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第三军医大学学报 2018年第6期40卷 479-486页

作者：高振吴琴郭俊峰李铀陈雪丹高强国张纲陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院口腔科重庆400037 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院医学遗传学教研室重庆400038

目的探讨降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)在人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymalstem cells,HUMSCs)向成骨细胞分化过程中的作用及机制。方法体外培养HUMSCs细胞,加入0、10-9、10-8、10-7mol/L浓度的CGRP诱导其向成骨细胞分化,分别在第7、9、11、14天时采用茜素红染色检测成骨分化程度,实时定量PCR和Western blot检测ERK、RUNX2、OSTERIX的mRNA和磷酸化的ERK、RUNX2、OSTERIX的蛋白表达。结果 HUMSCs高表达CD73、CD90、CD105等间充质干细胞表面抗原,但不表达CD14、CD20、CD34、CD45等上皮和造血干细胞的表面抗原,可诱导向成骨细胞分化,随着时间延长矿化结节数量增加(P<0.05);随着CGRP浓度的升高,矿化结节减少,ERK、RUNX2、OSTERIX的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。结论 CGRP通过ERK信号通路抑制HUMSCs向成骨细胞的分化,并呈现出浓度和时间依赖性。

关键词：降钙素基因相关肽人脐带间充质干细胞成骨细胞细胞分化

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雌激素受体α在胰岛素致动脉粥样硬化中的作用

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第三军医大学学报 2016年第7期38卷 669-674页

作者：仲伟天贾敏章波白云王旭开第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆400042 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的探讨在胰岛素诱导动脉粥样硬化发生的过程中,雌激素受体α(estrogen receptorα,ER-α)的作用。方法 18周龄Apoe/Lepr基因双敲小鼠按随机数字表法分为对照组和实验组(4 IU胰岛素组),每组4只。HE染色及免疫组化观察小鼠血管动脉斑块... 详细信息

目的探讨在胰岛素诱导动脉粥样硬化发生的过程中,雌激素受体α(estrogen receptorα,ER-α)的作用。方法 18周龄Apoe/Lepr基因双敲小鼠按随机数字表法分为对照组和实验组(4 IU胰岛素组),每组4只。HE染色及免疫组化观察小鼠血管动脉斑块形成及α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin-α,α-SMA)、ER-α的表达。2用胰岛素及甲基化转移酶抑制剂干预大鼠血管平滑肌细胞,采用RT-PCR及Western blot检测DNA甲基化酶、ER-α的表达,划痕实验及流式细胞仪检测ER-α对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果 1实验组小鼠血管出现动脉斑块,免疫组化结果显示α-SMA、ER-α表达降低(P<0.05)。2与对照组比较,胰岛素处理后血管平滑肌细胞中DNA甲基化酶的mRNA与蛋白表达升高(P<0.01),而ER-α表达下降(P<0.01),甲基化酶抑制剂可以消除这种差异,高表达ER-α后,划痕实验及流式细胞仪检测结果显示血管平滑肌细胞增殖减慢(P<0.05)。结论胰岛素通过促进DNA甲基化酶的表达,诱导ER-α基因甲基化,使ER-α表达下降,最终导致动脉粥样硬化的发生。

关键词：胰岛素动脉粥样硬化雌激素受体-α 甲基化小鼠,基因敲除血管平滑肌细胞

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基于第三代测序技术进行世居藏族人群HBV全长准种特征研究

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第三军医大学学报 2019年第7期41卷 637-645页

作者：蔡林郑钧丰谭文婷孙凤明但芸婕向小梅邓国宏陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院医学遗传学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院感染科重庆400038

目的利用第三代测序技术,探讨世居藏族人群乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)准种变异特点。方法 2016年5月至2017年7月陆军军医大学第一附属医院感染科在藏南地区进行HBV流行病学调查,采集到藏族HBsAg阳性样本24例,作为高原世居藏族... 详细信息

