检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2006年第2期22卷 124-128页

作者：肖宇宏白云宋敏张利永黄钢第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细... 详细信息

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细胞HLA-DR,CD80、CD86、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-DC、HVEM、TR6、LTβR、LIGHT、OX40、OX40L等免疫相关分子的mRNA表达情况;用流式细胞仪技术检测CD40、CD137I、CAM-1蛋白的表达情况;ELISA检测细胞因子IL-6I、L-8、TNF-αI、FN-γ的含量。结果①RT-PCR结果显示,未经刺激的人脐静脉内皮细胞表达B7-H2、B7-H3、TR6、LTβR,并在LPS刺激后表达上调;B7-DC、HUVEM虽呈组成性表达,但在LPS刺激后未见变化;B7-H1、B7-H4仅在内皮细胞上为诱导表达;而CD80、CD86、LIGHT、HLA-DR、OX40无论刺激与否均未表达。②流式细胞仪检测证实其细胞表面表达少量CD137、CD40及ICAM-1,LPS刺激后其表达水平明显提高;③ELISA检测发现,内皮细胞在未激活状态下就能够分泌IL-6I、L-8和TNF-α,且LPS刺激后提高其分泌量。结论人脐静脉内皮细胞组成性表达多种免疫相关分子,LPS激活内皮细胞可以显著上调其表达。人脐静脉内皮细胞由于缺少CD80、CD86的共刺激信号,不能活化初始T细胞而只能向活化及记忆性T细胞提供共刺激信号在调节特异性免疫应答的过程中,可能会起到负调控的作用。

关键词：人脐静脉内皮细胞内毒素免疫相关分子

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PTTG ESP1在A549 SPC-A-1细胞株SG_2/M期的表达

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第三军医大学学报 2005年第8期27卷 710-712页

作者：罗勇军刘昕钱春荣第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨PTTG (pituitarytumortransforminggene)、ESP1(estradiol stimulatedprotein 1)在A5 49、SPC A 1细胞S、G2 M期的表达。方法　用双胸苷同步化法同步化A5 49、SPC A 1细胞及MRC 5细胞,分别收集S、G2 M期总RNA ,做Real timePCR。结果　PTTG在A5 49细胞和SPC A 1细胞的S期表达比G2 M期表达高,在MRC 5细胞的在S、G2 M期中PTTG均无表达;ESP1在A5 49细胞与SPC A 1细胞及MRC 5细胞的S期表达均比G2 M期表达低。结论　PTTG在MRC 5的S、G2 M期都无表达,在A5 49、SPC A 1的S期比G2 M期表达增高,提示肿瘤细胞的染色体非整倍体与PTTG的表达增高有关;ESP1在MRC 5和A5 49、SPC A 1的S期比G2 M期表达低,说明细胞中姐妹染色体的分离主要依靠于ESP1在G2 M期被激活,而导致姐妹染色体的分离。

关键词： ESP1 PITG 实时荧光定量PCR 细胞同步化

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esp1基因上调表达对A549细胞凋亡影响的研究

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 828-830页

作者：刘丽莎刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A54... 详细信息

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A549细胞转入esp1基因后染色体异常分裂象减少,转染后细胞增殖减少,而去血清培养诱导的凋亡增加。结论esp1的上调表达不仅对于肿瘤的异常染色体分裂象以及肿瘤细胞的异常增殖有一定的抑制作用,且对A549细胞的凋亡有促进作用。

关键词： A549细胞 esp1 转染凋亡

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人重组CD137-Fc分子的构建与真核表达

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第三军医大学学报 2003年第24期25卷 2185-2188页

作者：黄钢黎万玲姜曼白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部免疫学研室所重庆400038

目的　构建人CD13 7 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人CD13 7 Fc融合蛋白。方法　从cDNA文库中用PCR扩增CD13 7全长编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,,酶切后与hIgG1Fc... 详细信息

目的　构建人CD13 7 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人CD13 7 Fc融合蛋白。方法　从cDNA文库中用PCR扩增CD13 7全长编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,,酶切后与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,转染 2 93T细胞瞬时表达 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE与免疫印迹进行鉴定。结果　测序证实构建的CD13 7与CD13 7 FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA证实CD13 7 Fc蛋白的表达 ;SDS PAGE与免疫印迹证实其为人CD13 7 Fc蛋白。结论　获得了纯化的hCD13 7 Fc融合蛋白 ,为探讨CD13 7在免疫自稳调节中的地位 ,以及探索CD13 7的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础。

