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第三军医大学学报 2011年第16期33卷 1667-1671页

作者：贺雪莲于洋周永杰何立陈祥肖岚鲁青王凡四川大学基础与法医学院解剖教研室成都610041 四川大学华西第二医院发育干细胞研究所成都610041 四川大学华西医院移植工程与移植免疫卫生部重点实验室成都610041 四川大学生命科学学院成都610041 第三军医大学基础医学部组织与胚胎学教研室重庆市神经科学重点实验室重庆400038 Department of Developmental Biology University of Texas Southwestern Medical CenterDallas75390 TX

目的探讨少突胶质细胞相关microRNA(m iRNA)对中枢神经系统神经前体细胞增殖的作用。方法利用D icer1 loxp/loxp基因型小鼠和Olig1-Cre品系小鼠杂交获得miRNA加工酶Dicer基因条件性敲除小鼠,再用免疫荧光染色和B rdU标记等技术检测这种D... 详细信息

目的探讨少突胶质细胞相关microRNA(m iRNA)对中枢神经系统神经前体细胞增殖的作用。方法利用D icer1 loxp/loxp基因型小鼠和Olig1-Cre品系小鼠杂交获得miRNA加工酶Dicer基因条件性敲除小鼠,再用免疫荧光染色和B rdU标记等技术检测这种Dicer条件性敲除小鼠大脑和小脑中神经前体细胞的增殖,以及脊髓中新生神经元的变化情况。结果 Dicer条件性敲除小鼠大脑中神经前体细胞增殖加快,而小脑中增殖细胞数目较正常小鼠减少(12%,P<0.05)。此外脊髓中神经元的数目并未受到影响。结论少突胶质细胞相关m iRNA对中枢神经系统的胶质细胞的发生和增殖具有时空特异性或差异性调节作用。

关键词： miRNA 少突胶质细胞细胞增殖基因敲除

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人sTRAIL基因载体构建及其在真皮干细胞的表达

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第27期14卷 5071-5074页

作者：缪殿南梁宇佳闫国和董世武戴晓天熊玮解放军第三军医大学西南医院呼吸内科重庆市400038 解放军第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部解剖学教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学研究室重庆市400038

背景:基于肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)可溶性相关凋亡诱导配体(soluble related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)抗瘤的生物特性,克隆sTRAIL基因,构建其真核表达载体,为肿瘤细胞凋亡的实验研究奠定基础。目的:构建真... 详细信息

背景:基于肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)可溶性相关凋亡诱导配体(soluble related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)抗瘤的生物特性,克隆sTRAIL基因,构建其真核表达载体,为肿瘤细胞凋亡的实验研究奠定基础。目的:构建真核表达载体pEGFP-N1/sTRAIL,并转染真皮干细胞,以探究sTRAIL基因导入真皮干细胞的表达情况。方法:采用RT-PCR二步法,以人胎盘组织总RNA为模板,扩增sTRAIL的cDNA序列,将其克隆入pMD18-T载体,随后亚克隆入载体pEGFP-N1中,构建其真核瞬时表达载体pEGFP-N1/sTRAIL,以Fugene6转染技术,将sTRAIL基因导入真皮干细胞。倒置显微镜下观测转染后真皮干细胞生长变化及sTRAIL在其中的表达等情况。RT-PCR法对目的基因转染的真皮干细胞进行鉴定。结果与结论:克隆到sTRAIL基因的cDNA序列,成功构建了其真核表达载体,该真核表达载体能携带sTRAIL基因在真皮干细胞中正常表达。倒置显微镜下观测到转染后真皮干细胞生长状态与未转染的真皮干细胞无差异。以经sTRAIL基因转染的真皮干细胞该基因组DNA为模板,用RT-PCR法能扩增到sTRAIL基因cDNA序列。

关键词：人sTRAIL基因克隆真核表达载体真皮干细胞绿色荧光

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大鼠海马神经干细胞的扩增及与三维微小凹图式复合的研究

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第三军医大学学报 2010年第6期32卷 520-524页