目的利用第三代测序技术,探讨世居藏族人群乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)准种变异特点。方法 2016年5月至2017年7月陆军军医大学第一附属医院感染科在藏南地区进行HBV流行病学调查,采集到藏族HBsAg阳性样本24例,作为高原世居藏族组,同时在感染科门诊收集24例样本作为平原汉族对照组,提取HBV DNA并扩增病毒全长序列,构建全基因组测序文库,采用第三代测序平台PacBio RSⅡ进行测序;借助ClustalW、MEGA、SimPlot等生物信息工具进行序列准种特征分析。结果 29例样本最终成功扩增并测序,其中高原世居藏族组9例,每个样本平均获得65条准种序列;对照组20例,每个样本平均获得124条准种序列。经比对分析,高原世居藏族组发现7例(7/9,77.8%)C/D1型重组HBV,由D4亚型与C2亚型HBV在750 nt重组而成;1例C/D2型HBV,由D3亚型与C2亚型HBV在1 500 nt重组而成;1例为C2型。C/D型HBV preC/C区复杂度、非同义突变率高于平原汉族对照组。C/D型HBV核酸变异谱与对照组不同,C/D重组型HBV核酸突变以EnhⅡ、BCP、preS区变异为主;而对照组HBV序列除了有BCP、preS变异,还有preC、S、X基因区变异。结论世居藏族人HBV以C/D重组型为优势毒株,且以C/D1型占多数;世居藏族人C/D型HBV preC/C区准种复杂度、非同义突变率更高,而核酸变异集中在EnhⅡ、BCP、preS区。

关键词：肝炎病毒,乙型高通量测序三代准种藏族

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小鼠胚胎神经干细胞海马移植对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用

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第三军医大学学报 2007年第10期29卷 915-918页

作者：武强李露斯范文辉宋敏杨忠第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells,NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响。方法增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒转染... 详细信息

目的在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells,NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响。方法增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒转染培养胚胎NSCs,小鼠海马内移植,水迷宫实验检测小鼠认知功能。结果EGFP转染NSCs海马内移植2个月后可观察到GFP阳性细胞,大部分分布在针道附近,部分向同侧皮层迁移,亦有部分通过胼胝体向对侧大脑迁移,同时小量细胞发出类似于神经元的长突起。AD小鼠的记忆功能明显改善。结论胚胎NSCs海马内移植后能存活、迁移并分化为神经组织细胞,并能显著改善APP/PS1双转基因AD小鼠的认知功能障碍。

关键词：阿尔茨海默病胚胎神经干细胞转基因小鼠移植

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野生型及突变型survivin基因重组逆转录病毒的构建及表达研究

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第三军医大学学报 2005年第8期27卷 691-693页

作者：杨晓亚宋建勋白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　构建含绿色荧光蛋白和野生型及第3 4位氨基酸突变型survivin基因的双顺反子逆转录病毒载体,并进行真核细胞表达。方法　用PCR的方法由含survivin基因的真核表达载体扩增所需目的片段,然后将该片段插入逆转录病毒载体pMIG。酶切鉴... 详细信息

目的　构建含绿色荧光蛋白和野生型及第3 4位氨基酸突变型survivin基因的双顺反子逆转录病毒载体,并进行真核细胞表达。方法　用PCR的方法由含survivin基因的真核表达载体扩增所需目的片段,然后将该片段插入逆转录病毒载体pMIG。酶切鉴定重组子,脂质体介导下转染包装细胞PhoenixE ,病毒上清感染NIH3T3细胞,RT PCR检测外源基因mRNA的表达、流式细胞仪检测GFP的表达从而确认外源基因的转录。结果　经琼脂糖凝胶电泳鉴定,目的片段成功的连接到pMIG载体上。载体转染NIH3T3细胞,RT PCR显示目的片段mRNA能够表达,流式细胞仪检测GFP获良好的表达。结论　成功构建了人survivin基因野生型及突变型逆转录病毒,并在NIH3T3细胞进行了表达,为下一步的研究工作提供了有效的分子工具,并且为将来能在体内应用抑制survivin基因表达的肿瘤治疗奠定基础。

关键词： survivin基因野生型突变型逆转录病毒载体

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一个肌萎缩侧索硬化家系D21S223微卫星位点遗传连锁分析

