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第三军医大学学报 2005年第18期27卷 1844-1847页

作者：黄文朱佩芳王正国冯刚杨志焕第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察BALB/c和C57BL/6小鼠间的创伤反应差异现象。方法以BALB/c和C57BL/6两近交系小鼠为研究对象,采用冲击波所致全身冲击伤模型,观察伤后即刻、1、6、24、72 h的动物死亡率和肺损伤严重度的病理形态学。结果在相同的冲击伤条件下,BA... 详细信息

目的观察BALB/c和C57BL/6小鼠间的创伤反应差异现象。方法以BALB/c和C57BL/6两近交系小鼠为研究对象,采用冲击波所致全身冲击伤模型,观察伤后即刻、1、6、24、72 h的动物死亡率和肺损伤严重度的病理形态学。结果在相同的冲击伤条件下,BALB/c和C57BL/6小鼠伤后72 h内的死亡率和肺损伤严重度的病理形态学有明显差异,BALB/c和C57BL/6小鼠的死亡率主要发生在伤后1 h内,但在同系动物内雌雄之间的死亡率和肺损伤程度并无明显差异。结论BALB/c和C57BL/6两系小鼠间存在对冲击伤的创伤反应差异现象,这当中异质性可能与两系小鼠在遗传背景上的差异有关。

关键词：创伤反应差异小鼠遗传背景

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水下冲击波致犬肺损伤的病理学观察

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第三军医大学学报 2005年第12期27卷 1216-1219页

作者：刘大维杨志焕张波朱佩芳蒋建新王正国尹志勇周继红李晓炎宁心冯刚第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的　探讨水下冲击伤后犬肺的病理学改变。方法　成年杂种犬3 7只,布放于离爆心3 5～17 5m处,分别用2 0 0、5 0 0g和10 0 0gTNT水下3m爆炸,水中压力传感器测定冲击波物理参数,观察伤后肺的大体形态学改变以及光镜和电镜下组织结构的... 详细信息

目的　探讨水下冲击伤后犬肺的病理学改变。方法　成年杂种犬3 7只,布放于离爆心3 5～17 5m处,分别用2 0 0、5 0 0g和10 0 0gTNT水下3m爆炸,水中压力传感器测定冲击波物理参数,观察伤后肺的大体形态学改变以及光镜和电镜下组织结构的变化。结果　肺损伤的发生率达83 7% ,大体形态学改变主要为肺出血、肺水肿及少数肺撕裂;光镜下可见肺泡腔内有大量的红细胞及纤维蛋白渗出;电镜下可见肺泡壁毛细血管内皮细胞破坏严重,部分线粒体出现空泡变与髓鞘样结构,核膜不完整等特点。结论　严重的肺出血和肺水肿可能为动物水下冲击伤早期死亡的主要原因。

关键词：水下冲击波肺组织病理学改变

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鼠TRAM蛋白B细胞表位预测及其免疫原性检测

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免疫学杂志 2005年第3期21卷 248-251页

作者：陈力勇朱佩芳杨策吕凤林蒋建新王正国第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室重庆400042

目的预测TRAM蛋白的二级结构和B细胞表位,为抗鼠TRAM单克隆抗体制备奠定基础.方法以TRAM蛋白的氨基酸序列为基础,采用Goldkeu计算机分析软件以及网络nnpredict二级结构分析软件对TRAM蛋白二级结构及B细胞表位预测.合成针对该表位的多肽... 详细信息

目的预测TRAM蛋白的二级结构和B细胞表位,为抗鼠TRAM单克隆抗体制备奠定基础.方法以TRAM蛋白的氨基酸序列为基础,采用Goldkeu计算机分析软件以及网络nnpredict二级结构分析软件对TRAM蛋白二级结构及B细胞表位预测.合成针对该表位的多肽,以此多肽为免疫原免疫兔,对其免疫原性进行检测.结果用多参数预测TRAM蛋白的二级结构和B细胞表位,综合评判表明:TRAM分子的第216～229位氨基酸满足亲水性、可及性和可塑性,在二级结构上位于蛋白伸展结构或无规则卷曲结构内,最可能为其优势B细胞表位.此多肽能诱导机体产生较高的抗体滴度,多克隆抗体具有高的特异性.结论 TRAM分子的第216～229位氨基酸为其优势B细胞表位,这为制作B细胞优势短肽单克隆抗体提供了理论依据.

