检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2016年第6期38卷 657-662页

作者：蔡鹏仲伟天彭岩贾敏王燕白云王旭开第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆400042 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的探索重庆地区汉族人群中成纤维细胞生长因子23（FGF23）基因多态性同冠心病发病的相关性。方法筛选2014年5月至2015年3月在我科接受冠脉造影检查的重庆汉族人群431例,其中冠心病（CHD）组231例与对照组200例。提取血液DNA样本后采用... 详细信息

目的探索重庆地区汉族人群中成纤维细胞生长因子23（FGF23）基因多态性同冠心病发病的相关性。方法筛选2014年5月至2015年3月在我科接受冠脉造影检查的重庆汉族人群431例,其中冠心病（CHD）组231例与对照组200例。提取血液DNA样本后采用Sequenom Massarray系统对于rs7955866、rs13312756、rs3812822这3个FGF23基因Tag SNP位点进行基因分型,对其等位基因、基因型及单体型的组间分布进行统计学分析。结果 CHD组rs7955866 A等位基因和rs3812822 C等位基因频率明显高于对照组（P〈0.001）,两位点组间基因型分布也存在明显差异（P〈0.01）。单因素Logistic回归分析示rs7955866 GA基因型携带者患病风险为GG基因型的2.146倍,具有统计学意义（P=0.01,OR=2.146,95%CI[1.393~3.306]）,rs3812822 CT基因型与TT基因型携带者患病风险亦具有统计学差异（P=0.01,OR=2.010,95%CI[1.327~3.046]）。多因素非条件Logistic回归分析调整性别、年龄、BMI、吸烟饮酒史、高血压病史、高胆固醇血症等混杂因素后,结果显示rs7955866及rs3812822位点均与CHD发病独立相关（P〈0.001,OR=2.478,95%CI[1.613~3.806];P〈0.001,OR=2.123,95%CI[1.439~3.132]）。单体型rs7955866-rs13312756-rs3812822统计学分析结果显示,单体型ACC具有增加冠心病患病风险的作用（P〈0.001;OR=2.074,95%CI[1.391~3.091]）。结论重庆汉族人群FGF23基因多态性及与冠心病患病风险相关。

关键词：成纤维细胞生长因子23 单核苷酸多态性冠心病动脉粥样硬化

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PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法

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重庆医科大学学报 2008年第2期33卷 155-158页

作者：胡晓红彭惠民刘昕黄正根袁科重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学分子遗传学教研室重庆400038

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提... 详细信息

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。

关键词： DNA提取 PCR 实时荧光定量PCR

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实时荧光定量检测中国实验用小型猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平

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遗传 2007年第5期29卷 575-580页

作者：杨家大商海涛魏泓杨婉身刘昕四川农业大学生命科学与理学院生物化学教研室雅安625014 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038 第三军医大学基础部分子遗传学教研室重庆400038

CYP3A29是猪肝脏最重要的药物代谢关键酶。研究中国实验用小型猪肝脏CYP3A29mRNA的表达特性对于评估其是否适宜于作为人CYP3A4介导的药理学研究动物模型具有一定意义。以β-actin作校正,利用TaqMan定量技术对巴马香猪、贵州小型香猪肝脏... 详细信息

CYP3A29是猪肝脏最重要的药物代谢关键酶。研究中国实验用小型猪肝脏CYP3A29mRNA的表达特性对于评估其是否适宜于作为人CYP3A4介导的药理学研究动物模型具有一定意义。以β-actin作校正,利用TaqMan定量技术对巴马香猪、贵州小型香猪肝脏CYP3A29mRNA表达水平进行检测,并以荣昌猪作为对照。结果表明,巴马香猪、贵州小型香猪、荣昌猪肝脏CYP3A29mRNA表达水平与报道的人肝脏CYP3A4相近;三品系(种)猪间肝脏CYP3A29mRNA表达水平较为接近,但品系(种)内个体间变异较大。提示巴马香猪、贵州小型香猪作为药物评价的实验动物具有一定可行性。

