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重庆医科大学学报 2014年第11期39卷 1613-1616页

作者：余静曾灵李勇邓婷婷蒋建新王继红重庆医科大学实验教学中心生物化学与分子生物学实验室、分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室第四研究室重庆400042

目的：探讨小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblast cell,MEF）作为滋养细胞对体外培养肺泡上皮Ⅱ型细胞（alveolar epithelial typeⅡcells,ATⅡ）干性的维持作用。方法：通过分散酶（Dispase）、分散酶/胶原酶（colleganse/d... 详细信息

目的：探讨小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblast cell,MEF）作为滋养细胞对体外培养肺泡上皮Ⅱ型细胞（alveolar epithelial typeⅡcells,ATⅡ）干性的维持作用。方法：通过分散酶（Dispase）、分散酶/胶原酶（colleganse/disapase）和脱氧核糖核酸酶（DNaseⅠ）联合消化小鼠肺组织,制备肺单细胞悬液,通过免疫黏附法纯化ATⅡ。高糖DMEM添加10%FBS、双抗（青霉素20 U/ml,链霉素20 U/ml）;将传代后的ATⅡ接种至丝裂霉素处理的MEF（inactivated MEF,i MEF）培养,并以肺泡表面活性蛋白C（surfactant protein C,SPC）和水通道蛋白5（aquaporins 5,AQP5）为标记蛋白进行鉴定。结果：平均每只成年小鼠可得到总有核细胞数为（1.7-2.0）×10^7。ATⅡ细胞传代接种于滋养细胞前3代都能维持在未分化状态,第4代分化成为肺泡上皮Ⅰ型细胞（alveolar epithelial typeⅠcells,ATⅠ）;而传代后没有接种在滋养细胞上的ATⅡ细胞在第1代就分化成ATⅠ细胞。结论：小鼠胚胎成纤维细胞在一定时段能够维持ATⅡ的干性。

关键词：滋养细胞肺泡上皮Ⅱ型细胞细胞培养

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人多巴胺D2受体基因内含子区51103T/C多态性对基因转录活性的影响

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解放军医药杂志 2014年第11期26卷 30-33,42页

作者：段朝霞张洁元陈魁君李晓霞王建民李兵仓第三军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨人多巴胺D2受体(DRD2)基因第3内含子区51 103 bp位点单核苷酸多态性(rs2075652)对DRD2基因转录活性的影响,进一步揭示DRD2基因第3内含子区的单核苷酸多态性影响创伤后应激障碍发病风险的分子机制。方法以人全血基因组DNA为模板... 详细信息

目的探讨人多巴胺D2受体(DRD2)基因第3内含子区51 103 bp位点单核苷酸多态性(rs2075652)对DRD2基因转录活性的影响,进一步揭示DRD2基因第3内含子区的单核苷酸多态性影响创伤后应激障碍发病风险的分子机制。方法以人全血基因组DNA为模板,扩增DRD2基因第3内含子区序列(399 bp),51 103 bp处分别为T或C,与报告基因载体pmir Glo相连接,构建重组荧光素酶表达载体,经限制性内切酶酶切及测序得以鉴定,然后分别与pRL-CMV共转染人胚肾癌细胞株HEK293,检测细胞中荧光素酶的相对表达量。结果双酶切及测序结果证实成功构建重组质粒pmir Glo-T/pmir Glo-C,荧光素酶检测结果显示,当第3内含子区51 103 bp位点为C时荧光素酶活性显著高于为T时(P<0.01)。结论成功构建了pmir Glo-T/pmir Glo-C报告基因重组质粒,DRD2基因第3内含子区rs2075652位点由T突变为C后,可能增强基因转录活性,该结果为进一步研究DRD2基因内含子区的功能奠定了基础。

关键词：多巴胺受体D2 内含子区荧光素酶活性基因多态性

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环孢素A对严重创伤失血性休克大鼠的治疗作用

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局解手术学杂志 2014年第3期23卷 250-252页

作者：杨光明彭小勇李涛徐竞刘良明第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察环孢素A(CsA)对创伤失血性休克大鼠的治疗作用。方法采用144只健康成年SD大鼠,分为正常对照组、休克对照组、乳酸林格氏液(LR)复苏组、CsA 1 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg组。建立创伤失血性休克模型后,观察不同剂量CsA治疗对休克... 详细信息