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 363-365页

作者：史树贵李露斯刘昕倪兵陈康宁第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的对重庆地区1例肌萎缩侧索硬化家系进行遗传连锁分析。方法采用位于21号染色体上的D21S223微卫星位点,经PCR扩增后进行基因型分析,应用GENEHUNTER软件包进行连锁分析。结果最大LOD值为3.06(Θ=0.10),说明该家系致病基因与21号染色体... 详细信息

目的对重庆地区1例肌萎缩侧索硬化家系进行遗传连锁分析。方法采用位于21号染色体上的D21S223微卫星位点,经PCR扩增后进行基因型分析,应用GENEHUNTER软件包进行连锁分析。结果最大LOD值为3.06(Θ=0.10),说明该家系致病基因与21号染色体上的D21S223位点连锁。结论SOD1基因突变可能是引起该家系发病的原因。

关键词：家族性肌萎缩侧索硬化连锁分析微卫星

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大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛模型的制备

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陆军军医大学学报 2000年第3期22卷 295-297页

作者：代佳平冯华刘昕王宪荣第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室!重庆400038 第三军医大学附属西南医院神经外科!重庆400038

目的 :为了深入研究SAH后CVS的发生机制及其治疗效果。方法 :42只大鼠随机分 :A组 :正常对照组 ;B组 :注射 0 9%氯化钠对照组 ;C组 :采用 0 1、0 2、0 3、0 4、0 5ml自体动脉血注入大鼠枕大池制作CVS模型。观察大鼠的存活、临床... 详细信息

目的 :为了深入研究SAH后CVS的发生机制及其治疗效果。方法 :42只大鼠随机分 :A组 :正常对照组 ;B组 :注射 0 9%氯化钠对照组 ;C组 :采用 0 1、0 2、0 3、0 4、0 5ml自体动脉血注入大鼠枕大池制作CVS模型。观察大鼠的存活、临床表现、血压、血气分析、rCBF测定及病理学检查等。结果 :B组大鼠均存活 ,临床表现典型及和病理学改变轻微 ,与A组差异不明显。C4 :大鼠均存活 ,但反应迟钝 ,自洁性差 ,血压短暂升高 ,rCBF下降明显 ,持续时间长 ;颅底出血 ,颅底动脉管壁破坏、层次结构消失 ,与B组差别显著。C1～ 3组大鼠死亡率高。C5组大鼠临床表现肌病理改变不明显。结论 :注射 0 2ml时 ,大鼠存活率高 ,临床表现典型 ,rCBF降低和病理改变明显 ,而且与慢性出血性脑血管痉挛相一致 ,是最理想的CVS模型。

关键词：蛛网膜下腔出血脑血管痉挛

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血降钙素原联合中性粒细胞比例对肝病自发性细菌性腹膜炎的诊断意义

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第三军医大学学报 2017年第11期39卷 1159-1164页

作者：张娟孙伟张维向小梅谭文婷胡秀林吴力克邓国宏第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院全军感染病研究所感染病研究重庆市重点实验室重庆400038

目的探讨血降钙素原(procalcitonin,PCT)和中性粒细胞比例(percentage of neutrophils,Neu%)对肝病自发性细菌性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis,SBP)的诊断价值。方法回顾性分析2014年1月至2016年12月在西南医院感染科住院且入院后同时检测PCT、血常规、腹水常规和腹水培养的130例肝病腹水患者临床资料,SBP确诊组89例,其中培养阳性且多形核细胞(polyremorphonuclear,PMN)≥250×10~6/L患者10例(SBP1组),培养阳性但PMN<250×10~6/L患者11例(SBP2组),培养阴性但PMN≥250×10~6/L患者68例(SBP3组);非感染性腹水组41例。比较4组患者入院时的血PCT、Neu%、腹水PMN等指标。通过受试者工作曲线(ROC)评价PCT、Neu%对SBP的诊断价值及效能。结果 PMN≥250×10~6/L的SBP患者培养阳性率为12.8%。PCT在培养阳性的腹水患者中显著高于培养阴性的患者[中位数(四分位距)]:[4.51(1.54,8.46)vs 0.77(0.21,1.69),P<0.05]。通过ROC曲线分析,PCT诊断SBP1、SBP2、SBP3的最佳界值分别为:0.795、0.265、0.405 ng/m L;AUC值依次为:0.963、0.767、0.714;敏感度依次为:100.00%、90.00%、62.30%;特异度依次为:92.70%、63.40%、80.50%;血常规Neu%诊断的最佳界值分别为:68.45%、62.65%、65.00%;AUC值依次为:0.878、0.756、0.669。依据上述界值,降钙素原和中性粒细胞比例两者串联诊断SBP1、SBP2、SBP3的AUC值依次为:0.976、0.865、0.706。结论血降钙素原和血常规中性粒细胞比例在SBP中均具有一定的预警效果和诊断价值,不同类型SBP其CUT-OFF值不同,临床可根据实际情况综合分析。