关键词： TRAM蛋白 B细胞表位二级结构免疫原性

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PKA信号通路调控体外培养大鼠脑片的CRHmRNA表达的研究

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第三军医大学学报 2005年第10期27卷 964-967页

作者：陈立朝许民辉周继红第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经外科重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的　探讨大鼠下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA的蛋白激酶A (PKA)信号调控机制。方法　通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用Westernblot及逆转录多聚合酶链反应(RT PCR)技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激... 详细信息

目的　探讨大鼠下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA的蛋白激酶A (PKA)信号调控机制。方法　通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用Westernblot及逆转录多聚合酶链反应(RT PCR)技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(CRH1R)后PKA信号通路的活性变化,及其与CRHmRNA表达的关系。结果　CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化环腺苷一磷酸反应元件结合蛋白(CREB)及CRHmRNA含量明显增加,而CP 15 45 2 6、H89可显著抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRHmRNA含量的增加。结论　在下丘脑离体脑片培养条件下,CRH可通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRHmRNA的表达的超短正反馈调节。

关键词：应激反应下丘脑脑片促肾上腺皮质激素释放激素mRNA 促肾上腺皮质激素释放激素受体

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应用改良甲基化间区位点扩增(AIMS)技术对人类全基因组CpG岛甲基化谱的分析

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解放军医学杂志 2005年第3期30卷 219-222页

作者：徐宝艳王宇明邓国宏杜泽丽兰林罗元辉黄燕萍第三军医大学西南医院全军感染病研究所重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学全军消化专科中心

目的　进行人类全基因组CpG岛甲基化谱分析。方法　采用改良甲基化间区位点扩增(AIMS)技术,以甲基化敏感和甲基化不敏感的3组同裂酶进行分析。分析6%、8%、10%3种变性测序胶对于分析人类甲基化谱电泳条带的影响,3种酶切组合的分析效... 详细信息

目的　进行人类全基因组CpG岛甲基化谱分析。方法　采用改良甲基化间区位点扩增(AIMS)技术,以甲基化敏感和甲基化不敏感的3组同裂酶进行分析。分析6%、8%、10%3种变性测序胶对于分析人类甲基化谱电泳条带的影响,3种酶切组合的分析效果以及进行放射自显影和分子成像系统分析的对比。结果　得到具有个体差异的人类基因组CpG岛甲基化图谱,为后续研究奠定了基础。6%变性测序胶所得电泳条带的分辨率和条带范围明显优于8%和10%变性测序胶。3种酶切组合均可以很好地进行AIMS分析。放射自显影和PersonalMolecularImagerFX分子成像系统两种方法相辅相成。结论　改良AIMS技术是一种甲基化高通量分析方法,具有简单、特异、易操作的特点。所选3组内切酶组合可以较全面的覆盖人类CpG岛,使分析结果更加准确,且所需的基因组量少,可满足临床微量标本检测的需要。

关键词：甲基化谱表观遗传学甲基化间区位点扩增

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髓样分化蛋白2在内毒素/脂多糖激活人脐静脉内皮细胞中作用的实验研究

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中华烧伤杂志 2005年第2期21卷 97-99页

作者：熊建琼朱佩芳王正国蒋建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室第三军医大学西南医院急诊科 400038

目的　探讨髓样分化蛋白2(MD- 2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及其在内毒素/脂多糖(LPS)激活HUVEC中的作用。　方法　分离、培养HUVEC,采用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)和蛋白免疫印迹(Westernblot)方法,检测LPS刺激前后HUVEC的MD... 详细信息

目的　探讨髓样分化蛋白2(MD- 2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及其在内毒素/脂多糖(LPS)激活HUVEC中的作用。　方法　分离、培养HUVEC,采用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)和蛋白免疫印迹(Westernblot)方法,检测LPS刺激前后HUVEC的MD- 2mRNA及其蛋白表达水平,用目的条带吸光度(A)值表示;HUVEC转染0. 5、1. 0、2. 0μgMD 2突变质粒(MD 2C95Y)及2. 0μgpEF BOS空载体质粒、2. 0μgMD 2质粒后, 观察LPS刺激对HUVEC核因子(NF)κB活性和其分泌白细胞介素(IL)8能力的影响, NF κB的测定值用A450nm表示。　结果　LPS刺激前, HU VECMD 2mRNA及蛋白有表达, LPS能明显上调其表达水平, 并呈一定的时间和剂量依赖性。LPS刺激前MD- 2蛋白A值为25 196±1 723,明显低于0. 01mg/LLPS刺激6h的A值(58 817±3 241,P<0. 01);转染MD 2C95Y能明显抑制LPS对HUVECNF- κB的激活和IL 8的分泌。　结论　M-D 2在LPS激活/损伤HUVEC效应中具有重要的地位。

