检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2005年第3期32卷 195-198页

作者：程小星蹇锐邓少丽蒋静第三军医大学微生物学教研室重庆400038

随着人类基因组大规模测序的完成,下一步的挑战是了解每一个基因的功能. RNA干扰文库为大规模基因功能筛选提供了可能. 虽然用于线虫等模式生物的RNAi文库,已经证明是大规模基因功能筛选的有效方法,但这些文库不能用于高等动物的细胞. ... 详细信息

随着人类基因组大规模测序的完成,下一步的挑战是了解每一个基因的功能. RNA干扰文库为大规模基因功能筛选提供了可能. 虽然用于线虫等模式生物的RNAi文库,已经证明是大规模基因功能筛选的有效方法,但这些文库不能用于高等动物的细胞. 自2003年以来,用于人的细胞和哺乳动物细胞的RNAi文库取得了突破,相继出现构建已知基因RNAi文库和构建随机RNAi文库的报道,并成功地应用于大规模基因功能的筛选. RNAi文库作为一种简单、高效、大规模、高通量的功能基因组学研究的工具,将在基因功能研究、发现新的药物靶基因、发现疾病相关基因等方面有广阔的应用前景.

关键词： RNA干扰 RNAi文库功能基因组学

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高致病性2型猪链球菌IV型样分泌系统virB1-89K基因的敲除及其对毒力的影响

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微生物学报 2013年第3期53卷 276-283页

作者：钟秋李明赵岩陈恬殷素鹏王敏饶贤才谭银玲胡福泉第三军医大学基础部微生物学教研室重庆400038

【目的】构建高致病性2型猪链球菌IV型样分泌系统virB1-89K基因的敲除株和互补株,研究virB1-89 K基因缺失对细菌毒力的影响。【方法】通过同源重组技术敲除virB1-89 K基因,多重PCR筛选敲除株并测序鉴定。再将virB1-89K基因克隆到穿梭质... 详细信息

【目的】构建高致病性2型猪链球菌IV型样分泌系统virB1-89K基因的敲除株和互补株,研究virB1-89 K基因缺失对细菌毒力的影响。【方法】通过同源重组技术敲除virB1-89 K基因,多重PCR筛选敲除株并测序鉴定。再将virB1-89K基因克隆到穿梭质粒pSET1后转入virB1-89K敲除株中,构建互补株。比较野生株05ZYH33、突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K三者基本生物学特性的差异,小鼠实验分析virB1-89K基因敲除后对细菌毒力的影响。【结果】成功构建突变株△virB1-89K和互补株CvirB1-89K,在基本生物学性状无明显改变的情况下,敲除株的毒性降低到野生株的30%,互补株可恢复其毒性。【结论】virB1-89K基因作为2型猪链球菌高致病性菌株05ZYH33的IV样分泌系统的重要组分,与其高致病性密切相关。

关键词： 2型猪链球菌 Ⅳ型样分泌系统 virB1基因基因敲除

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双功能域小分子补体受体1型衍生物的构建、表达、纯化及生物功能鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第11期28卷 1044-1049页

作者：杨永涛何莉刘高科谭兵汪正清第三军医大学基础部微生物学教研室重庆 400038

目的克隆表达出能够抑制补体活化的双功能域小分子补体受体1型（complement receptor type 1，CR1）衍生物。方法从外周血提取总RNA，进行RT—PCR扩增出功能性片段I（CR1-SCR1—3）；以本室构建的pET-32a—CR1-SCR15—18为模板扩增功... 详细信息

目的克隆表达出能够抑制补体活化的双功能域小分子补体受体1型（complement receptor type 1，CR1）衍生物。方法从外周血提取总RNA，进行RT—PCR扩增出功能性片段I（CR1-SCR1—3）；以本室构建的pET-32a—CR1-SCR15—18为模板扩增功能性片段Ⅱ（CRl-SCR15—17）；利用重叠延伸PCR（SOE—PCR）法扩增出包含双功能域的融合基因。将融合基因重组于pET-32a（＋）载体，转化大肠杆菌Rosetta，经酶切及DNA序列测定鉴定后，IPTG诱导表达，SDS—PAGE和Western blot对表达蛋白质进行分析鉴定。蛋白质经Ni柱亲和层析及透析复性后，采用50％补体溶血抑制试验（CH50）进行功能鉴定。结果酶切及DNA序列测定证实成功构建出了pET-32a—CR1-SCR（1-3＋15-17）重组表达载体，IPTG诱导表达后在相对分子质量（Mr）为63×10^3处有一明显的条带，经Western blot鉴定为目的蛋白，Ni柱亲和层析获得纯度约为92％的目的蛋白，功能试验证实，在0～200μg／ml的融合蛋白剂量范围内，随着浓度的增加，补体抑制活性增强。结论成功构建并在大肠杆菌内表达了具有较高生物活性的重组双功能域小分子CR1衍生物，为体内保护实验研究提供实验数据。

关键词：补体受体1型重叠延伸PCR 原核表达蛋白纯化生物学活性分析

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用16S rRNA探针定量测定普氏立克次体在细胞内的繁殖量

