检索结果-内蒙古大学图书馆

陆军军医大学学报 2022年第1期44卷 9-15页

作者：徐文岳徐小峰陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院病原生物学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院医学遗传学教研室重庆400038

虫媒病不但是全球公共卫生问题,而且也是影响世界各国军队卫勤保障的重要问题。媒介生物的有效控制和叮咬防护手段的研制能从群体水平上控制和预防各种虫媒病的流行和传播,而针对具体虫媒病的特异性疫苗和药物的研制则能有效预防特定虫... 详细信息

虫媒病不但是全球公共卫生问题,而且也是影响世界各国军队卫勤保障的重要问题。媒介生物的有效控制和叮咬防护手段的研制能从群体水平上控制和预防各种虫媒病的流行和传播,而针对具体虫媒病的特异性疫苗和药物的研制则能有效预防特定虫媒病的感染。虽然目前在媒介生物控制、驱避剂和疟疾疫苗研制等方面取得了显著的进展,但仍然缺乏安全、高效的虫媒病防控手段,有待于在基因驱动改造媒介生物种群、昆虫寻找宿主和机体抗虫媒病原体保护性免疫机制等方面展开深入研究。

关键词：虫媒病媒介生物防控叮咬防护疫苗卫勤保障

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人PD1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定

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免疫学杂志 2005年第6期21卷 460-462,467页

作者：段文元白云张华欣姜曼黎万玲第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038

目的利用基因工程手段构建hPD1Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hPD1Fc融合蛋白。方法PCR方法扩增编码hPD1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pcDNA3.1(+)片段连接,构建成hPD1Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法... 详细信息

目的利用基因工程手段构建hPD1Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hPD1Fc融合蛋白。方法PCR方法扩增编码hPD1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pcDNA3.1(+)片段连接,构建成hPD1Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清液中融合蛋白hPD1Fc的表达,经ProteinA亲合层析纯化,SDSPAGE、免疫印迹鉴定表达产物。结果PCR扩增得到编码人PD1全长的288aa编码基因片段,将其膜外区167aa的编码序列与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pcDNA3.1(+)表达质粒。重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清液中有hPD1Fc蛋白表达。纯化后的hPD1Fc蛋白经SDSPAGE和免疫印迹鉴定其相对分子质量约42800,与理论预测值相符。结论成功构建了hPD1Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hPD1Fc融合蛋白,为进一步研究PD1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础。

关键词： PD-1-Fc 基因工程真核表达

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小胶质细胞表达OX40L对T细胞增殖与凋亡的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第9期26卷 805-811页

作者：王艳艳李茂全宋敏白云 400038 重庆第三军医大学医学遗传学教研室成都医学院公共卫生学教研室

目的鉴定免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用.方法通过RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋... 详细信息

目的鉴定免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用.方法通过RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋白水平的表达变化,细胞免疫化学法鉴定原代小胶质细胞上OX40L表达情况.体外将小胶质细胞株N9与活化后T细胞共培养并阻断OX40L信号后,3H-TdR掺入实验和FITC-annexin-Ⅴ/PI荧光染色方法分别检测T细胞的增殖和凋亡情况,ELISA检测T细胞分泌IL-2的水平.结果小胶质细胞株N9活化前后均有OX40L表达,其蛋白表达率由23%增加为94%;原代小胶质细胞活化后表达OX40L.小胶质细胞表达OX40L后显著增强了T细胞增殖和IL-2分泌,抑制了T细胞凋亡.结论小胶质细胞活化后表达OX40L分子,OX40L-OX40信号可促进活化后T细胞增殖,抑制其凋亡,从而可能在维持中枢神经系统内T细胞免疫应答效应中发挥重要作用.有助于了解中枢神经系统内固有细胞和T细胞的相互作用机制,进一步认识OX40L的表达及功能.

关键词：小胶质细胞 T淋巴细胞共刺激分子 OX40L 中枢神经系统

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B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定

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第三军医大学学报 2007年第1期29卷 24-27页

作者：张立群段文元许雪青黄钢陈雪丹白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7... 详细信息

目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7-H1表达载体用L ipofectam ineTM2000转染293FT细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16F10细胞后,加入含B lastic id in(终浓度为4.0μg/m l)的RPM I1640培养基,筛选出稳定表达B7-H1蛋白的B16F10细胞株。结果PCR扩增得到编码小鼠B7-H1的877 bp基因片段,与预期大小一致。B7-H1重组慢病毒感染B16F10细胞后,用B7-H1单抗进行免疫组化检测,荧光显微镜观察显示B7-H1分子表达于B16F10细胞。FACS测定B16F10细胞荧光阳性率为36%。结论成功构建了B7-H1慢病毒表达载体,包装出感染性病毒颗粒,重组慢病毒感染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H1膜表面蛋白,为进一步研究B7-H1分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础。

关键词： B7-H1 慢病毒基因治疗

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MTF-1对食管鳞癌EC109细胞株生长和迁移的影响

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 750-754页

作者：傅莉媛熊刚李娟张坤戴礼猛白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的研究外源性金属反应转录因子-1(metal-responsive transcription factor-1,MTF-1)对食管鳞癌EC109细胞的增殖、凋亡、迁移及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法构建MTF-1真核表达载体pcDNA3.1-MTF-1,转染EC109细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测MTF-1 mRNA和蛋白水平的表达。采用CCK-8法检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果与转染pcDNA3.1的对照组相比,转染pcDNA3.1-MTF-1显著上调了EC109细胞中MTF-1表达量。过表达MTF-1 48 h后,EC109细胞生长显著加快(P<0.01);细胞凋亡率降低(P<0.05);细胞周期比例发生显著改变,G1期细胞比例降低(P<0.01),S期细胞比例升高(P<0.01);细胞迁移能力无显著改变。结论 MTF-1通过抑制细胞凋亡、促进细胞周期G1到S期的转换进而促进食管鳞癌EC109细胞的生长,但对EC109的迁移能力没有显著影响。