作者：吕艳玲吴泽志张利光宋兆全于婷文灿阴金波陈景龙重庆大学生物工程学院生物流变科学与技术教育部重点实验室重庆400044 第三军医大学基础医学部外科应用解剖与手术学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院神经外科全军癫痫病诊治中心重庆400037 Division of Molecular Biosciences The John Curtin School of Medical ResearchThe Australian National University

目的比较2种培养基下海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的生长特性,进而实现海马NSCs扩增的优化及其与聚乳酸(poly-L-lactide,PLLA)三维微小凹图式的复合。方法分离大鼠胚胎海马细胞并采用Neurobasal为基础的培养基和DMEM/F12为... 详细信息

目的比较2种培养基下海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的生长特性,进而实现海马NSCs扩增的优化及其与聚乳酸(poly-L-lactide,PLLA)三维微小凹图式的复合。方法分离大鼠胚胎海马细胞并采用Neurobasal为基础的培养基和DMEM/F12为基础的培养基进行扩增。以四甲基氮唑蓝(MTT)比色法及神经球数目统计法评价2种培养基下细胞增殖行为。采用紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术制备PLLA三维微小凹图式并实现海马NSCs与微小凹图式的复合。结果原代分离的海马细胞呈神经干细胞标志物阳性并能向神经元系和胶质细胞系分化。在30d的扩增时间内,海马NSCs在以Neurobasal为基础的培养基中缓慢扩增聚集成神经球,少见细胞贴壁及分化;在以DMEM/F12为基础的培养基中海马NSCs扩增迅速,但易贴壁和分化。培养第25天时后者神经球数量为前者的4.7倍。微加工制备的微小凹图式结构清晰、稳定,具有高纵横结构比(≥1)。扩增的海马NSCs能在三维微小凹图式上成功复合生长。结论以DMEM/F12为基础的培养基有利于大鼠海马NSCs的扩增,以Neurobasal为基础的培养基利于海马NSCs的纯化。序贯应用2种培养基可有效扩增海马NSCs并实现其与三维微小凹图式的复合。

关键词：海马神经干细胞神经球原代培养扩增聚乳酸微加工

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锌指蛋白基因抑制内皮细胞粘附分子表达及单核细胞粘附

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局解手术学杂志 2010年第3期19卷 171-173页

作者：柏力杨明璨李至伟李小松李立张伟成都军区昆明总医院急诊科第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室解放军78511部队门诊部

目的单核细胞粘附是动脉粥样硬化发生的重要阶段,研究锌指蛋白A20基因在氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞粘附分子表达及单核细胞粘附中的作用。方法脂质体DOTAP转染pEGFPEHA20-N1于原代培养的脐静脉内皮细胞,经G418筛选,A20表达经免疫... 详细信息

目的单核细胞粘附是动脉粥样硬化发生的重要阶段,研究锌指蛋白A20基因在氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞粘附分子表达及单核细胞粘附中的作用。方法脂质体DOTAP转染pEGFPEHA20-N1于原代培养的脐静脉内皮细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定。激光共聚焦显微镜及微管吸吮系统分别检测转染前后氧化型低密度脂蛋白诱导单核细胞粘附情况及内皮细胞粘附分子VCAM-1表达。结果氧化型低密度脂蛋白能显著提高单核细胞粘附力及内皮细胞VCAM-1表达,A20基因能显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导单核细胞粘附及内皮细胞VCAM-1表达。结论A20基因对动脉粥样硬化的防治可能有一定作用。

关键词： A20基因氧化型低密度脂蛋白 VCAM-1 单核细胞

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含核受体真核表达载体的构建及其转染真皮多能干细胞(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第40期13卷 7919-7924页

