检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2003年第24期25卷 2185-2188页

作者：黄钢黎万玲姜曼白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部免疫学研室所重庆400038

目的　构建人CD13 7 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人CD13 7 Fc融合蛋白。方法　从cDNA文库中用PCR扩增CD13 7全长编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,,酶切后与hIgG1Fc... 详细信息

目的　构建人CD13 7 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人CD13 7 Fc融合蛋白。方法　从cDNA文库中用PCR扩增CD13 7全长编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,,酶切后与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,转染 2 93T细胞瞬时表达 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE与免疫印迹进行鉴定。结果　测序证实构建的CD13 7与CD13 7 FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA证实CD13 7 Fc蛋白的表达 ;SDS PAGE与免疫印迹证实其为人CD13 7 Fc蛋白。结论　获得了纯化的hCD13 7 Fc融合蛋白 ,为探讨CD13 7在免疫自稳调节中的地位 ,以及探索CD13 7的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础。

关键词：人 CD137 CD137-Fc 真核表达

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非小细胞肺癌E-钙粘蛋白基因异常的研究

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第三军医大学学报 2003年第9期25卷 792-794页

作者：张国桥王志新刘昕第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤治疗中心重庆400037 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　观察非小细胞肺癌组织中E 钙粘蛋白 (E cadherin)的基因异常。方法　采用PCR SSCP及序列分析 ,研究了 2 4例非小细胞患者肺癌组织中E cadherin基因外显子 6、7、8、9的基因突变。结果　 2 4例非小细胞肺癌中发现 2例存在E cadheri... 详细信息

目的　观察非小细胞肺癌组织中E 钙粘蛋白 (E cadherin)的基因异常。方法　采用PCR SSCP及序列分析 ,研究了 2 4例非小细胞患者肺癌组织中E cadherin基因外显子 6、7、8、9的基因突变。结果　 2 4例非小细胞肺癌中发现 2例存在E cadherinexon9的基因插入、缺失及突变。结论　E cadherin在非小细胞肺癌中存在基因异常改变 ,尤其集中在E cadherin的细胞外区域 ,主要表现为插入及缺失。

关键词：非小细胞肺癌 E-cadherin基因多聚酶链式反应-单链构象多肽性

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p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测

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第三军医大学学报 2003年第2期25卷 123-126页

作者：徐祥梁华平刘昕代佳平刘琛罗艳王正国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室重庆400042 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法　利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法... 详细信息

目的　获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法　利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH10 9,在SD Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况。按尿素 SDS法抽提酵母蛋白 ,用SDS PAGE电泳和Western blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株 β 半乳糖苷酶的活性。结果　获得p65DNA结合域基因片段 ,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达 ,对酵母细胞无毒性作用 ,无自身激活活性。结论　NF κBp65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因 ,用于肽库筛选。

关键词： p65 DNA结合域克隆核因子κB 酵母双杂交自身激活作用酵母表达炎症反应

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压电石英晶体甲胎蛋白免疫传感器的实验研究

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第三军医大学学报 2003年第13期25卷 1174-1177页

作者：张波府伟灵毛琼国陈庆海蒋天伦张雪陈鸣汤万里俞凡第三军医大学附属西南医院检验科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 中国嘉陵集团生物工程办公室重庆400032 信息产业部第26研究所重庆400060

目的　构建一种新型压电甲胎蛋白 (AFP)免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定组成检测池 ,抗人AFP单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电AFP免疫传感器。结果　构建... 详细信息

目的　构建一种新型压电甲胎蛋白 (AFP)免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定组成检测池 ,抗人AFP单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电AFP免疫传感器。结果　构建的压电AFP免疫传感器对AFP的响应特性良好 ,其线性检测范围为 2 0～ 10 0 0ng ml ,癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原 (PSA)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)等对AFP的检测基本无干扰 ;传感器可再生后重复使用 5次 ;68例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合 ,两种方法的相关系数为 0 92 ,P <0 0 1。结论　研制的压电AFP免疫传感器是一种灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能重复使用和实时在线检测AFP的新方法 ,对比实验表明其检测结果准确 ,能用于临床实验诊断 ,具有临床推广价值。