关键词：人 CD137 CD137-Fc 真核表达

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银染单链构象多态性技术检测人IL-3基因突变

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第三军医大学学报 2001年第11期23卷 1358-1359页

作者：毛琼国刘昕王燕梁红第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法　将野生型和突变型的人白介素 ... 详细信息

目的　对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法　将野生型和突变型的人白介素 3(hIL 3)cDNA连接到PUC9和PUC19质粒载体上 ,转化入大肠杆菌 ,扩增质粒 ,用常规方法抽提 ,酶切 ,然后将酶切后的DNA片段进行PAGE胶电泳 ,银染检测野生型和突变型的异同。结果　以野生型hIL 3cDNA作为对照 ,连接到PUC9和PUC19上的电泳结果均为一致 ,突变型hIL 3cDNA的电泳带明显比野生型的电泳带靠后。结论　SSCP方法具有简便 ,快捷较灵敏的特点 ,对人白细胞介素 3(hIL 3)基因的点突变得到进一步的鉴定。

关键词：单链构象多态性人白细胞介素-3 基因突变基因诊断

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实时荧光定量检测中国实验用小型猪肝脏CYP3A29 mRNA表达水平

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遗传 2007年第5期29卷 575-580页

作者：杨家大商海涛魏泓杨婉身刘昕四川农业大学生命科学与理学院生物化学教研室雅安625014 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038 第三军医大学基础部分子遗传学教研室重庆400038

CYP3A29是猪肝脏最重要的药物代谢关键酶。研究中国实验用小型猪肝脏CYP3A29mRNA的表达特性对于评估其是否适宜于作为人CYP3A4介导的药理学研究动物模型具有一定意义。以β-actin作校正,利用TaqMan定量技术对巴马香猪、贵州小型香猪肝脏... 详细信息

CYP3A29是猪肝脏最重要的药物代谢关键酶。研究中国实验用小型猪肝脏CYP3A29mRNA的表达特性对于评估其是否适宜于作为人CYP3A4介导的药理学研究动物模型具有一定意义。以β-actin作校正,利用TaqMan定量技术对巴马香猪、贵州小型香猪肝脏CYP3A29mRNA表达水平进行检测,并以荣昌猪作为对照。结果表明,巴马香猪、贵州小型香猪、荣昌猪肝脏CYP3A29mRNA表达水平与报道的人肝脏CYP3A4相近;三品系(种)猪间肝脏CYP3A29mRNA表达水平较为接近,但品系(种)内个体间变异较大。提示巴马香猪、贵州小型香猪作为药物评价的实验动物具有一定可行性。

关键词：巴马香猪 CYP3A29 TaqMan定量

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人STAT3重组腺病毒的制备及其对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响

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第三军医大学学报 2013年第8期35卷 764-768页

作者：董宗明赵永亮余佩武黄钢第三军医大学西南医院全军普通外科中心微创胃肠外科中心重庆400038 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的制备可表达人转录因子STAT3的重组腺病毒,检测该基因在胃癌细胞株SGC-7901的表达活性及对其增殖的影响。方法以人胎盘组织cDNAs为模板通过PCR获得hSTAT3完整阅读框,T/A克隆测序证实后,亚克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,PmeⅠ线性化... 详细信息

目的制备可表达人转录因子STAT3的重组腺病毒,检测该基因在胃癌细胞株SGC-7901的表达活性及对其增殖的影响。方法以人胎盘组织cDNAs为模板通过PCR获得hSTAT3完整阅读框,T/A克隆测序证实后,亚克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,PmeⅠ线性化与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在BJ5183细菌同源重组,经PacⅠ线性化后转染293FT细胞包装,同时包装空载体腺病毒,进行病毒滴度测定。取AdV-STAT3、AdV-GFP分别感染SGC-7901细胞,设空白对照,Western blot检测3组细胞STAT3蛋白表达,MTT法检测对细胞增殖的影响。结果获得hSTAT3完整阅读框,T载体中测序无突变,亚克隆至pAdTrack-CMV,并与pAdEasy-1成功重组后包装AdV-STAT3,测定滴度为2.8×1010pfu/mL,AdV-GFP滴度为3.2×1010pfu/mL。与AdV-GFP组及空白对照组比,Western blot示AdV-STAT3组蛋白明显表达(P<0.05);MTT示AdV-1-STAT3组明显促进细胞增殖(P<0.05)。结论成功制备hSTAT3的重组腺病毒,感染胃癌细胞株SGC-7901后高表达并促进其增殖。

