目的探讨X盒结合蛋白1(X-box binding protein1,XBP1)在低浓度皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能调控中的作用。方法分离培养成年健康雄性C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,应用XBP1-RNAi慢病毒或阴性对照慢病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞,采用荧光显微镜观察感染效率,感染3、5d后收集巨噬细胞提取总RNA,应用RT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞XBP1mRNA表达水平和干扰效率。XBP1-RNAi慢病毒或阴性对照慢病毒感染离体培养的小鼠腹腔巨噬细胞3d后,再应用低浓度皮质酮(50ng/ml)处理小鼠腹腔巨噬细胞1h,分别应用ELISA法及激光共聚焦显微镜检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中TNF-α生成及其吞噬功能变化。结果当复感染指数(multiplicity of infection,MOI)值≥6时,XBP1-RNAi慢病毒能有效地感染小鼠腹腔巨噬细胞,感染效率>75%。应用RT-PCR检测发现XBP1-RNAi能有效地抑制小鼠腹腔巨噬细胞XBP1基因表达。通过选择性地沉默XBP1基因表达,低浓度皮质酮(50ng/ml)对巨噬细胞吞噬功能增强的作用受到抑制,巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均显著下降(P<0.01),而且对TNF-α分泌增强的作用也受到抑制,显著低于阴性对照慢病毒组(P<0.01)。结论采用RNA干扰选择性地沉默XBP1,能有效地抑制低浓度皮质酮对巨噬细胞吞噬和TNF-α生成增强的作用。
目的通过对大鼠下丘脑神经元培养方法的改进研究,寻找更佳的下丘脑神经元培养方法。方法基于目前常用的Neurobasal+B27+GlumaxⅠ的神经元培养体系,采用多重过滤替代原来的取上清过滤的方法处理神经元,并对换液方式作出相应调整。以NF-200对细胞进行免疫组织化学染色鉴定。通过观察比较培养下丘脑神经元的细胞密度、神经元轴突长度和胞体面积等指标,对培养方法作出评价。结果2种培养方法均获得良好的培养效果,改进的方法在细胞密度,3、7、10、12 d 4个时间点均优于原培养方法;神经元轴突长度和胞体面积方面,新方法只在3 d时优于原方法,至7 d时二者差异已不明显。结论新方法具有稳定的可重复性,可应用于神经元的培养实验。
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