目的观察环孢素A(CsA)对创伤失血性休克大鼠的治疗作用。方法采用144只健康成年SD大鼠,分为正常对照组、休克对照组、乳酸林格氏液(LR)复苏组、CsA 1 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg组。建立创伤失血性休克模型后,观察不同剂量CsA治疗对休克动物的存活时间和24 h存活率的影响,同时通过股动脉和左心室插管测定血流动力学指标,观察CsA对大鼠平均动脉血压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室压力最大上升/下降速率(±dp/dtmax)和心率(HR)的影响。结果 CsA(5 mg/kg和10 mg/kg)可明显提高创伤失血性休克大鼠的存活时间和24 h存活率。休克后大鼠血流动力学指标包括MAP、LVSP、±dp/dtmax和HR都显著降低,LR复苏可使各项指标有所回升,但显著低于正常对照组;CsA(5 mg/kg和10 mg/kg)可明显升高LVSP和±dp/dtmax,在复苏2 h时明显高于LR组,并接近正常水平。结论 CsA显示出较好的抗创伤失血性休克作用,其中以5 mg/kg和10 mg/kg的给药剂量效果明显。

关键词：失血性休克创伤环孢素A 血流动力学

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叶绿素降解产物与5-对羧基苯基-10,15,20-三间羟基苯基二氢卟吩金属络合物的PEG-叶酸化修饰

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精细化工中间体 2014年第4期44卷 43-47页

作者：李鹏熙李东红创伤烧伤复合伤国家重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室重庆400042

对焦脱镁叶绿酸a,脱镁叶绿酸-a甲酯,紫红素-18及5-对羧基苯基-10,15,20-三间羟基苯基二氢卟吩金属络合物进行PEG-叶酸化修饰,得到了一系列水溶性和光稳定性较好的光敏剂,其结构经UV、IR、1H NMR、HPLC确证。

关键词：光敏剂金属卟吩叶酸焦脱镁叶绿酸a 脱镁叶绿酸-a甲酯紫红素-18

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不同复苏压力对颅脑创伤合并非控制性失血性休克大鼠血流动力学及存活率的影响

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局解手术学杂志 2014年第4期23卷 372-375页

作者：朱娱田昆仑吴跃蓝丹陈向云刘良明李涛第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨颅脑创伤合并非控制性失血性休克大鼠彻底止血前的理想复苏压力。方法制作大鼠颅脑创伤合并非控制性失血性休克模型,观察彻底止血前不同复苏压力(50 mmHg、60 mmHg、70 mmHg、80 mmHg和90 mmHg)对输液量、失血量、血流动力学、... 详细信息

目的探讨颅脑创伤合并非控制性失血性休克大鼠彻底止血前的理想复苏压力。方法制作大鼠颅脑创伤合并非控制性失血性休克模型,观察彻底止血前不同复苏压力(50 mmHg、60 mmHg、70 mmHg、80 mmHg和90 mmHg)对输液量、失血量、血流动力学、大脑灌注以及动物存活率的影响。结果不同复苏压力对颅脑创伤合并非控制性失血性休克的失血量有明显的影响,随着复苏压力的增加,大鼠的失血量、输液量逐渐增加,当复苏压力大于80 mmHg时,其失血量和输液量显著高于70 mmHg。当复苏压力小于70 mmHg时,随着复苏压力增加,脑含水量和血流量逐渐增加,70 mmHg复苏组脑含水量接近假手术组,而80 mmHg和90 mmHg组的血流量反而下降。血压维持在50 mmHg、60 mmHg、70 mmHg动物的存活时间和存活率明显高于常压(80 mmHg和90 mmHg)复苏组;50 mmHg、60 mmHg、70 mmHg组的血流动力学指标明显得到改善。结论对于颅脑创伤合并非控制性出血性休克,最理想的复苏压力是70 mmHg,它能改善血流动力学,降低脑水肿,提高动物存活率。

关键词：颅脑创伤非控失血性休克复苏压力大鼠

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胸部撞击伤复合脂多糖致急性肺损伤大鼠模型的建立

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创伤外科杂志 2014年第1期16卷 46-49页

作者：王海燕杜娟赵玉金李海胜杨策岳彩黎蒋建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的建立SD(Sprague Dawley)大鼠经胸部撞击复合内毒素所致急性肺损伤(ALI)模型,为后续ALI的救治和发病机制研究提供支撑。方法采用BMI-Ⅲ型生物撞击机,对SD大鼠行右侧胸部准静态正面撞击,比较动物受撞击后的呼吸及伤后24h肺部大体伤情... 详细信息