关键词：巴马香猪 CYP3A29 TaqMan定量

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TWEAK蛋白对肝癌细胞增殖的影响

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免疫学杂志 2007年第5期23卷 510-513页

作者：程晓刚陈玮陈恬李晋川邹强杨淑霞刘阳李敏惠白云成都医学院病原学教研室成都610083 成都医学院科研中心成都610083 第三军医大学分子遗传学教研室重庆400038

目的观察TWEAK蛋白对肝癌细胞系增殖的影响,探讨TWEAK对肝癌细胞增殖的作用。方法构建PAVU6-TWEAKsiRNA干涉质粒,转染HepG2和QGY7703肝癌细胞株,MTT法检测抑制TWEAK蛋白表达对肝癌细胞增殖的影响,并于培养体系中加入TWEAK蛋白,检测肝癌... 详细信息

目的观察TWEAK蛋白对肝癌细胞系增殖的影响,探讨TWEAK对肝癌细胞增殖的作用。方法构建PAVU6-TWEAKsiRNA干涉质粒,转染HepG2和QGY7703肝癌细胞株,MTT法检测抑制TWEAK蛋白表达对肝癌细胞增殖的影响,并于培养体系中加入TWEAK蛋白,检测肝癌细胞增殖活性。结果成功构建PAVU6-TWEAKsiRNA干涉质粒,转化肝癌细胞后肝癌细胞增殖受抑。肝癌培养体系中加入TWEAK蛋白后,肝癌细胞增殖活性有所增强。结论TWEAK蛋白可促进肝癌细胞的增殖活性,抑制TWEAK表达,一定程度上可抑制肝癌细胞增殖。

关键词： TWEAK 肝癌 RNA干涉增殖

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促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1相互作用的筛选和鉴定

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第三军医大学学报 2007年第6期29卷 482-485页

作者：张翠莉杨晓明成海恩刘涛王应雄重庆医科大学公共卫生学院生殖医学系遗传学教研室重庆400016 军事医学科学院放射医学研究所北京100850 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016 第三军医大学西南医院全军感染病研究所重庆400038

目的利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白。方法①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO。②pDB... 详细信息

目的利用酵母双杂交技术筛选线粒体促凋亡因子野生型Smac/DIABLO的相互作用蛋白。方法①设计促凋亡因子野生型Smac/DIABLO引物,利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增野生型Smac/DIABLO基因片段,构建酵母真核表达载体pDBLeu-Smac/DIABLO。②pDBLeu-Smac/DIABLO诱饵质粒转化酵母MaV203,Western blot检测融合蛋白在酵母中的正确表达,自激活作用的检测并确定抑制His基础表达的3AT浓度。③对成人肝cDNA文库的筛选。选择能同时激活His、Ura、LacZ3个报告基因的克隆为阳性,利用回转实验和GST-pull down对阳性克隆进行鉴定。结果成功构建pDBLeu-Smac/DIABLO载体,转化酵母细胞MaV203,无细胞毒性,无自激活作用,3AT浓度为25mmol/L。经回转实验和GST-pull down证实了线粒体促凋亡因子Smac/DIABLO与核受体NR4A1之间具有相互作用。结论Smac/DIABLO可能通过与核受体NR4A1的相互作用来影响核受体NR4A1对细胞生存或者凋亡的调控。

关键词： Smac/DIABLO NR4A1 酵母双杂交

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载体介导的SIRNA抑制B7-H1在星形胶质细胞上的表达

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 298-300页

作者：熊加祥许雪青白云陈雪丹王璞宋敏第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利... 详细信息

目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利用荧光载体N1平行观察转染效果,RT-PCR方法检测B7-H1的MRNA表达,免疫组化检测蛋白表达水平,以观察干扰效率。结果星形胶质细胞株CRL-2541经RNAI沉默后B7-H1MRNA表达下调,免疫组化发现其蛋白水平下降。结论成功建立具有双向启动子的SIRNA载体,并在星形胶质细胞中抑制B7-H1的表达。

