检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2006年第4期28卷 363-365页

作者：史树贵李露斯刘昕倪兵陈康宁第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的对重庆地区1例肌萎缩侧索硬化家系进行遗传连锁分析。方法采用位于21号染色体上的D21S223微卫星位点,经PCR扩增后进行基因型分析,应用GENEHUNTER软件包进行连锁分析。结果最大LOD值为3.06(Θ=0.10),说明该家系致病基因与21号染色体... 详细信息

目的对重庆地区1例肌萎缩侧索硬化家系进行遗传连锁分析。方法采用位于21号染色体上的D21S223微卫星位点,经PCR扩增后进行基因型分析,应用GENEHUNTER软件包进行连锁分析。结果最大LOD值为3.06(Θ=0.10),说明该家系致病基因与21号染色体上的D21S223位点连锁。结论SOD1基因突变可能是引起该家系发病的原因。

关键词：家族性肌萎缩侧索硬化连锁分析微卫星

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应用于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法

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第三军医大学学报 2006年第7期28卷 734-735页

作者：胡晓红刘昕黄正根彭惠民袁科程英高云重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的建立特异灵敏的适应于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法。方法于细菌样本离心所得沉淀中加入提取液(25%Chelex-100,0·5%NP40,TE配制,pH=9·0);56℃孵育30min;100℃水浴10min;离心后所得上清即为DNA。电泳、PCR及Real... 详细信息

目的建立特异灵敏的适应于PCR及实时荧光定量PCR的细菌DNA提取方法。方法于细菌样本离心所得沉淀中加入提取液(25%Chelex-100,0·5%NP40,TE配制,pH=9·0);56℃孵育30min;100℃水浴10min;离心后所得上清即为DNA。电泳、PCR及Real-time PCR扩增评价该方法的特异性及灵敏度。结果本方法所提细菌DNA电泳条带清晰,未见假阳性,D(260)/D(280)=(1·79±0·03);PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,灵敏度达101/ml细菌浓度。结论本研究细菌DNA提取方法特异灵敏,适应于PCR及Real-time PCR。

关键词： PCR 实时荧光定量PCR DNA提取

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PS1/APP双转基因AD模型小鼠与Aβ_(1-40)海马注射AD模型大鼠的组织病理学比较

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第三军医大学学报 2006年第16期28卷 1648-1651页

作者：李达兵唐军范晓棠宋敏徐海伟周光纪白云第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异。方法对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl’s染色结合免... 详细信息

目的对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异。方法对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl’s染色结合免疫组织化学方法观察脑内Aβ沉积和星形胶质细胞的活化情况。结果①PS1/APP双转基因AD小鼠刚果红染色显示皮质和海马内广泛圆形Aβ沉积,周围绕以胶质细胞带,免疫组化显示GFAP阳性细胞活化呈团块聚集。②AD大鼠刚果红染色显示单侧海马齿回区有Aβ斑块状沉积,Nissl’s染色显示注射针道附近海马锥体层细胞丢失,注射侧海马GFAP阳性细胞增多。结论Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠尽管可以模拟人类AD疾病的部分特征病理改变,但是不能模拟疾病渐进性的病理学改变。PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理改变与渐进性过程,是较为理想的实验动物模型,但该模型未发现细胞丢失。

关键词：阿尔茨海默病转基因小鼠大鼠 β淀粉样多肽

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NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及功能鉴定

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 132-136页

作者：徐祥梁华平刘昕李生茂史海水刘东擘吴强王正国第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的以NF-κB p65亚基DNA结合域为诱饵蛋白,筛选能够与其发生相互作用的多肽,并鉴定这些多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。方法首先利用PCR搭桥扩增方法获取NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,后将其克隆到酵母双杂交pGBKT7DNA-BD... 详细信息

目的以NF-κB p65亚基DNA结合域为诱饵蛋白,筛选能够与其发生相互作用的多肽,并鉴定这些多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。方法首先利用PCR搭桥扩增方法获取NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,后将其克隆到酵母双杂交pGBKT7DNA-BD载体上,与GAL4DNA-BD融合,形成GAL4DNA-BD/p65BD融合蛋白;再以GAL4DNA-BD/p65BD融合蛋白为诱饵蛋白行酵母双杂交实验,自16肽随机肽库中筛选与NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用的多肽;最后选择性人工合成筛选获得的多肽,并进行EMSA实验检测相互作用多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应。结果扩增获得了NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,并成功构建pGBKT7DNA-BD/p65BD载体。自1.28×107个酵母转化子中最终筛选获得5个阳性克隆,测序结果和同源氨基酸序列比对表明5个阳性多肽为p65BD新型相互作用多肽,其中4条多肽拥有一个共同的基序。EMSA实验结果表明合成的两条多肽对NF-κB的DNA结合活性均具有一定的抑制效应。结论经初筛、复选和假阳性鉴定,自16肽库中获得5个能与NF-κB p65亚基发生相互作用的新型多肽,并已证实其中两条多肽对NF-κB的DNA结合活性具有抑制效应。