关键词：金属反应转录因子1 食管鳞癌细胞增殖细胞迁移

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一种真核生物染色质隔离子筛选方案的初步建立

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第三军医大学学报 2007年第17期29卷 1688-1691页

作者：章波王燕许雪青白云杨晓亚第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的探讨建立染色质隔离子的正负筛选工具的可行性。方法合成引物从鸡基因组cHS4区域扩增了1段特异的DNA,将PCR产物克隆到T-载体后测序,验证其对增强子的阻断功能;对pEGFP-N1载体进行一系列改造,评价其正负筛选效果。结果成功地获得已... 详细信息

目的探讨建立染色质隔离子的正负筛选工具的可行性。方法合成引物从鸡基因组cHS4区域扩增了1段特异的DNA,将PCR产物克隆到T-载体后测序,验证其对增强子的阻断功能;对pEGFP-N1载体进行一系列改造,评价其正负筛选效果。结果成功地获得已知的隔离子片段,初步结果表明该片断能阻断增强子的转录激活作用。将TK基因作为负向筛选标记引入pEGFP-N1载体后获得了改造后的载体,转染COS-7细胞经过G418筛选10d后获得了稳定转染的细胞系,在不同浓度GCV药物作用下细胞杀伤效果有差异。结论正负筛选方法被成功地引入到筛选系统,为进一步进行染色质隔离子的筛选与利用奠定了基础。

关键词：染色质隔离子增强子基因表达

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重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达

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第三军医大学学报 2007年第9期29卷 806-809页

作者：宋敏白云段文元章波杨晓亚许雪青第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIPmRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,利... 详细信息

目的构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIPmRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测。PCR、免疫荧光鉴定pAdeasy-VIP感染293细胞后VIP基因的表达,ELISA检测重组病毒转染后293细胞上清中的表达。结果测序、酶切证实VIP基因重组腺病毒载体构建成功。RT-PCR,免疫荧光检测pAdeasy-VIP病毒感染的293细胞,均有VIP的表达。与对照组相比,重组病毒转染后293细胞上清中VIP多肽的表达明显增高。结论成功构建了含小鼠VIP基因的重组腺病毒载体,并成功表达VIP多肽。

关键词：血管活性肠肽腺病毒基因治疗

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脊髓小脑性共济失调一家系的遗传学研究

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第三军医大学学报 2011年第11期33卷 1152-1154页

作者：刘丹郭洪王凯白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的对一个常染色体显性遗传的脊髓小脑共济失调家系(spinocerebellar ataxias,SCA)进行基因诊断并探讨其临床特点。方法完成家系调查和系谱分析,通过聚合酶链式反应和直接测序的方法对收集到的家系成员进行脊髓小脑性共济失调致病基因... 详细信息

目的对一个常染色体显性遗传的脊髓小脑共济失调家系(spinocerebellar ataxias,SCA)进行基因诊断并探讨其临床特点。方法完成家系调查和系谱分析,通过聚合酶链式反应和直接测序的方法对收集到的家系成员进行脊髓小脑性共济失调致病基因CAG三核苷酸重复数目的检测。结果该家系呈常染色体显性遗传模式,家系中3名患者均于30岁后逐渐表现为行走不稳、饮水呛咳、言语不清等共济失调的临床特征。对所有家系成员进行基因诊断,结果发现,SCA2和SCA3致病基因的CAG重复数目均在正常范围内;而家系中3名患者SCA1致病基因出现异常等位基因,CAG扩增次数分别为43、48和51次,另有2名成员GAG重复次数分别为53次和50次,诊断为症状前患者。结论该家系为三核苷酸重复序列(CAG)动态突变引起的常染色体显性遗传脊髓小脑共济失调Ⅰ型,基因诊断还发现家系中2名症状前患者。

关键词：脊髓小脑性共济失调动态突变基因诊断

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人B7-H1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2197-2200页

作者：张华欣段文元白云黄钢第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白。方法PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pC I-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体... 详细信息

目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白。方法PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pC I-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清中融合蛋白hB7-H1-Fc的表达,经Prote in A亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物。结果PCR扩增得到编码人B7-H1膜外区的727bp基因片段,与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pC I-neo表达质粒。重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清中有hB7-H1-Fc蛋白表达。纯化后的hB7-H1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其分子质量约51.76×103,与理论预测值相符。结论成功构建了hB7-H1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白,为进一步研究B7-H1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础。

关键词： B7-H1-Fc 基因工程真核表达

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B7-H4——免疫调控以及肿瘤治疗的新靶点

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免疫学杂志 2006年第z1期22卷 6-9页

作者：段文元白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

B7-H4又称B7s1或B7x,是B7家族中的最新发现的一个新成员,它能通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答,同时大量表达B7-H4还可以促进上皮细胞的恶性转化,保护表皮细胞免于失巢凋亡,在肿瘤的发生... 详细信息

B7-H4又称B7s1或B7x,是B7家族中的最新发现的一个新成员,它能通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答,同时大量表达B7-H4还可以促进上皮细胞的恶性转化,保护表皮细胞免于失巢凋亡,在肿瘤的发生,进展和转归中发挥重要作用。对B7-H4信号通路的进一步的研究必将为自身免疫性疾病、病毒感染性疾病和器官移植后排斥反应中T细胞介导的免疫应答调控提供了新的途径,同时也为肿瘤的诊断、治疗提供崭新的策略。

关键词： B7-H4 免疫逃逸共刺激信号

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