关键词： RNAi B7-H1 星形胶质细胞

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PTTG1基因上调表达对A549细胞增殖和凋亡的影响

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 961-963页

作者：钱春荣刘昕刘丽莎卓勤强程英第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时... 详细信息

目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时荧光定量PCR(real-tim e fluorescent quantitation PCR)和免疫细胞化学(immunocytochem ical assay,ICA)分别检测PTTG1 mRNA及蛋白表达的改变,3H胸腺嘧啶核甙(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测凋亡情况。结果成功构建含PTTG1基因的真核表达载体,获得上调表达PTTG1的A549细胞,转染含PTTG1基因重组质粒的A549细胞增殖活性较未转染组细胞及转染空白质粒组细胞均显著增强(P<0.05);3组细胞间的凋亡率无显著差异。结论PTTG1基因能显著促进A549细胞的增殖,而对细胞凋亡没有影响。

关键词：垂体瘤转化基因1 真核表达载体 A549细胞增殖凋亡

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内毒素刺激人脐静脉内皮细胞免疫相关分子的表达

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 124-128页

作者：肖宇宏白云宋敏张利永黄钢第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细... 详细信息

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细胞HLA-DR,CD80、CD86、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-DC、HVEM、TR6、LTβR、LIGHT、OX40、OX40L等免疫相关分子的mRNA表达情况;用流式细胞仪技术检测CD40、CD137I、CAM-1蛋白的表达情况;ELISA检测细胞因子IL-6I、L-8、TNF-αI、FN-γ的含量。结果①RT-PCR结果显示,未经刺激的人脐静脉内皮细胞表达B7-H2、B7-H3、TR6、LTβR,并在LPS刺激后表达上调;B7-DC、HUVEM虽呈组成性表达,但在LPS刺激后未见变化;B7-H1、B7-H4仅在内皮细胞上为诱导表达;而CD80、CD86、LIGHT、HLA-DR、OX40无论刺激与否均未表达。②流式细胞仪检测证实其细胞表面表达少量CD137、CD40及ICAM-1,LPS刺激后其表达水平明显提高;③ELISA检测发现,内皮细胞在未激活状态下就能够分泌IL-6I、L-8和TNF-α,且LPS刺激后提高其分泌量。结论人脐静脉内皮细胞组成性表达多种免疫相关分子,LPS激活内皮细胞可以显著上调其表达。人脐静脉内皮细胞由于缺少CD80、CD86的共刺激信号,不能活化初始T细胞而只能向活化及记忆性T细胞提供共刺激信号在调节特异性免疫应答的过程中,可能会起到负调控的作用。

关键词：人脐静脉内皮细胞内毒素免疫相关分子

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esp1基因上调表达对A549细胞凋亡影响的研究

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 828-830页

作者：刘丽莎刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A54... 详细信息

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A549细胞转入esp1基因后染色体异常分裂象减少,转染后细胞增殖减少,而去血清培养诱导的凋亡增加。结论esp1的上调表达不仅对于肿瘤的异常染色体分裂象以及肿瘤细胞的异常增殖有一定的抑制作用,且对A549细胞的凋亡有促进作用。

关键词： A549细胞 esp1 转染凋亡

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大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化研究

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 291-293页

作者：王燕郭乔楠章波刘昕白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院病理科重庆400038

目的建立N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(N-METHYL-N’-NITRO-N-NITROSOGUANIDINE,MNNG)、佛波酯(12-O-TET-RADECANOYLPHORBOL-13-ACETATE,PMA)对大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化模型。方法通过克隆形成率实验确定MNNG、PMA对IEC-6细胞转化浓度,对IEC-6细胞进行分阶段多次干预。用软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度。结果经MNNG、PMA多次处理IEC-6细胞至24次后,细胞生长速度加快,排列紊乱,失去接触抑制,出现复层生长,并可在软琼脂上生长,且呈剂量反应关系,但在第24次之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内形成瘤,病理组织学证实为低分化肠上皮细胞癌。结论MNNG、PMA具有使IEC-6细胞发生恶性转化的能力。

关键词： MNNG PMA 肠上皮细胞系恶性转化大鼠

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