目的利用酵母表达技术制备重组人A20蛋白(rhA20),为进一步研究其在脓毒血症中的治疗作用奠定基础。方法利用基因工程技术构建rhA20毕赤酵母表达载体yevCFP-hA20,电转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,筛选高拷贝阳性菌株,甲醇诱导表达rhA20。产物用SDS-PAGE和W estern B lot鉴定。同时对诱导表达培养基的pH值和配方,以及培养环境温度等条件进行了优化研究。结果表达产物分子量约93×103,表达条件的优化研究提示:降低诱导培养基pH值、添加低剂量EDTA、蛋白酶水解物和降低培养温度,可以使全长表达产物提高11倍,占总蛋白的18.24%,达到(254.10±24.52)μg/m l水平。结论我们成功在巴斯德毕赤酵母GS115中表达了rhA20,通过对诱导培养基成分及诱导温度的优化,使全长rhA20表达得到明显提高,探索了人A20的生物合成途径,也为巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白遭遇降解时的处理提供了新的方法。
锌指蛋白A20(zinc finger protein A20,简称A20)是细胞凋亡研究中发现的一种肿瘤坏死因子α(TNFα)应答基因的编码产物,具有抑制细胞凋亡和下调NF-κB活性的双重功效闭。我们在相关研究中发现在LPS所致内毒素血症小鼠动物模型中,A20在...
详细信息
锌指蛋白A20(zinc finger protein A20,简称A20)是细胞凋亡研究中发现的一种肿瘤坏死因子α(TNFα)应答基因的编码产物,具有抑制细胞凋亡和下调NF-κB活性的双重功效闭。我们在相关研究中发现在LPS所致内毒素血症小鼠动物模型中,A20在外周血白细胞、肝、肺等组织中均存在高水平表达,且伴随动物体
暂无评论