作者：王涛邱安春李露斯刘雁平屈纪富徐文岳解放军第三军医大学西南医院急救部重庆市400038 四川省隆昌县中医院骨二科四川省内江市642100 解放军第三军医大学西南医院神经内科重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆市400038

背景:研究表明含核受体基因在神经系统发育过程中具有重要意义,是维持成体干细胞增殖和成神经分化的关键基因。目的:拟构建含核受体真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,并筛选出能稳定表达含核受体的真皮多能干细胞。设计、时间及地点:细胞基... 详细信息

背景:研究表明含核受体基因在神经系统发育过程中具有重要意义,是维持成体干细胞增殖和成神经分化的关键基因。目的:拟构建含核受体真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,并筛选出能稳定表达含核受体的真皮多能干细胞。设计、时间及地点:细胞基因学实验,于2007-03/12在解放军第三军医大学基础医学部病原生物学教研室完成。材料:成年SD大鼠1只,由解放军第三军医大学实验动物研究所提供;真皮多能干细胞由解放军第三军医大学全军复合伤研究所分离培养;质粒载体pEGFPN1及细菌DH5α由徐文岳教授惠赠。方法:首先以大鼠的大脑组织总RNA为模板,RT-PCR扩增出含核受体的编码cDNA序列,T/A克隆至pMDl8-T载体上,然后用BamHI、HindⅢ双酶切释放出经测序鉴定为阳性的重组质粒pMDl8-T-TLX中的含核受体片段,亚克隆到真核载体pEGFPN1中,从而构建真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,最后采用阳性脂质体将pEGFPN1-TLX转染到真皮多能干细胞中。主要观察指标:转染后24h荧光显微镜下观察绿色荧光,RT-PCR检测含核受体mRNA的表达,免疫组化染色观察向神经细胞的分化情况。结果:PCR、酶切和测序结果证明,成功地将含核受体全长cDNA克隆到pEGFPN1质粒中,并成功构建pEGFPN1-TLX重组质粒。与未转染真皮多能干细胞相比,10d后可见pEGFPN1-TLX转染的真皮多能干细胞继续生长,并于15d时形成抗性克隆,荧光显微镜下有绿色荧光蛋白表达;而未转染的真皮多能干细胞10d时已全部死亡。RT-PCR结果显示,pEGFPN1-TLX转染真皮多能干细胞表达TLXmRNA。诱导后3d与单纯真皮多能干细胞比较,pEGFPN1-TLX转染的真皮多能干细胞诱导成NF200阳性细胞数明显增加,诱导成GFAP阳性细胞数明显减少。结论:实验成功构建含核受体真核表达载体,并成功转染了真皮多能干细胞。转染后能明显提高真皮多能干细胞向神经元分化的效率,而向胶质细胞分化受到抑制。

关键词：核受体含核受体克隆真皮多能干细胞

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Bmi-1调节干性相关分子转录的初步分析

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第三军医大学学报 2009年第9期31卷 768-771页

作者：阮艳蹇锐程小星牛翰婕周恒宇郑宏庭胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 解放军总医院309临床部北京100091 第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037

目的探讨Bmi-1对肿瘤及胚胎干细胞中干性相关分子转录表达的影响。方法分别构建鼠源和人源Bmi-1过表达载体pCI-GFP-mbmi1和pCI-GFP-hbmi1;瞬时转染鼠ES细胞CCE和人神经胶质瘤细胞U87;半定量RT-PCR检测胚胎干细胞中Oct-4、Nanog、c-Myc、... 详细信息

