检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2006年第3期28卷 201-204页

作者：吴丽娟蒋建新朱佩芳康格非第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所全军交通医学实验室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 重庆医科大学检验系重庆40016

目的利用酵母表达技术制备重组人A20蛋白(rhA20),为进一步研究其在脓毒血症中的治疗作用奠定基础。方法利用基因工程技术构建rhA20毕赤酵母表达载体yevCFP-hA20,电转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,筛选高拷贝阳性菌株,甲醇诱导表达rhA20。... 详细信息

目的利用酵母表达技术制备重组人A20蛋白(rhA20),为进一步研究其在脓毒血症中的治疗作用奠定基础。方法利用基因工程技术构建rhA20毕赤酵母表达载体yevCFP-hA20,电转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,筛选高拷贝阳性菌株,甲醇诱导表达rhA20。产物用SDS-PAGE和W estern B lot鉴定。同时对诱导表达培养基的pH值和配方,以及培养环境温度等条件进行了优化研究。结果表达产物分子量约93×103,表达条件的优化研究提示:降低诱导培养基pH值、添加低剂量EDTA、蛋白酶水解物和降低培养温度,可以使全长表达产物提高11倍,占总蛋白的18.24%,达到(254.10±24.52)μg/m l水平。结论我们成功在巴斯德毕赤酵母GS115中表达了rhA20,通过对诱导培养基成分及诱导温度的优化,使全长rhA20表达得到明显提高,探索了人A20的生物合成途径,也为巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白遭遇降解时的处理提供了新的方法。

关键词： A20 基因表达巴斯德毕赤酵母基因工程

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穿膜肽-人A20融合蛋白对单核细胞内毒素应答的影响

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中华创伤杂志 2006年第1期22卷 45-48页

作者：吴丽娟刘素秀蒋建新朱佩芳康格非第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所检验科重庆400042 第三军医大学全军交通医学研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室重庆400042 重庆医科大学医学检验系

目的探讨穿膜肽-人A20融合蛋白(CPP-hA20)对单核细胞内毒素(LPS)应答的影响,明确其对实验性细胞炎症反应的调节能力。方法利用激光共聚焦技术观察CPP-hA20定位,用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测细胞内hA20水平的改变证实CPP-hA20的跨膜... 详细信息

目的探讨穿膜肽-人A20融合蛋白(CPP-hA20)对单核细胞内毒素(LPS)应答的影响,明确其对实验性细胞炎症反应的调节能力。方法利用激光共聚焦技术观察CPP-hA20定位,用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测细胞内hA20水平的改变证实CPP-hA20的跨膜活性;以核因子(NF)-κB活性、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1水平为指标,观察CPP-hA20对单核细胞LPS应答的影响。结果CPP-hA20在40min内即可进入单核细胞内;实验组细胞NF-κB活性、TNF-α和IL-1水平较对照组在不同程度上都有所降低,且呈现剂量依赖性特点。结论CPP-hA20具有主动跨越单核细胞膜进入到细胞内的能力,能够明显抑制LPS对单核细胞NF-κB的激活,降低细胞TNF-α和IL-1的分泌水平,对单核细胞LPS炎症应答具有负向调节作用。

关键词：蛋白质转运 A20 融合蛋白内毒素炎症反应单核细胞

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便携式站姿、坐姿人体平衡测试系统的研制

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中国医学装备 2006年第11期3卷 1-4页

作者：尹志勇赵辉王正国李晓炎刘大维宁心第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

人体姿态发生变化,其身体的重心也将发生相应改变,固定在被试者头部中央的视标也发生相应变化。本系统运用光电技术和图像处理技术将视标移动轨迹转化为人体重心移动轨迹,通过对该轨迹的分析,定量测量出人体平衡功能。采用这一原理,研... 详细信息

人体姿态发生变化,其身体的重心也将发生相应改变,固定在被试者头部中央的视标也发生相应变化。本系统运用光电技术和图像处理技术将视标移动轨迹转化为人体重心移动轨迹,通过对该轨迹的分析,定量测量出人体平衡功能。采用这一原理,研制一套适用于人体站姿、坐姿平衡功能测量的便携式人体平衡功能测量系统。利用该系统对15个志愿者饮酒前后作平衡功能测试,发现饮酒能严重影响人的平衡功能。