目的建立SD(Sprague Dawley)大鼠经胸部撞击复合内毒素所致急性肺损伤(ALI)模型,为后续ALI的救治和发病机制研究提供支撑。方法采用BMI-Ⅲ型生物撞击机,对SD大鼠行右侧胸部准静态正面撞击,比较动物受撞击后的呼吸及伤后24h肺部大体伤情。确认25kPa为合适的驱动压力后,于撞击后即刻通过尾静脉分别注射10、15、20mg/kg 3种剂量脂多糖(LPS),观察伤后动物的死亡率及肺损伤病理情况。结果 250kPa所致肺损伤伤情中度,动物无死亡。撞击后即刻复合LPS的3种剂量中,20mg/kg可致动物48h死亡率为80%,10mg/kg则致动物48h死亡率仅20%,15mg/kg致动物48h死亡率为70%。250kPa+15mg/kg条件下的肺组织病理检测可见撞击区旁红细胞、炎细胞聚集,肺泡腔及肺泡间隔出现粉红色液体,肺泡间隔增厚等ALI典型病变。结论以250kPa驱动压力行右侧胸部撞击复合15mg/kg的LPS静脉注射,既保证伤情达到一定严重程度,又保证后续能得到有效的治疗观察结果,为最佳致伤条件。所建立的大鼠ALI动物模型操作简便,致伤参数可控,且重复性好,病变典型,可作为研究急性肺损伤较理想的实验动物模型。

关键词：胸部损伤肺损伤撞击伤生物撞击机大鼠

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吴茱萸碱抗炎机制的初步研究

吴茱萸碱抗炎机制的初步研究

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：范霞杨雪唐婉琦严军梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的体外研究吴茱萸碱的抗炎效应及其作用机制。方法本研究先用酵母多糖刺激RAW264.7细胞株。细胞经不同浓度的吴茱萸碱(25μM,50μM,100μM)预作用1h后,加入100μg/ml酵母多糖并作用6h。分别通过荧光定量PCR和ELISA方法检测炎症因子IL-... 详细信息

目的体外研究吴茱萸碱的抗炎效应及其作用机制。方法本研究先用酵母多糖刺激RAW264.7细胞株。细胞经不同浓度的吴茱萸碱(25μM,50μM,100μM)预作用1h后,加入100μg/ml酵母多糖并作用6h。分别通过荧光定量PCR和ELISA方法检测炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA以及蛋白水平。为了进一步探究吴茱萸碱的分子作用机制,收集酵母多糖与吴茱萸碱联合作用1h的细胞团块,并通过ELISA和Western blot方法检测NF-κB p65的DNA结合活性以及NF-κB相关信号通路分子的蛋白表达水平,同时利用免疫荧光检测NF-κB p65入核情况。结果与酵母多糖单独处理组相比,吴茱萸碱能够有效降低IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白水平(P<0.01),并且呈现浓度梯度依赖性;在1h时,吴茱萸碱能显著下调NF-κB p65的DNA结合能力(P<0.05)。Western blot和免疫荧光结果显示吴茱萸碱并不能抑制MAPKs家族(ERK,JNK,p38)的活化,但是可显著降低胞核中p65的含量及其磷酸化水平,同时吴茱萸碱对IκBα蛋白的降解以及IκBα磷酸化具有抑制作用。结论吴茱萸碱具有明显的抗炎效应,而此作用是通过下调IκBα磷酸化水平,阻止IκBα蛋白的降解,进而阻抑NF-κB p65入核来实现的。

关键词：吴茱萸碱抗炎效应酵母多糖抗炎机制磷酸化水平初步研究

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胍丁胺对脂多糖诱导的急性肝损伤的保护作用

胍丁胺对脂多糖诱导的急性肝损伤的保护作用

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：李炫飞范霞郑志华杨雪刘政龚建平梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的研究胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导肝损伤的保护作用,并探讨其相应的分子机制。方法将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(20只,腹腔注射磷酸盐缓冲液)、LPS模型组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg)和AGM... 详细信息