关键词：降钙素原中性粒细胞比例自发性细菌性腹膜炎肝病诊断

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T细胞表达CD137L分子介导对血管内皮细胞的活化刺激效应

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第三军医大学学报 2005年第16期27卷 1671-1673页

作者：张利永傅晓岚肖宇宏黄钢张立群白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学高原军事医学系中心实验室重庆400038

目的探讨活化T细胞表面表达的CD137L分子对内皮细胞功能的影响。方法将活化的T细胞与内皮细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-1、IL-8的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达变化,并观察用融合蛋白CD137-Fc阻断CD137-C... 详细信息

目的探讨活化T细胞表面表达的CD137L分子对内皮细胞功能的影响。方法将活化的T细胞与内皮细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-1、IL-8的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达变化,并观察用融合蛋白CD137-Fc阻断CD137-CD137L共刺激通路后内皮细胞分泌细胞因子的变化。结果活化的T细胞刺激了内皮细胞活化,诱导了内皮细胞合成和分泌细胞因子IL-1、IL-8以及粘附分子ICAM-1的表达;可溶性融合蛋白CD137-Fc成功地阻断了CD137-CD137L的相互作用,内皮细胞合成和分泌细胞因子的能力降低。结论证明CD137-CD137L的相互作用在内皮细胞与T细胞的相互作用中发挥了重要的作用,提示CD137与其配体交联具有刺激内皮细胞活化的生物学功能。

关键词： CD137 CD137L CD137-Fc 共刺激分子

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内皮细胞表达CD137分子介导对T细胞的抑制效应

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第三军医大学学报 2005年第15期27卷 1541-1543页

作者：张利永黄钢傅晓岚肖宇宏张立群白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学高原军事医学系中心实验室重庆400038

目的研究内皮细胞表达的CD137分子与活化的T细胞表达的CD137L交联后对T细胞的刺激效应。方法将活化的内皮细胞与活化的T细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-2、IL-10和IFN-γ的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面标志分子CD25、CD69的表... 详细信息

目的研究内皮细胞表达的CD137分子与活化的T细胞表达的CD137L交联后对T细胞的刺激效应。方法将活化的内皮细胞与活化的T细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-2、IL-10和IFN-γ的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面标志分子CD25、CD69的表达变化;CCK-8试剂盒检测T细胞存活率,并观察用融合蛋白抗-CD137阻断CD137-CD137L共刺激通路后T细胞分泌细胞因子的变化。结果采用细胞共培养后,T细胞分泌IL-2、IL-10和IFN-γ的水平下降,而且CD25、CD69的表达水平降低,T细胞存活率下降,应用抗-CD137单克隆抗体阻断CD137-CD137L相互作用后,IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌水平升高,CD25、CD69的表达上调,T细胞存活率上升。结论活化的内皮细胞诱导表达CD137蛋白分子与活化的T细胞上诱导表达的CD137L相互作用,通过CD137L向T细胞内传递抑制信号,抑制了T细胞合成和分泌细胞因子的功能。表明CD137-CD137L信号通路在内皮细胞与T细胞的信号作用中有着重要的地位。

关键词： CD137 CD137L 共刺激分子

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