关键词： STAT3 重组腺病毒胃癌增殖

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草麻黄中补体抑制成分抑制大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的实验研究

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第三军医大学学报 2005年第17期27卷 1773-1775页

作者：李军杨康白云吴蔚熊刚第三军医大学西南医院胸心外科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的初步探讨草麻黄中补体抑制成分(comp lem ent inh ib iting component,C IC)对异种心脏移植超急性排斥反应的作用。方法按是否给予C IC灌胃处理,将动物模型分为对照组和实验组,观察对照组和实验组术后供心存活时间,在术后早期及供... 详细信息

目的初步探讨草麻黄中补体抑制成分(comp lem ent inh ib iting component,C IC)对异种心脏移植超急性排斥反应的作用。方法按是否给予C IC灌胃处理,将动物模型分为对照组和实验组,观察对照组和实验组术后供心存活时间,在术后早期及供心失活时取两组心脏组织行光镜、电镜病理检查,并在术后固定时间分别抽鼠血行血清学检查,用微量法测定CH50、APH50,用透射比浊法测定C3。结果实验组移植心脏存活时间为(51.00±3.46)m in,与对照组(30.30±3.46)m in比较差异极显著(P<0.01)。结论豚鼠至大鼠异种心脏移植后,补体的经典途径和替代途径均被激活。C IC能明显抑制补体活性,延缓超急性排斥反应的发生,从而使移植心脏的存活时间延长。

关键词：异种心脏移植超急性排斥反应补体补体抑制剂草麻黄

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人T细胞基因组随机MARs的分离、克隆及序列分析

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第三军医大学学报 2004年第15期26卷 1342-1345页

作者：毛琼国白云张波黄钢王燕代佳平第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院检验科重庆400038

目的　分离、克隆人基因组随机MARs片段 ,分析其序列特征 ,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础。方法　用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核 ,分离人T细胞基因组随机MARs片段 ,并将其克隆进入PUC1... 详细信息

目的　分离、克隆人基因组随机MARs片段 ,分析其序列特征 ,为进一步研究MARs在真核细胞DNA复制及基因表达调控中的作用与机制奠定基础。方法　用DNaseⅠ、高盐和蛋白酶K处理细胞核 ,分离人T细胞基因组随机MARs片段 ,并将其克隆进入PUC19质粒 ;用体外结合实验筛选能与核基质蛋白结合的克隆并测序 ,生物信息学分析其序列的特征。结果　从人T细胞基因组中分离得到大量的MARs片段 ,构建成MARs库 ,初步任意挑选 5 8个克隆 ,体外结合实验证实其具有与核基质蛋白结合活性 ,对其中 1个克隆的序列分析表明 ,其序列AT含量较高 ,不仅含有AC 和ATAT基序 ,还包含有多个转录复制起点、增强子序列、弯曲DNA和扭结DNA基序以及多个反向重复序列。结论　分离获得的DNA片段具有MAR的特性 ,同一DNA序列中存在不同的元件组合 ,其参与基因表达调控的功能应该是复杂。

关键词：核基质核基质附着区基因组DNA

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LIGHT-Fc基因转染对食管癌细胞株Eca109抑制作用的初步研究

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第三军医大学学报 2004年第8期26卷 686-689页

作者：熊刚杨康白云第三军医大学西南医院胸心外科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应。方法　以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过绘制细胞生长曲线及MTT比色法观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞生长的影响 ,用RT PCR法检测LIGHT受体在Eca10 9细胞上... 详细信息

目的　探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应。方法　以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过绘制细胞生长曲线及MTT比色法观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞生长的影响 ,用RT PCR法检测LIGHT受体在Eca10 9细胞上的表达。结果　LIGHT Fc基因的表达可以抑制Eca10 9细胞的生长。在低血清培养时 ,Eca10 9 LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低 ;MTT比色显示Eca10 9 LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论　LIGHT Fc基因转染对人食管癌Eca10 9细胞具有体外抑制作用。

关键词： LIGHT 转染 Eca109细胞基因治疗

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