关键词：压电传感器免疫甲胎蛋白

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中国海南黎族永生B细胞系的建立与保存

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第三军医大学学报 2003年第15期25卷 1348-1348,1351页

作者：李冬娜应大君区采莹符生苗褚嘉薛雅丽黄小义第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆400038 海南医学院海口571101 海南省人民医院遗传研究室海口570311 中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118 哈尔滨医科大学遗传学教研室哈尔滨150086

继人类基因组计划之后 ,人类基因组多样性计划 (HumanGenomeDiversityProject ,HGDP )已成为世界科学研究的热点之一。从世界各地采集不同人群的标本并建立永生细胞系 ,是HGDP的重要内容[1～ 3] 。黎族是中华民族的重要成员 ,集居海南... 详细信息

继人类基因组计划之后 ,人类基因组多样性计划 (HumanGenomeDiversityProject ,HGDP )已成为世界科学研究的热点之一。从世界各地采集不同人群的标本并建立永生细胞系 ,是HGDP的重要内容[1～ 3] 。黎族是中华民族的重要成员 ,集居海南岛。语言属汉藏语系壮侗语族黎语支。根据方言、文化特征及人种学上的差异 ,又分为亻孝黎、杞黎、本地黎、美孚黎和加茂黎五个支系[4 ] 。由海南省特殊地理环境和历史所铸就的黎族基因组 ,必将成为我国进行HGDP研究 ,构造遗传资源中心的重要信息来源。本研究成功地对中国海南省亻孝黎、杞黎、本地黎的部分个体建立了永生B细胞系。1　材料和方

关键词：永生细胞系少数民族 EB病毒

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压电C肽免疫传感器的实验研究

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第三军医大学学报 2002年第12期24卷 1439-1442页

作者：张波府伟灵毛琼国汤万里俞凡第三军医大学附属西南医院检验科第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 中国嘉陵集团生物工程办公室重庆400032 信息产业部第26研究所重庆400060

目的　构建一种新型压电C肽免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定形成检测池 ,抗人C肽单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电C肽免疫传感器。结果　构建的压电C肽免... 详细信息

目的　构建一种新型压电C肽免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定形成检测池 ,抗人C肽单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电C肽免疫传感器。结果　构建的压电C肽免疫传感器对C肽的响应特性良好 ,其线性检测范围为 0 3 75～ 12 0ng ml ,胰岛素、胰岛素原对C肽的检测基本无干扰 ,传感器可再生后重复使用 5次 ;5 8例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合 (P >0 0 5 ) ,两种方法的相关系数为 0 94。结论　研制的压电C肽免疫传感器具有灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能实时在线检测和重复使用等优点 ,对比实验表明其检测结果准确 ,能用于临床实验诊断 ,具有临床推广价值。

关键词：实验研究传感器免疫 C肽压电

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细胞膜表面标志CD系列抗体蛋白芯片制备及应用的研究

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第三军医大学学报 2002年第1期24卷 43-46页

作者：王燕刘昕缪金明申大忠杨梦苏第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 上海第一医科大学瑞金医院上海200025 山东大学化学学院济南250000 香港城市大学生物化学系

目的　本研究利用抗原抗体免疫反应的原理 ,研制一种可同时快速检测多种蛋白的蛋白芯片 ,用于细胞膜表面抗原的检测。方法　将抗细胞表面标志CD抗原的CD系列抗体蛋白固定在醛基玻片上形成微阵列 ,从样品细胞中抽提膜蛋白抗原并用FSE标... 详细信息

目的　本研究利用抗原抗体免疫反应的原理 ,研制一种可同时快速检测多种蛋白的蛋白芯片 ,用于细胞膜表面抗原的检测。方法　将抗细胞表面标志CD抗原的CD系列抗体蛋白固定在醛基玻片上形成微阵列 ,从样品细胞中抽提膜蛋白抗原并用FSE标记 ,然后与固定在芯片上的CD抗体阵列反应 ,扫描仪检测反应结果。结果　本研究选用HL 60 ,K562 ,NB4,Jurkat细胞株为代表 ,测定到细胞膜表面蛋白质CD抗原HL 60、K562、NB4、Jurkat细胞CD1 3均为阳性 ,HL 60、NB4、Jurkat细胞CD4阳性 ,NB4细胞CD3 8阳性 ,K562细胞CD7阳性。所得结果与免疫印迹及免疫组织化学验证等方法一致。结论　HL 60 ,K562 ,NB4,Jurkat细胞膜表面蛋白质CD抗原有差异。蛋白芯片方法具有的高信息通量、低成本、制备、测定快速简单的优点。