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第2期19卷 121-124页

作者：胡福泉金晓琳刘启富俞树荣第三军医大学微生物学教研室

目的以普氏立克次体为研究对象，建立一种定量测定胞内微生物繁殖的方法。方法从立克次体感染细胞提取总ＲＮＡ为样品或用硫氰酸胍裂解感染细胞，以裂解物为样品，用３２Ｐ标记的１６ＳｒＲＮＡ特异探针做ＲＮＡ酶保护分析。根据探针分... 详细信息

目的以普氏立克次体为研究对象，建立一种定量测定胞内微生物繁殖的方法。方法从立克次体感染细胞提取总ＲＮＡ为样品或用硫氰酸胍裂解感染细胞，以裂解物为样品，用３２Ｐ标记的１６ＳｒＲＮＡ特异探针做ＲＮＡ酶保护分析。根据探针分子结合数，计算出检测到的靶序列分子数，反映胞内微生物的繁殖量。结果从０．５μｌ直接裂解物可检测到３．９４×１０４个１６ＳｒＲＮＡ分子；从６ｐｇ的总ＲＮＡ中可检测到５．８２×１０４个１６ＳｒＲＮＡ分子。用本法试测立克次体在宿主细胞内的生长曲线，只表现出迟缓期及对数生长期，而无稳定期及衰退期。结论用特异性探针通过ＲＮＡ酶保护分析法可以定量测定胞内微生物在宿主细胞内的繁殖量。

关键词：普氏立克次体核糖核酸酶类 RNA探针

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旁路活化补体降低宿主抗感染条件与机制的实验研究

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中华医学杂志 1999年第4期79卷 250-252页

作者：汪正清熊杰周善章刘启富第三军医大学微生物学教研室

目的为证明旁路活化补体降低吞噬细胞功能，了解宿主抗感染能力下降的条件与机制。方法分离人中性粒细胞（ＰＭＮ）和大鼠枯否细胞（ＫＣ）；ＰＭＮ和ＫＣ培养单层加上酵母多糖活化人血清（ＺＡＨＳ）；观测吞噬细胞胞内杀菌力（ＩＣＢ... 详细信息

目的为证明旁路活化补体降低吞噬细胞功能，了解宿主抗感染能力下降的条件与机制。方法分离人中性粒细胞（ＰＭＮ）和大鼠枯否细胞（ＫＣ）；ＰＭＮ和ＫＣ培养单层加上酵母多糖活化人血清（ＺＡＨＳ）；观测吞噬细胞胞内杀菌力（ＩＣＢＡ）、超氧阴离子（Ｏ－２）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）指标动态水平；以抗人Ｃ３Ｃ５血清（ＡＨＣ３Ｃ５Ｓ）中和阻断ＺＡＨＳ进行反证。结果００７～００９ｍｌＺＡＨＳ处理组，ＫＣ胞内Ｏ－２水平在３小时前高于对照组值，然后逐渐下降。００３～００５ｍｌＺＡＨＳ６小时略有下降。ＩＣＢＡ其动态变化与Ｏ－２的相似，但００３～００５ｍｌ４小时后略有下降。ＡＣＰ水平只降无升，随ＺＡＨＳ用量增加，下降幅度越低，以上各指标至６小时降至最低。０１１ｍｌＺＡＨＳ处理组４小时后约８５％～９０％ＫＣ破裂脱落。ＺＡＨＳ作用ＰＭＮ的指标动态基本类似ＫＣ的动态，只是ＰＭＮ指标在２小时之前升高，然后逐渐下降，以００５～００９ｍｌＺＡＨＳ对ＰＭＮ指标影响最大。阻断组Ｏ－２、ＡＣＰ、ＩＣＢＡ在６小时测定值显著高于ＺＡＨＳ处理组，但仍低于正常对照。结论ＺＡＨＳ使吞噬细胞功能下降与Ｃ３Ｃ５碎片作用有关，在大中剂量作用时间较长的条件?

关键词：补体枯否细胞抗感染创伤感染

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与接头蛋白Bam32相互作用的蛋白分子的鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第4期21卷 432-434页

作者：程小星蹇锐第三军医大学基础部微生物学教研室重庆400038

目的:研究接头蛋白(adaptorprotein)Bam32在B细胞抗原受体(Bcellantigenreceptor,BCR)信号转导级联反应中的作用。方法:以Bam32全序列为诱饵,应用酵母双杂交技术筛选能与Bam32相互作用的蛋白分子,并用293T细胞共转染和免疫共沉淀法加以... 详细信息

目的:研究接头蛋白(adaptorprotein)Bam32在B细胞抗原受体(Bcellantigenreceptor,BCR)信号转导级联反应中的作用。方法:以Bam32全序列为诱饵,应用酵母双杂交技术筛选能与Bam32相互作用的蛋白分子,并用293T细胞共转染和免疫共沉淀法加以证实。结果:应用酵母双杂交技术筛选出能与Bam32相互作用的蛋白分子,其中1个出现强阳性反应的克隆编码酪氨酸激酶Lyn。用293T细胞共转染和特异性免疫共沉淀法证实,Bam32可在哺乳动物细胞中与Lyn共沉淀。应用抗磷酸化酪氨酸抗体检测显示,Bam32与Lyn相互作用可导致Bam32磷酸化。结论:Bam32可同Lyn相互作用,导致Bam32磷酸化,这在激活下游产物的级联反应中可能起重要作用。