关键词：平衡功能光电技术图像处理轨迹重心

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锌指蛋白A20基因沉默载体研究与初步应用

锌指蛋白A20基因沉默载体研究与初步应用

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第五次全国中青年检验医学学术会议

作者：吴丽娟陈伟康格非蒋建新朱佩芳第三军医大学大坪医院检验科第三军医大学大坪医院检验科重庆医科大学医学检验系第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

锌指蛋白A20(zinc finger protein A20,简称A20)是细胞凋亡研究中发现的一种肿瘤坏死因子α(TNFα)应答基因的编码产物,具有抑制细胞凋亡和下调NF-κB活性的双重功效闭。我们在相关研究中发现在LPS所致内毒素血症小鼠动物模型中,A20在... 详细信息

锌指蛋白A20(zinc finger protein A20,简称A20)是细胞凋亡研究中发现的一种肿瘤坏死因子α(TNFα)应答基因的编码产物,具有抑制细胞凋亡和下调NF-κB活性的双重功效闭。我们在相关研究中发现在LPS所致内毒素血症小鼠动物模型中,A20在外周血白细胞、肝、肺等组织中均存在高水平表达,且伴随动物体

关键词：基因沉默 A20 siRNA 初步应用锌指蛋白

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细菌脂多糖、脂蛋白和DNA对小鼠肺泡巨噬细胞体外激活的协同作用

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中华医学杂志 2005年第21期85卷 1468-1472页

作者：黄宏蒋建新朱佩芳王正国张道杰杨程 400042 重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的通过体外实验,从受体水平观察细菌脂多糖(LPS)、细菌脂蛋白(BLP)和细菌DNA对肺泡巨噬细胞的协同刺激效应及其可能机制.方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,随机将细胞分为7组,分别为LPS组、CpG-ODN组、BLP组、LPS + CpG-ODN 组、LPS + BL... 详细信息

目的通过体外实验,从受体水平观察细菌脂多糖(LPS)、细菌脂蛋白(BLP)和细菌DNA对肺泡巨噬细胞的协同刺激效应及其可能机制.方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,随机将细胞分为7组,分别为LPS组、CpG-ODN组、BLP组、LPS + CpG-ODN 组、LPS + BLP组、LPS +CpG-ODN + BLP组和培养基对照组.刺激6 h后,收集上清和细胞,上清用于TNF-α检测,细胞用于提取总RNA,通过RT-PCR检测主要模式识别受体(PRRs)CD14、SR、TLR2、TLR4、TLR9的表达.结果 LPS、BLP和CpG-ODN不仅体外能协同增加肺泡巨噬细胞释放TNF-α等细胞因子,而且具有协同增强效应细胞表面模式识别受体的表达,以三者同时存在时,协同作用最强.结论细菌内毒素、细菌脂蛋白和细菌DNA在体外不仅能上调相互的模式识别受体,而且具有协同增强其他细菌结构成分对相应受体的刺激作用.

关键词：脓毒症脂多糖类模式识别肿瘤坏死因子

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大剂量糖皮质激素对下丘脑室旁核神经元促肾上腺皮质激素释放激素mRNA转录及其蛋白表达的调节作用

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中华创伤杂志 2005年第10期21卷 737-740页

作者：张岫竹熊健琼刘媛曾琳龙在云张良周继红朱佩芳王正国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室重庆400042 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第三研究室重庆400042

目的观察大剂量糖皮质激素(GC)对下丘脑室旁核(PVN)神经元促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)蛋白表达、CRHmRNA转录的调节作用,以了解大剂量GC与生理剂量的GC经典作用是否存有差异。方法Wistar大鼠60只,随机分为10-6mol/L DEX组、10-9mol/... 详细信息