关键词： CD抗体膜蛋白蛋白芯片细胞膜表面标志

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银染单链构象多态性技术检测人IL-3基因突变

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第三军医大学学报 2001年第11期23卷 1358-1359页

作者：毛琼国刘昕王燕梁红第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法　将野生型和突变型的人白介素 ... 详细信息

目的　对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法　将野生型和突变型的人白介素 3(hIL 3)cDNA连接到PUC9和PUC19质粒载体上 ,转化入大肠杆菌 ,扩增质粒 ,用常规方法抽提 ,酶切 ,然后将酶切后的DNA片段进行PAGE胶电泳 ,银染检测野生型和突变型的异同。结果　以野生型hIL 3cDNA作为对照 ,连接到PUC9和PUC19上的电泳结果均为一致 ,突变型hIL 3cDNA的电泳带明显比野生型的电泳带靠后。结论　SSCP方法具有简便 ,快捷较灵敏的特点 ,对人白细胞介素 3(hIL 3)基因的点突变得到进一步的鉴定。

关键词：单链构象多态性人白细胞介素-3 基因突变基因诊断

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hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

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第三军医大学学报 2000年第1期22卷 33-35页

作者：王燕毛琼国万瑛纪贤文刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的 :将天然型hIL 3蛋白经定点突变为hIL 3突变体蛋白 ,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法 :超声破碎细菌得到包涵体 ,经DEAEFastFlow,SephaecrylS 200HR等层析步骤纯化。结果 :经以上一系列纯化 ,得到的人IL 3突变体蛋白纯度达90 % ,比... 详细信息

目的 :将天然型hIL 3蛋白经定点突变为hIL 3突变体蛋白 ,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法 :超声破碎细菌得到包涵体 ,经DEAEFastFlow,SephaecrylS 200HR等层析步骤纯化。结果 :经以上一系列纯化 ,得到的人IL 3突变体蛋白纯度达90 % ,比活性为7.3×104 U/ml ,总回收率为100 %。结论 :突变体hIL 3在大肠杆菌中得到高效表达 ,并获得高纯度、高活性的hIL 3蛋白。

关键词： hIL-3突变体大肠杆菌纯化免疫分子遗传学

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大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛模型的制备

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陆军军医大学学报 2000年第3期22卷 295-297页

作者：代佳平冯华刘昕王宪荣第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室!重庆400038 第三军医大学附属西南医院神经外科!重庆400038

目的 :为了深入研究SAH后CVS的发生机制及其治疗效果。方法 :42只大鼠随机分 :A组 :正常对照组 ;B组 :注射 0 9%氯化钠对照组 ;C组 :采用 0 1、0 2、0 3、0 4、0 5ml自体动脉血注入大鼠枕大池制作CVS模型。观察大鼠的存活、临床... 详细信息

目的 :为了深入研究SAH后CVS的发生机制及其治疗效果。方法 :42只大鼠随机分 :A组 :正常对照组 ;B组 :注射 0 9%氯化钠对照组 ;C组 :采用 0 1、0 2、0 3、0 4、0 5ml自体动脉血注入大鼠枕大池制作CVS模型。观察大鼠的存活、临床表现、血压、血气分析、rCBF测定及病理学检查等。结果 :B组大鼠均存活 ,临床表现典型及和病理学改变轻微 ,与A组差异不明显。C4 :大鼠均存活 ,但反应迟钝 ,自洁性差 ,血压短暂升高 ,rCBF下降明显 ,持续时间长 ;颅底出血 ,颅底动脉管壁破坏、层次结构消失 ,与B组差别显著。C1～ 3组大鼠死亡率高。C5组大鼠临床表现肌病理改变不明显。结论 :注射 0 2ml时 ,大鼠存活率高 ,临床表现典型 ,rCBF降低和病理改变明显 ,而且与慢性出血性脑血管痉挛相一致 ,是最理想的CVS模型。

关键词：蛛网膜下腔出血脑血管痉挛

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