )生理活性的研究集中于对摄食行为的调节。对orexin能纤维的投射及其受体分布的研究结果也提示orexin信号区包括食欲、饱腹感和能量平衡[3,4 ] 。脑室内注射证实orexin确有促进动物摄食的作用[5] 。然而 ,后来的神经解剖和分子生物学证据表明orexin

关键词： orexin 觉醒睡眠下丘脑

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谷氨酸和GABA对额叶皮质锥体细胞自发性电活动的影响

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第三军医大学学报 2003年第10期25卷 858-861页

作者：宋承辉胡志安阮怀珍蔡文琴吴喜贵张金海第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的　应用膜片钳全细胞记录技术 ,观察急性分离大鼠额叶皮质Ⅴ、Ⅵ层锥体细胞自发性电活动的特点及其影响因素。方法　采用酶加机械分离法分离 8～ 12d鼠龄的Wistar大鼠额叶皮质Ⅴ、Ⅵ层锥体细胞 ,用膜片钳全细胞记录技术测定电生理学... 详细信息

目的　应用膜片钳全细胞记录技术 ,观察急性分离大鼠额叶皮质Ⅴ、Ⅵ层锥体细胞自发性电活动的特点及其影响因素。方法　采用酶加机械分离法分离 8～ 12d鼠龄的Wistar大鼠额叶皮质Ⅴ、Ⅵ层锥体细胞 ,用膜片钳全细胞记录技术测定电生理学特性 ,观察不同膜电位水平时自发性电活动的特点及谷氨酸和GABA对其影响。结果　 73 44 %的分离神经元具有自发性电活动 (n =64 ) ,膜电位在 -4 0～ -60mV时较易出现。 1mmol/L的谷氨酸显著增加放电活动的频率 ,10 0 μmol/LGABA则明显抑制放电活动的产生。结论　急性分离的大鼠额叶皮质锥体细胞有自发性电活动。

关键词：额叶皮质锥体细胞膜片钳自发性电活动急性分离

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斯氏按蚊血淋巴在约氏疟原虫卵囊黑化时差异表达蛋白的SDS-PAGE分析

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第三军医大学学报 2003年第8期25卷 683-686页

作者：杨松黄复生况明书段建华第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　初步了解约氏疟原虫感染后的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水后不同时间的血淋巴蛋白差异表达。方法　挤压法分别收集两组雌斯氏按蚊成蚊 1～ 5d的血淋巴 ,经SDS PAGE ,考马斯亮蓝和银染显色 ,Bio Rad10 0 0凝胶图像分析系... 详细信息

目的　初步了解约氏疟原虫感染后的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水后不同时间的血淋巴蛋白差异表达。方法　挤压法分别收集两组雌斯氏按蚊成蚊 1～ 5d的血淋巴 ,经SDS PAGE ,考马斯亮蓝和银染显色 ,Bio Rad10 0 0凝胶图像分析系统进行扫描和差异蛋白条带的自动化分析。结果　用药第 2天少数蚊卵囊开始部分黑化 ,第 5～9天黑化蚊及其黑化卵囊逐渐增多。用药后第 3天处理组蚊血淋巴蛋白条带数明显多于对照组 ,两组间存在较多差异蛋白带 ,主要集中在 ( 2 0～ 40 )× 10 3、( 60～ 80 )× 10 3和 13 0× 10 3处。银染比考马斯亮蓝染色出现的蛋白条带数多。结论　约氏疟原虫感染的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹糖水后其血淋巴蛋白表达有差异。

关键词：差异蛋白分析血淋巴斯氏按蚊约氏疟原虫 SDS-PAGE

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吸血和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞中rpS7转录的影响

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第三军医大学学报 2003年第10期25卷 862-863页

作者：张敬如徐文岳黄复生段建华第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的　观察血餐和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞中核糖体蛋白S7(Ribosomalprotein ,rpS7)转录的影响。方法　同批 3～ 5d龄大劣按蚊分为正常组 (N)、吸正常血组 (B)和感染约氏疟原虫组 (I) ,分别在血餐后 1、2、3、7d ,离心法同时收... 详细信息

目的　观察血餐和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞中核糖体蛋白S7(Ribosomalprotein ,rpS7)转录的影响。方法　同批 3～ 5d龄大劣按蚊分为正常组 (N)、吸正常血组 (B)和感染约氏疟原虫组 (I) ,分别在血餐后 1、2、3、7d ,离心法同时收集 3组各 5 0只雌大劣按蚊血细胞总RNA ,所有样品进行RT PCR后 ,各吸取 10ulPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳 ,凝胶图像分析系统扫描并读取数据 ,并对所得数据进行统计学分析。结果　 3组大劣按蚊血细胞rpS7mRNA的RT PCR扩增产物量无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　类似于人类和小鼠 β actin ,以及冈比亚按蚊rpS7。

关键词：大劣按蚊约氏疟原虫核糖体蛋白S7 rpS7

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铜绿假单胞菌外毒素A全长基因的扩增与克隆

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中国人兽共患病杂志 2003年第4期19卷 93-95页

作者：胡晓梅胡福泉饶贤才黄建军金晓琳第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法　从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切... 详细信息

目的　从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法　从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切与测序鉴定。结果与结论　成功地从高GC含量的绿脓杆菌染色体DNA中扩增到长片段的外毒素A全基因并进行了克隆与鉴定。