关键词：人脐静脉内皮细胞内毒素激活实验研究髓样蛋白2 逆转录聚合酶链反应脂多糖(LPS) 培养HUVEC 蛋白免疫印迹蛋白表达水平 MD-2蛋白白细胞介素剂量依赖性 NF-κB 分化蛋白载体质粒 IL-8 表达及吸光度 BOS 核因子

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细菌脂多糖、脂蛋白和DNA体内协同致病作用观察

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中华创伤杂志 2005年第9期21卷 668-671页

作者：黄宏蒋建新朱佩芳王正国张道杰杨程 400042 重庆第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室

目的观察细菌脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS)、脂蛋白(bacterial lipoprotein, BLP)及其DNA[鸟嘌呤二核苷酸(CpG)寡核苷酸(oligonucleoetide), CpG-ODN]的体内协同致病作用. 方法 147只小鼠随机分为等渗盐水对照组、单纯LPS组、单纯CpG-ODN组、单纯BLP组、LPS+BLP组、LPS+ CpG-ODN组和LPS+BLP+CpG-ODN组,尾静脉注射给药,观察小鼠死亡率及血清肿瘤坏死因子(TNF)-α水平. 结果注射后12,24,48 h,二联组的死亡率显著高于单独给药组(P <0.05或P< 0.01);三联给药组各时相点死亡率显著高于二联组(P<0.05).单独给药后6 h,TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.05),12,24 h与对照组比较,差异无统计学意义.二联组与单因素组和对照组比较,6,12 h血TNF-α均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).三者联合刺激时,6,12 h血TNF-α与二联组比较,差异有统计学意义(P<0.05),至24 h仍显著高于对照组(P<0.05). 结论细菌LPS、细菌脂蛋白和细菌DNA不仅自身存在一定的致病能力,而且三者间具有明显的协同效应,特别是三者联合给药时作用最强.

关键词：脂多糖细菌脂蛋白细菌DNA 肿瘤坏死因子

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小鼠肺泡巨噬细胞清道夫受体和CD14表达与肺损伤的相关性研究(英文)

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中国临床康复 2005年第6期9卷 222-224页

作者：杨策蒋建新朱佩芳解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市400042

背景:清道夫受体(scavengerreceptor,SR)和CD14与内毒素性肺损伤密切相关,进一步揭示其表达变化规律及其与肺损伤的关系,有助于深入阐明创伤、感染后肺脏炎症反应失衡的受体机制。目的:探讨创伤及合并内毒素攻击时肺泡巨噬细胞CD14和SR... 详细信息

背景:清道夫受体(scavengerreceptor,SR)和CD14与内毒素性肺损伤密切相关,进一步揭示其表达变化规律及其与肺损伤的关系,有助于深入阐明创伤、感染后肺脏炎症反应失衡的受体机制。目的:探讨创伤及合并内毒素攻击时肺泡巨噬细胞CD14和SR的表达及其效应。设计:随机对照的实验研究。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室。材料:实验于2001-08/11在第三军医大学野战外科研究所(国家重点实验室)完成。选用63只昆明种小鼠及其肺泡巨噬细胞。方法:实验动物随机分为对照组、创伤组和创伤合并内毒素组。采用双侧股骨骨折合并内毒素攻击小鼠模型,内毒素(5mg/kg)于骨折后1h经小鼠尾静脉注入,检测创伤及合并内毒素攻击后小鼠肺泡巨噬细胞CD14和SR的表达变化。结果:创伤后6h,肺泡巨噬细胞CD14和SR分别呈上调和下调表达,合并内毒素攻击后CD14和SR进一步发生显著的上调和下调性改变。相关分析显示肺泡巨噬细胞CD14和SR呈负相关关系。结论:创伤及合并内毒素攻击后肺泡巨噬细胞CD14和SR的双向调变可能与肺脏炎症反应由“自控”向“失控”转化有关,有效拮抗CD14和SR的双向调变策略,有助于进一步认识肺损伤及其修复机制。