目的探讨Bmi-1对肿瘤及胚胎干细胞中干性相关分子转录表达的影响。方法分别构建鼠源和人源Bmi-1过表达载体pCI-GFP-mbmi1和pCI-GFP-hbmi1;瞬时转染鼠ES细胞CCE和人神经胶质瘤细胞U87;半定量RT-PCR检测胚胎干细胞中Oct-4、Nanog、c-Myc、Klf4和Sox2及肿瘤细胞中CD133、Nestin等干性分子的表达;克隆形成实验检测CCE细胞自我更新克隆形成能力。结果瞬时转染Bmi-1过表达载体后,CCE细胞中Nanog的表达上调,Oct-4、Sox2和Klf4的表达无明显变化;U87细胞中Nestin和Oct-4表达上调,CD133、Nanog变化不明显;两者c-Myc的转录表达均显著降低;过表达Bmi-1促进CCE细胞自我更新克隆形成。结论Bmi-1参与了对肿瘤及胚胎干细胞中干性相关分子的转录调节。

关键词： Bmi-1 干细胞干性相关分子转录调控

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应用解剖与手术学网络课程的建立

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局解手术学杂志 2009年第1期18卷 44-44页

作者：邱全光郭光金第三军医大学训练部网络中心重庆400038 第三军医大学基础医学部外科应用解剖与手术学教研室重庆400038

网络课程建设是教育信息化进程中的一项重要内容。建立应用解剖与手术学网络课程可以为教师提供数字化的可扩展的教学平台,为学员提供自主学习的平台,是应用解剖与手术学教学的重要工具。[第一段]

关键词：手术学教学网络课程

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西酞普兰对血管性痴呆大鼠海马DG神经发生和认知障碍影响的初步研究

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第三军医大学学报 2008年第10期30卷 946-949页

作者：黄河清唐军周振华李志方刘国军陈康宁徐海伟李露斯第三军医大学西南医院神经内科重庆 400038 第三军医大学基础医学部生理学教研室、重庆市神经科学研究所重庆 400038 中国人民解放军第65426部队哈尔滨 150080

目的探讨西酞普兰对血管性痴呆大鼠海马齿回神经干细胞动员的作用及对动物空间认知行为的影响。方法实验动物采用随机数字表法分为正常对照组(NC组)、假手术对照组(SC组)、血管性痴呆组(4VO组)和西酞普兰干预的血管性痴呆组(4VO+C组)共4... 详细信息

目的探讨西酞普兰对血管性痴呆大鼠海马齿回神经干细胞动员的作用及对动物空间认知行为的影响。方法实验动物采用随机数字表法分为正常对照组(NC组)、假手术对照组(SC组)、血管性痴呆组(4VO组)和西酞普兰干预的血管性痴呆组(4VO+C组)共4组;采用改良的Pulsinelli's四血管阻断(4-vessle occlusion,4VO)方法制作血管性痴呆动物模型;BrdU免疫荧光和激光共聚焦方法观察海马齿回(dental gyrus,DG)神经干细胞增殖状况;Morris水迷宫检测大鼠空间学习和记忆功能。结果海马DG的BrdU阳性细胞多成对或成团排列于颗粒细胞层与海马门区。4VO组及4VO+C组造模后1d,BrdU阳性细胞数显著下降,此后逐渐增加,到术后14d达峰值(4VO+C组约为4VO组的2倍),4VO+C组DG神经干细胞活跃增生的情况一直延续到术后21d,与4VO组比较差异显著(P<0.01)。②Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验均表明,造模后大鼠空间学习记忆功能显著受损,但随时间推移逐渐改善;4OV+C组术后7d和14d组大鼠的学习记忆损伤程度较4VO组显著减轻(P<0.05)。③大鼠海马DG神经干细胞增殖趋势与其空间学习记忆能力改变无明显相关性。结论全脑缺血再灌注可刺激大鼠海马DG神经干细胞增殖,且SSRI类抗抑郁药物西酞普兰可显著增强DG神经发生并减轻动物的空间学习记忆损伤,但神经干细胞增殖趋势与学习记忆改变无明显相关性,推测可能与增殖神经干细胞的分化、功能整合及神经递质作用等有关。

关键词：血管性痴呆海马齿回神经干细胞学习记忆

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NOV基因真核表达载体的构建及在大鼠真皮多能干细胞中的表达

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中华神经医学杂志 2008年第4期7卷 353-356页