关键词：铜绿假单胞菌外毒素A全长基因扩增克隆

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PKC在LPS激活大鼠肺巨噬细胞核转录因子-κB中的作用

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第三军医大学学报 2003年第19期25卷 1755-1758页

作者：黎庶汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)在LPS激活肺巨噬细胞核转录因子 κB信号传导通路中的作用。方法　采用夹心ELISA的方法检测巨噬细胞NF κB的核内浓度 ;免疫组化染色观察LPS作用前后NF κB的位置改变。结果　LPS刺激可诱导巨噬细胞NF κB活... 详细信息

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)在LPS激活肺巨噬细胞核转录因子 κB信号传导通路中的作用。方法　采用夹心ELISA的方法检测巨噬细胞NF κB的核内浓度 ;免疫组化染色观察LPS作用前后NF κB的位置改变。结果　LPS刺激可诱导巨噬细胞NF κB活化 ,二者之间存在时效与量效的依赖关系 ;免疫组化染色显示LPS作用后 ,NF κB发生核内移位 ,由胞浆进入细胞核内 ;而特异性PKC抑制剂 (CalC)和NF κB阻断剂 (PDTC)均能在不同程度上抑制LPS的作用。结论　PKC作为NF κB活化的上游信使 ,参与了LPS激活NF

关键词：脂多糖 NF-κB PKC 信号传导

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3一个结构蛋白的N-端测序及编码基因的确定

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第三军医大学学报 2003年第13期25卷 1140-1142页

作者：张克斌金晓琳朱军民陈志瑾饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的主要结构蛋白基因。方法　将噬菌体PaP3颗粒用CsCl梯度离心纯化 ,SDS PAGE电泳其结构蛋白后 ,电转印于PVDF膜上 ,再用Edman降解法对主要结构蛋白作N端测序 ,根据蛋白N端 5个氨基酸残基序列逆推其编... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的主要结构蛋白基因。方法　将噬菌体PaP3颗粒用CsCl梯度离心纯化 ,SDS PAGE电泳其结构蛋白后 ,电转印于PVDF膜上 ,再用Edman降解法对主要结构蛋白作N端测序 ,根据蛋白N端 5个氨基酸残基序列逆推其编码读框。结果　PaP3主要结构蛋白的N端 5个氨基酸残基顺序为 :Ala Thr Pro Thr Asn。结论据此推定其编码基因为ORF 3 63 5 4～ 3 73 0 7(负链 )编码的蛋白 ,该蛋白共有 3 18氨基酸 ,其等电点为 7 70 ,分子质量为3 5 0 2 4 46。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体蛋白质 N端测序

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大鼠缺血性脑损伤早期一氧化氮含量的变化及其细胞来源的研究

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第三军医大学学报 2003年第13期25卷 1168-1171页

作者：李红丽蔡文琴赵士福孙榆第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆400037 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038 第三军医大学附属新桥医院神经外科重庆400037

目的　观察缺血性损伤后脑内一氧化氮 (Nitricoxide ,NO)含量的变化并确定NO的细胞来源。方法　采用短暂性全脑缺血再灌注模型 ,运用NO生化检测、NADPH 黄递酶组化、免疫荧光双标技术及图像分析等方法。结果　①脑内NO的浓度于缺血再灌... 详细信息

目的　观察缺血性损伤后脑内一氧化氮 (Nitricoxide ,NO)含量的变化并确定NO的细胞来源。方法　采用短暂性全脑缺血再灌注模型 ,运用NO生化检测、NADPH 黄递酶组化、免疫荧光双标技术及图像分析等方法。结果　①脑内NO的浓度于缺血再灌注后 12h后即升高 ,1～ 3d达高峰并持续至第 5天 ,此后逐步下降。②NDP阳性细胞数在缺血再灌注后 1d即达高峰 ,以颞叶皮质、海马与室周区明显 ;再灌注 14d后阳性细胞减少或消失。③脑缺血早期 ( 1～ 3d)NDP阳性细胞与GFAP免疫荧光阳性细胞少数有共存 ,仅占 10 %～ 15 %。结论　缺血性脑损伤早期NO的浓度增高。

关键词：脑缺血再灌注一氧化氮(NO) 胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 大鼠

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斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA的克隆和表达

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中国人兽共患病杂志 2003年第6期19卷 24-28页

作者：王英张锡林段文元张艳玲段建华第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院神经内科

目的　克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并进行原核表达。方法　利用简并引物 ,进行RT -PCR ,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入 pUCm -T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基... 详细信息

目的　克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并进行原核表达。方法　利用简并引物 ,进行RT -PCR ,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入 pUCm -T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。将获得的cDNA片段克隆入Pin PointTMXa- 1T表达载体 ,经过筛选后 ,在大肠杆菌中进行原核表达。通过SDS -PAGE电泳和Westernblot方法鉴定表达产物 ,并检测所表达融合蛋白的免疫反应性。结果　RT -PCR扩增出了一 5 0 0bp左右的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 4 98bp。推导出的氨基酸序列长 16 6 ;氨基酸序列的同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着很高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组氨酸和天冬酰胺残基高度保守。原核表达中 ,对表达产物的鉴定结果和免疫反应性检测结果均显示 ,目的克隆在 33kDa处有一明显条带。结论　本实验克隆获得了斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,其序列中包含了与该酶活性有关的重要位点。原核表达获得一 33kDa的融合蛋白 ,该融合蛋白具有免疫反应性。

关键词：斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶基因表达基因克隆

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