关键词：抗原内毒素血症巨噬细胞创伤和损伤

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汽车正向碰撞所致交通伤的实验研究

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中华创伤杂志 2005年第5期21卷 378-380页

作者：郭晓丽朱佩芳王正国尹志勇谭浩陈海斌蒋建新第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所全军交通医学研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室重庆400042

目的应用实车碰撞模拟轿车驾驶员无防护状态下的交通伤,探讨轿车正向高速碰撞交通伤的发生情况和伤情特点。方法杂种大白猪8只随机分为4组,分别将猪以坐姿固定于驾驶员座椅上,以49,64,72.80km/h的行驶速度正向与壁障相撞,观察伤后猪存... 详细信息

目的应用实车碰撞模拟轿车驾驶员无防护状态下的交通伤,探讨轿车正向高速碰撞交通伤的发生情况和伤情特点。方法杂种大白猪8只随机分为4组,分别将猪以坐姿固定于驾驶员座椅上,以49,64,72.80km/h的行驶速度正向与壁障相撞,观察伤后猪存活情况、器官组织形态学改变以及伤情特点。结果伤后猪5min内死亡2只,11,15min各死亡1只,4只存活4h以上。损伤类型主要为撞击伤和挤压伤,形态学改变主要表现为躯体部分挤压毁损、体腔破裂、肢体离断骨折,心、肺、肝、脾、胃肠等器官均有不同程度损伤、破裂和出血,伤后肺含水量明显增多。实验猪均存在多发伤和胸腹联合伤。结论车辆正向碰撞极其危险,多发伤发生率高,伤情复杂、严重,多合并有重要脏器损伤。

关键词：交通伤碰撞实验研究形态学改变汽车伤情特点胸腹联合伤发生情况存活情况器官组织损伤类型主要表现肢体离断不同程度脏器损伤驾驶员多发伤挤压伤撞击伤含水量发生率轿车破裂

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三羟异黄酮对失血性休克大鼠肠系膜上动脉收缩反应性的影响

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中国药理学通报 2005年第6期21卷 675-680页

作者：周荣刘良明胡德耀曾晓荣第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室·创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 泸州医学院心肌生理教研室四川泸州646000

目的研究三羟异黄酮(genistein,GST)对失血性休克大鼠肠系膜上动脉收缩反应性的影响及其可能机制。方法建立大鼠失血性休克(3.9kPa,2h)模型。采用离体血管环张力测定实验,观察三羟异黄酮及酪氨酸蛋白磷酸酶抑制剂钒酸钠(sodiumorthovann... 详细信息

目的研究三羟异黄酮(genistein,GST)对失血性休克大鼠肠系膜上动脉收缩反应性的影响及其可能机制。方法建立大鼠失血性休克(3.9kPa,2h)模型。采用离体血管环张力测定实验,观察三羟异黄酮及酪氨酸蛋白磷酸酶抑制剂钒酸钠(sodiumorthovannadate,Na3VO4)对休克大鼠肠系膜上动脉血管收缩反应性的影响;采用细胞贴附式膜片钳记录技术,观察三羟异黄酮及钒酸钠对休克大鼠肠系膜上动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(largeconductancecalciumactivatedpotassiumchannel,BKCa)活动的影响。结果失血性休克导致大鼠肠系膜上动脉对去甲肾上腺素(noradrenine,NE)的收缩反应性降低,三羟异黄酮可在一定的剂量范围内明显改善失血性休克引起的血管低反应性;钒酸钠则可引起休克血管收缩反应性的进一步降低,且该作用可被0.1mmol·L-1TEA部分阻断;进一步的研究显示,失血性休克可引起大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌细胞BKCa通道活动的增强,三羟异黄酮可抑制休克血管平滑肌细胞BKCa通道活动,且该作用可被钒酸钠逆转。结论三羟异黄酮可通过干预由PTK介导的酪氨酸蛋白磷酸化,防止失血性休克血管平滑肌细胞BKCa通道活动的增强,从而有效恢复失血性休克大鼠肠系膜上动脉对NE的收缩反应性。

关键词：三羟异黄酮失血性休克血管低反应性钙激活钾通道膜片钳

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