目的观察大剂量糖皮质激素(GC)对下丘脑室旁核(PVN)神经元促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)蛋白表达、CRHmRNA转录的调节作用,以了解大剂量GC与生理剂量的GC经典作用是否存有差异。方法Wistar大鼠60只,随机分为10-6mol/L DEX组、10-9mol/L地塞米松(DEX)组、等渗盐水组以及预先予以10-4mol/LRU486,再予以10-6mol/LDEX组(以上均为终浓度),通过预先股静脉置管给入。利用免疫组织化学与激光共聚焦扫描技术,观察CRH蛋白表达的情况;利用原位杂交技术,观察PVN神经元CRH mRNA转录的变化。结果终浓度10-6mol/L DEX作用约20min后,PVN神经元胞浆内出现CRH mRNA阳性染色颗粒;作用约30min后,出现CRH蛋白阳性荧光颗粒。预先拮抗糖皮质激素受体(GR)后,上述10-6mol/L DEX的促进作用被逆转。10-9mol/L DEX、等渗盐水与空白对照均无类似表现。结论大剂量GC可使PVN神经元CRH基因表达上调,这与经典GC的作用具有较大差异,可能由于大剂量GC依赖于mGR而经典GC的作用主要经由iGR所致。

关键词：糖皮质激素类下丘脑室旁核促肾上腺皮质素释放激素基因表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH) 大剂量糖皮质激素 mRNA转录核神经元蛋白表达调节作

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乙型肝炎病毒感染后表型不一致的单卵孪生子基因组CpG岛甲基化谱差异分析

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中华医学杂志 2005年第33期85卷 2317-2321页

作者：徐宝艳王宇明邓国宏罗元辉杜泽丽兰林黄燕萍第三军医大学西南医院全军感染病研究所重庆400038 第三军医大学西南医院全军消化专科中心重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的进行乙型肝炎病毒感染后表型不一致的单卵孪生子基因组CpG岛甲基化谱差异分析,以发现可能的差异甲基化基因。方法采用改良甲基化间区位点扩增技术,根据人基因组CpG岛甲基化位点的两种主要碱基组合,CGCG和CCGG,用3种不同的酶切组合(... 详细信息

目的进行乙型肝炎病毒感染后表型不一致的单卵孪生子基因组CpG岛甲基化谱差异分析,以发现可能的差异甲基化基因。方法采用改良甲基化间区位点扩增技术,根据人基因组CpG岛甲基化位点的两种主要碱基组合,CGCG和CCGG,用3种不同的酶切组合(SmaⅠXmaⅠ、HpaⅡMspⅠ、BssHⅡPauⅠ/BsePⅠ),同时采用PersonalMolecularImagerFX分子成像系统及放射自显影相结合的方法,经QuantityOne4.4.0凝胶图像分析软件进行差异条带分析,分离回收差异甲基化条带并克隆入T载体,阳性克隆进行测序,将测序结果进行BLAST分析,初步了解与乙型肝炎病毒感染后表型不一致的单卵孪生子相关的差异甲基化基因情况。结果在一对表型一致的单卵孪生子间基因组CpG岛甲基化分析显示条带几乎相同,而在另一对表型一致以及一对表型不一致的单卵孪生子之间均存在差异甲基化条带,前者差异甲基化条带数目少于后者,将得到的差异甲基化条带克隆入T载体,目前测序分析得到4个可能与乙型肝炎病毒感染后表型不一致的单卵孪生子相关的差异甲基化基因。结论乙型肝炎病毒感染后表型不一致的单卵孪生子间基因组CpG岛甲基化水平有差异,其对疾病表型的影响及机制尚需后续深入研究。

关键词：双生,单卵表型肝炎病毒,乙型甲基化 CpG岛甲基化单卵孪生子病毒感染后疾病表型甲基化谱乙型肝炎

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肿瘤坏死因子α、干扰素γ刺激对肺泡巨噬细胞表面主要模式识别受体表达的影响

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中华外科杂志 2005年第11期43卷 740-744页

作者：黄宏蒋建新朱佩芳王正国张道杰杨程 400042 重庆第三军医大学第三附属医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的观察脓毒症主要相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)对巨噬细胞表面主要模式识别受体(PRRs)表达的影响.方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,用TNFα、IFNγ(终浓度均为20 ng/ml )分别刺激细胞3 h、6 h、12 h,通过逆转录... 详细信息