目的研究胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导肝损伤的保护作用,并探讨其相应的分子机制。方法将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(20只,腹腔注射磷酸盐缓冲液)、LPS模型组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg)和AGM治疗组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg和AGM200mg/kg),各组于注射后6h和24h处死,每组每时相点10只,采集血和肝组织标本。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和肝组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)的含量,全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,Western Blot检测肝组织匀浆中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)在细胞核内的含量,并观察肝组织病理变化。结果 LPS注射6h各组小鼠均表现为精神萎靡、蜷缩少动、禁饮食水,但其中AGM治疗组小鼠精神和活动明显好于LPS模型组。AGM治疗后能有效降低LPS所致小鼠外周血中ALT(U/L:107.9±8.5比189.9±13.6,P<0.05)、AST(U/L:347.4±24.9比716.8±60.4,P<0.05)、TBIL(μmol/L:8.3±1.9比10.6±2.5,P<0.05)和炎症因子TNF-α(ng/ml:296.3±42.5比627.2±81.3,P<0.05)、IL-1β(ng/ml:109±12.3比264±18.8,P<0.05)、IL-6(μg/ml:11.4±1.9比23-6±2.5,P<0.05)的含量,减少肝脏组织匀浆中TNF-α(ng/g:287.4±32.5比461±31.4,P<0.05)、IL-1β(pg/g:146±13.5比351±28.7,P<0.05)和NF-κB p65入核蛋白水平(NF-κB/核内参灰度值比值:0.54比0.85,P<0.05)。另外,LPS注射后24h肝脏出现明显病理改变,如肝细胞肿胀、坏死、充血和炎性细胞浸润等,但AGM治疗后肝组织损伤明显缓解。结论胍丁胺可能通过抑制LPS诱导的NF-κB入核,减少炎症因子的合成和释放,进而减轻小鼠肝组织的损伤。

关键词：胍丁胺 LPS 急性肝损伤白细胞介素

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外周胆碱酯酶抑制剂对严重创伤小鼠的保护作用

外周胆碱酯酶抑制剂对严重创伤小鼠的保护作用

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：刘政肖雅靳贺范霞杨雪唐婉琦严军梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的探讨外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明对严重创伤小鼠的保护作用。方法采用随机数字表法将18只体重18～19g的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组,脂多糖对照组,2次打击模型组和新斯的明干预组(0.14mg/kg),每组6只。通过双后肢骨折并去眼球放血以... 详细信息

目的探讨外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明对严重创伤小鼠的保护作用。方法采用随机数字表法将18只体重18～19g的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组,脂多糖对照组,2次打击模型组和新斯的明干预组(0.14mg/kg),每组6只。通过双后肢骨折并去眼球放血以及48h后注射脂多糖,构建"2次打击"小鼠模型模拟严重创伤并发院内感染。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的水平。生化分析仪测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。另70只雌性C57BL/6小鼠构建2次打击模型后,随机分为生理盐水对照组(34只)和新斯的明干预组(36只),观察生存情况。结果较脂多糖对照组,2次打击模型组内毒素休克反应更为迅速、强烈,表现为明显湿冷、腹泻、萎靡、寒颤等。新斯的明下调2次打击小鼠血清TNF-α、IL-6水平,而不影响IL-10的表达。与模型组相较,新斯的明干预组血清ALT、AST和LDH含量显著降低。严重创伤后注射新斯的明似乎可以降低2次打击小鼠病死率(22.22%vs 41.18%),但差异无统计学意义(p=0.083)。结论外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明能显著减轻严重创伤并发感染小鼠炎症反应,保护肝脏功能,但未能明显改善生存率。

关键词：创伤感染出血胆碱酯酶抑制剂

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应重视战伤批量伤员各阶梯抗感染策略研究

应重视战伤批量伤员各阶梯抗感染策略研究

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：梁华平王正国第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

业已证明,战伤感染是仅次于休克的致死原因,已成为并仍是野战外科学领域亟需解决的关键科学问题。现代战争中,由于战伤防护装备(如头盔、防弹衣)、急救技术前伸(前线机动手术队+损伤控制技术)以及快速后送工具的应用使得早期被抢救成功... 详细信息

业已证明,战伤感染是仅次于休克的致死原因,已成为并仍是野战外科学领域亟需解决的关键科学问题。现代战争中,由于战伤防护装备(如头盔、防弹衣)、急救技术前伸(前线机动手术队+损伤控制技术)以及快速后送工具的应用使得早期被抢救成功的重伤伤员数量明显增多,但此类伤员是后续感染的高危人群。即使是在清创术、组织修复术和抗生素应

关键词：批量伤员多器官功能障碍综合征抗感染战创伤凝血功能障碍策略研究

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