作者：刘雁平李露斯王涛徐文岳屈纪富第三军医大学西南医院神经内科重庆400038 第三军医大学西南医院急救部重庆400038 第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038

目的构建肾母细胞瘤过度表达（NOV）基因真核表达载体并检测其在真皮多能干细胞中的表达。方法利用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）方法，以新生大鼠大脑组织总RNA为模板，扩增出1l178bp的NOV基因的cDNA编码区序列，然后用Hind Ⅲ和BamH... 详细信息

目的构建肾母细胞瘤过度表达（NOV）基因真核表达载体并检测其在真皮多能干细胞中的表达。方法利用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）方法，以新生大鼠大脑组织总RNA为模板，扩增出1l178bp的NOV基因的cDNA编码区序列，然后用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切后定向克隆入真核表达载体pEGFP-N1质粒中，用脂质体法将重组质粒转染入大鼠真皮多能干细胞中，荧光显微镜观察转染产物．RT—PCR法检测转染细胞中NOV基因表达。结果NOV基因cDNA正确克隆到真核表达载体pEGFP-N1质粒中；重组质粒体外转染入大鼠真皮多能干细胞后，可见转染细胞有绿色荧光表达，转染细胞中检测到NOV基因。结论构建成功NOV基因重组质粒，并能在大鼠真皮多能干细胞中稳定表达，为NOV基因及真皮多能干细胞的作用研究提供了有利的分子工具。

关键词： NOV基因逆转录-多聚酶链反应基因克隆真皮多能干细胞

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脊髓损伤后真皮多能干细胞移植时机的选择

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第33期11卷 6615-6619页

作者：王涛李露斯刘雁平屈纪富徐海伟解放军第三军医大学西南医院急救部重庆市400038 解放军第三军医大学西南医院神经内科重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室重庆市400038

目的:观察脊髓损伤后不同时间移植真皮多能干细胞对大鼠运动功能修复的影响。方法:实验于2006-06/2007-03在第三军医大学生理学教研室完成。①实验材料:实验动物2～4月龄SPF级SD大鼠,体质量(210±40)g,雌雄不限,由第三军医大学实验... 详细信息

目的:观察脊髓损伤后不同时间移植真皮多能干细胞对大鼠运动功能修复的影响。方法:实验于2006-06/2007-03在第三军医大学生理学教研室完成。①实验材料:实验动物2～4月龄SPF级SD大鼠,体质量(210±40)g,雌雄不限,由第三军医大学实验动物中心提供。真皮多能干细胞为第三军医大学防原医学系从SD大鼠真皮中提取和分离。②实验方法:将42只SD大鼠在L4水平制成脊髓全横断损伤模型。将动物随机分为对照组(n=6)、真皮多能干细胞移植组(n=36)。真皮多能干细胞移植组又分为6个时间点:损伤后1,4,7,10,14,21d移植组,每组6只。各移植组于伤处移植大鼠真皮多能干细胞,而对照组于损伤后7d注射等量磷酸盐缓冲液。③实验评估:分别于移植后1d、1周、4周、8周、12周对各组大鼠进行动物行为学和脊髓诱发电位检测。结果:42只实验大鼠均进入结果分析,无脱落。①动物行为学评分:4周以后各组动物行为学评分比较差异有显著性意义(P<0.05),移植组明显高于对照组(P<0.05),各移植组间比较,以损伤后7,10d移植组动物行为学评分改善最显著。②各组大鼠脊髓诱发电位检查:体感诱发电位和运动诱发电位潜伏期和波幅值于移植后8,12周后明显高于对照组(P<0.05),各移植组间比较,以损伤后7,10d移植组体感诱发电位和运动诱发电位潜伏期和波幅值改善最显著。结论:脊髓损伤后7～14d进行真皮多能干细胞移植可明显改善大鼠后肢的运动功能。

关键词：真皮多能干细胞移植脊髓损伤不同时间

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