关键词： NF-κB p65 酵母双杂交系统随机多肽库

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A549细胞转染esp1基因后生物学行为的变化

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郑州大学学报（医学版） 2006年第5期41卷 884-886页

作者：刘丽莎刘昕刘永康第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的:观察A549细胞转染esp1基因后细胞生物学行为的改变。方法:将IRE-EGFP-esp1质粒用Fu-GENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系(esp1-A549)。采用DNA荧光染色流式细胞仪分析转染后细胞DNA含量、倍性及细胞周... 详细信息

目的:观察A549细胞转染esp1基因后细胞生物学行为的改变。方法:将IRE-EGFP-esp1质粒用Fu-GENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系(esp1-A549)。采用DNA荧光染色流式细胞仪分析转染后细胞DNA含量、倍性及细胞周期,计算S期细胞比率(SPF)和DNA指数(DI);采用细胞表面磷脂酰丝氨酸检测法和闪烁计数法分别检测细胞凋亡和增殖情况,同时检测软琼脂集落形成能力。以未转染(A549)、转染空载体(neo-A549)的细胞作对照。结果:与其他2组比较,esp1-A549细胞的DI、SPF及细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高。esp1-A549细胞软琼脂集落形成数为3.5±0.6,克隆形成率为12.5%,低于A549细胞的23.3±0.2(t=4.93,P=0.004)和46%。结论:esp1基因的上调表达对A549细胞部分恶性生物学表型具有一定的抑制作用。

关键词： esp1基因 A549细胞肿瘤凋亡增殖克隆形成细胞周期 DNA倍性

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Tet-on系统诱导esp1基因表达对A_(549)细胞染色体的影响

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重庆医学 2006年第20期35卷 1862-1864页

作者：刘丽莎刘昕程英第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统，先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞，经G418和潮霉素... 详细信息

目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统，先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞，经G418和潮霉素筛选成活并带有绿色荧光的细胞为转染成功细胞，挑选8个单细胞克隆并扩增培养，加入强力霉素诱导espl表达。用RT-PCR检测不同浓度强力霉素诱导以及强力霉素诱导不同时间的espl的表达量，并采用传统秋水仙素方法以及流式细胞技术检测诱导不同时间段A549／Ptet-on／TK-Hyg／PTRE-EGFP-espl细胞克隆染色体数目的改变。结果100～200ng／ml浓度范围的强力霉素诱导espl表达量最高，诱导1h即可有espl基因的表达，至48h表达量到达高峰之后逐步减少。在诱导24h后逐步出现染色体数目减少。结论上调espl基因对肿瘤细胞异常染色体有一定的抑制作用，对肿瘤治疗有潜在的应用价值。

关键词： A549细胞 espl PTet-on 强力霉素染色体

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esp1基因过表达可诱导肿瘤细胞凋亡

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河北医科大学学报 2006年第4期27卷 246-250页

作者：刘丽莎刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的研究esp1基因转染进入A549细胞后对细胞凋亡的影响。方法将含esp1基因的IRE-EGFP质粒经FUGENE 6转染试剂转染到肺腺癌细胞A549,用倒置显微镜及流式细胞仪检测转染后细胞染色体数以及转染后细胞凋亡及增殖的情况。结果esp1基因导入A... 详细信息

目的研究esp1基因转染进入A549细胞后对细胞凋亡的影响。方法将含esp1基因的IRE-EGFP质粒经FUGENE 6转染试剂转染到肺腺癌细胞A549,用倒置显微镜及流式细胞仪检测转染后细胞染色体数以及转染后细胞凋亡及增殖的情况。结果esp1基因导入A549细胞后,染色体数目减少,无血清培养后细胞凋亡增加,增殖减少。结论esp1基因在A549细胞中不但可以显著地改善细胞的非整倍性而且可以有效地抑制细胞恶性增殖、促进细胞凋亡,从而为肺癌的治疗提供了一个新的靶标。