目的观察脓毒症主要相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)对巨噬细胞表面主要模式识别受体(PRRs)表达的影响.方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,用TNFα、IFNγ(终浓度均为20 ng/ml )分别刺激细胞3 h、6 h、12 h,通过逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学检测细胞内PRRs,包括白细胞分化抗原14(CD14)、Toll样受体4(TLR4)、清道夫受体(SR)、细菌脂蛋白受体TLR2和细菌DNA受体TLR9 mRNA表达及其蛋白表达.结果 TNFα和IFNγ表现为不同程度地上调与炎细胞激活作用有关的PRRs(CD14、TLR2、TLR9)(P<0.05),下调与炎细胞防御作用有关的SR(P<0.05),而对TLR4基因及蛋白表达无显著刺激作用(P>0.05).结论效应细胞释放的促炎因子TNFα、IFNγ能从基因转录和蛋白水平上对细胞表面PRRs产生明显的反馈调控作用,对于促进失控性炎症反应的发生具有一定病理生理意义.

关键词：脓毒症巨噬细胞,肺泡肿瘤坏死因子α 干扰素Ⅱ型模式识别受体

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内毒素血症小鼠血浆Ox-LDL的变化及其对LPS致炎效应的影响

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第三军医大学学报 2005年第11期27卷 1086-1088页

作者：周健蒋建新黄显凯单佑安第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的　探讨内毒素血症小鼠血浆氧化型低密度脂蛋白(Ox LDL)的变化规律及其对内毒素(LPS)作用的影响。方法　静脉分别注射LPS 1、2 5、5mg kg ,复制小鼠内毒素血症模型,ELISA法检测血浆Ox LDL含量;Ox LDL 0 3 5、1 4mg kg静脉注射预处... 详细信息

目的　探讨内毒素血症小鼠血浆氧化型低密度脂蛋白(Ox LDL)的变化规律及其对内毒素(LPS)作用的影响。方法　静脉分别注射LPS 1、2 5、5mg kg ,复制小鼠内毒素血症模型,ELISA法检测血浆Ox LDL含量;Ox LDL 0 3 5、1 4mg kg静脉注射预处理小鼠,3 0min后注射LPS 1mg kg ,ELISA法测定血浆TNF α含量;观察Ox LDL预处理对内毒素血症小鼠2 4h死亡率的影响。结果　内毒素血症小鼠血浆Ox LDL明显升高,LPS注射后0 5～8h ,各剂量组血浆Ox LDL水平均显著高于正常对照(P <0 0 1) ;不同剂量Ox LDL预处理小鼠血浆TNF α水平均显著高于LPS单纯注射组同时相点(P <0 0 1) ,且2 4h死亡率增加。结论　内毒素血症小鼠血浆Ox LDL水平明显增高,与LPS呈明显的量效关系;Ox LDL能增强LPS的致炎效应,这可能与其部分封闭清道夫受体(SR) ,导致LPS清除减少有关。

关键词： LPS 氧化型低密度脂蛋白 TNF-α SR CD14

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内毒素血症大鼠颈迷走神经传出放电变化

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第三军医大学学报 2005年第9期27卷 850-852页

作者：黄健杨志焕第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的　观察内毒素血症时大鼠颈迷走神经传出放电的变化。方法　SD大鼠随机分为两组:内毒素组静脉注射内毒素5mg/kg ;对照组注射等容量生理盐水。应用神经电生理技术,记录并分析内毒素注射后3 0min、1、2、4h颈迷走神经传出放电频率的改... 详细信息

目的　观察内毒素血症时大鼠颈迷走神经传出放电的变化。方法　SD大鼠随机分为两组:内毒素组静脉注射内毒素5mg/kg ;对照组注射等容量生理盐水。应用神经电生理技术,记录并分析内毒素注射后3 0min、1、2、4h颈迷走神经传出放电频率的改变。结果　两组基础放电差异无显著性意义(P >0 0 5 )。大鼠注射内毒素后各时间点放电频率明显升高,与基础放电及注射生理盐水组的对应时间点相比,差异有显著性意义(P <0 0 5 )。结论　内毒素血症时颈迷走神经传出活动增强,这种改变可能是机体发挥其内源性抗炎保护作用的途径之一。

关键词：迷走神经内毒素血症传出放电

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