关键词： B细胞抗原受体信号转导级联反应 Bam32 Lyn

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铜绿假单胞菌外毒素A的表达、纯化与生物学活性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第3期27卷 229-233页

作者：胡晓梅胡福泉申晓冬黄建军饶贤才丛延广李明周莹冰但芸婕第三军医大学基础部微生物学教研室重庆400038

目的利用基因工程技术制备铜绿假单胞菌外毒素A（PE），为深入研究PE的致病机理和免疫防治奠定基础。方法应用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增外毒素A全长结构基因，将其克隆于原核表达载体pQE-31中，所构建的重组质粒经测序鉴定后... 详细信息

目的利用基因工程技术制备铜绿假单胞菌外毒素A（PE），为深入研究PE的致病机理和免疫防治奠定基础。方法应用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增外毒素A全长结构基因，将其克隆于原核表达载体pQE-31中，所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109，IPTG诱导表达；制备融合蛋白包涵体，并采用Ni—NTA柱亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析分离和纯化目的蛋白；采用透析法对纯化后的目的蛋白进行复性，MTT法测定复性后的重组PE对L929细胞、B16黑素瘤细胞的细胞毒活性。结果通过对PCR反应体系的优化，扩增到了PE全长结构基因。所构建的pQE-PE重组质粒经酶切及测序鉴定与设计序列一致；转化*** JM109后，IFTG诱导目的蛋白表达率约为25％；SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量（Mr）约为66×10^3，与理论预期值一致；破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析后蛋白纯度大于95％。MTT法测得重组PE对L929细胞和B16黑素瘤细胞的半数抑制浓度（IC50值）分别为2．13μg/ml、2．58μg/ml。结论通过对PE的表达纯化，获得了具有细胞毒活性的重组PE，为利用基因工程手段大量制备PE的工作奠定了基础。

关键词：铜绿假单胞菌外毒素A 克隆表达蛋白纯化细胞毒活性

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我国Q热立克次体菌株23S rRNA基因插入顺序的分析

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第2期19卷 125-128页

作者：陈荣温博海重庆第三军医大学微生物学教研室

目的对我国伯氏考克斯体分离株的２３ＳｒＲＮＡ基因插入片段（２３ＳＩＶＳ）作核酸序列分析。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增７株Ｃｂ中国分离株和２株外国参考株的２３ＳＩＶＳ，用双脱氧核苷酸法对扩增产物进行测序。

关键词：伯氏考克斯体 23SIVS DN插入元件 Q热

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Q热立克次体67kD蛋白的免疫保护性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 1994年第2期14卷 77-80页

作者：职宁俞树荣张映雪李芹阶余国泉重庆第三军医大学微生物学教研室

本文报道Ｑ热立克次体６７ｋＤ膜蛋白抗原对小鼠和豚鼠的免疫原性和免疫保护性的研究。结果表明６７ｋＤ蛋白抗原在体内和体外均能有效地激活实验动物的细胞免疫和体液免疫系统。免疫小鼠和豚鼠对１０３ＩＤ５０Ｑ热立克次体七医株Ⅰ相... 详细信息

本文报道Ｑ热立克次体６７ｋＤ膜蛋白抗原对小鼠和豚鼠的免疫原性和免疫保护性的研究。结果表明６７ｋＤ蛋白抗原在体内和体外均能有效地激活实验动物的细胞免疫和体液免疫系统。免疫小鼠和豚鼠对１０３ＩＤ５０Ｑ热立克次体七医株Ⅰ相攻击的保护率均为１００％，体外淋巴细胞增殖试验阳性，免疫动物出现迟发型变态反应，并全部检出特异性抗体。本项研究提示６７ｋＤ蛋白有可能用于制作有效的Ｑ热亚单位疫苗。

关键词： Q热立克次体外膜蛋白免疫保护

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SCCmec遗传元件及其在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型中的应用

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遗传 2015年第5期37卷 442-451页

作者：杨延成程航周人杰饶贤才第三军医大学基础部微生物学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院急救部重庆400038

携带mec基因簇的葡萄球菌盒式染色体(Staphylococcal chromosome cassette mec,SCCmec)遗传元件的获得是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药的主要原因。SCCmec由一个mec基因簇、一个染色体重组酶(ccr)基因簇及3个J区组成。mec基因簇含有mec A及其调控基因,mec A基因编码的耐药决定簇使MRSA对β-内酰胺类抗生素耐药;ccr基因簇编码的重组酶负责SCCmec元件的整合与切离;J区差异大,导致不同来源MRSA菌株携带SCCmec的大小不一,在组成上也具有多样性。这些特征为利用SCCmec元件进行MRSA分型创造了条件。文章介绍了SCCmec元件的结构和功能,综述了基于SCCmec的MRSA分型研究。

关键词：金黄色葡萄球菌耐药性 SCCmec元件分子分型

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