关键词：基因表达肿瘤细胞凋亡

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实时荧光定量检测小型猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平

实时荧光定量检测小型猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平

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中国实验动物学会第七届学术年会

作者：杨家大商海涛魏泓杨婉身刘昕四川农业大学生命科学与理学院生物化学教研室第三军医大学基础部动物学教研室第三军医大学基础部动物学教研室四川农业大学生命科学与理学院生物化学教研室第三军医大学基础部分子遗传学教研室

CYP3A29是猪肝脏最重要的药物代谢关键酶,研究其mRNA在肝脏的表达特性对于将猪用于人CYP3A4介导的药理学研究及药物代谢动物模型提供重要支持。本研究以β-actin作校正,利用TaqMan绝对定量技术对巴马香猪、贵州小型香猪肝脏CYP3A29 mRN... 详细信息

CYP3A29是猪肝脏最重要的药物代谢关键酶,研究其mRNA在肝脏的表达特性对于将猪用于人CYP3A4介导的药理学研究及药物代谢动物模型提供重要支持。本研究以β-actin作校正,利用TaqMan绝对定量技术对巴马香猪、贵州小型香猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平进行检测,并以荣昌猪作为对照。结果表明,巴马香猪、贵州小型香猪、荣昌猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平与报道的人肝脏CYP3A4相接近;三品系(种)猪间肝脏CYP3A29 mRNA表达水平较为接近, 但品系(种)内个体间变异较大。

关键词：巴马香猪 CYP3A29 TaqMan定量

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星形胶质细胞抑制T细胞增殖及机制探讨

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第三军医大学学报 2005年第20期27卷 2020-2023页

作者：熊加祥白云宋敏许雪青王艳艳杨晓亚第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的初步探讨星形胶质细胞影响T细胞增殖作用及机制。方法利用分离培养小鼠原代星形胶质细胞,以LPS和IFNγ刺激细胞活化,用RTPCR方法检测非活化与活化状态的星形胶质细胞B7.2、B7.1、MHCⅡ和B7H1等免疫分子的表达情况;将不同状态的细胞... 详细信息

目的初步探讨星形胶质细胞影响T细胞增殖作用及机制。方法利用分离培养小鼠原代星形胶质细胞,以LPS和IFNγ刺激细胞活化,用RTPCR方法检测非活化与活化状态的星形胶质细胞B7.2、B7.1、MHCⅡ和B7H1等免疫分子的表达情况;将不同状态的细胞分别与PHA刺激活化的小鼠T细胞进行共培养,观测其对T细胞增殖的影响,并分析可能的机制。结果小鼠原代星形胶质细胞在非活化状态下组成性表达B7.2和B7H1mRNA,在LPS和IFNγ刺激活化24h后B7H1的表达减少,而同时诱导表达MHCⅡ和B7.1mRNA,而TNFα作用不明显;非活化的星形胶质细胞对PHA刺激活化的T细胞增殖具有明显的抑制作用,而活化的星形胶质细胞的抑制作用减弱。结论小鼠星形胶质细胞在非活化及活化状态下对T细胞增殖具有不同的作用,其机制可能与其表达不同的免疫分子有关。

关键词：星形胶质细胞免疫分子 T细胞增殖

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Separase上调对肿瘤细胞染色体分离作用的研究及条件表达载体的构建

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第三军医大学学报 2005年第6期27卷 497-499页

作者：由莉越刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　研究esp1在肺腺癌细胞株spc细胞中对染色体分离的作用,为肿瘤的基因治疗探索新的方法。方法　将已有的含esp1基因的EGFP N1质粒转染spc细胞,检测其转染效率及对染色体分裂相的影响。同时构建能依赖四环素调控的含有esp1基因... 详细信息

目的　研究esp1在肺腺癌细胞株spc细胞中对染色体分离的作用,为肿瘤的基因治疗探索新的方法。方法　将已有的含esp1基因的EGFP N1质粒转染spc细胞,检测其转染效率及对染色体分裂相的影响。同时构建能依赖四环素调控的含有esp1基因的pTRE- d2EGFP质粒载体。结果　表达载体EGFP N1 esp1转染成功,染色体异常分裂相减少。表达载体pTRE -d2EGFP esp1构建成功。结论　esp1的上调表达对于肿瘤的异常染色体分裂相有一定的抑制作用,对于肿瘤治疗有潜在的应用价值。

关键词： spe细胞 esp1 转染四环素

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