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中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会

作者：汪洋张健周锐成名翔曾理吴宁宁李锐冬牟钰钦重庆医科大学附属第二医院: 骨科重庆医科大学: 检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学:附属第一医院骨科第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室创伤％烧伤与复合伤国家重点实验室重庆医科大学附属第二医院: 肝胆外科重庆医科大学药学院重庆医科大学: 检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学附属第二医院: 骨科

目的运用小鼠植骨气囊模型,研究NBD多肽、NBD多肽联合骨保护素(osteoprotegerin,OPG)减少骨破坏吸收防治人工关节松动的效应。方法在小鼠背部注入空气形成气囊,取同源小鼠的颅骨植入气囊内。

关键词： NBD多肽骨保护素人工关节植骨气囊动物模型无菌松动

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骨保护素抑制小鼠植骨气囊模型中聚乙烯磨损颗粒诱导的溶骨效应

骨保护素抑制小鼠植骨气囊模型中聚乙烯磨损颗粒诱导的溶骨效应

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中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会

作者：汪洋王信周锐姜蓉邓忠良张健陈婷梅重庆医科大学: 检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学:附属第一医院骨科重庆医科大学:附属第一医院骨科第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆医科大学:干细胞与组织工程研究室免疫组化室重庆医科大学附属第二医院骨科重庆医科大学: 检验系临床检验诊断学教育部重点实验室

目的运用小鼠植骨气囊模型,研究骨保护素(osteoprotegerin,OPG)减少破骨细胞骨破坏的吸收效应。方法在小鼠背部注入空气形成气囊,取同源小鼠的颅骨植入气囊内制作气囊模型。

关键词：骨保护素人工关节植骨气囊动物模型无菌松动

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人多巴胺D2受体基因内含子区51103T/C多态性对基因转录活性的影响

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解放军医药杂志 2014年第11期26卷 30-33,42页

作者：段朝霞张洁元陈魁君李晓霞王建民李兵仓第三军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨人多巴胺D2受体(DRD2)基因第3内含子区51 103 bp位点单核苷酸多态性(rs2075652)对DRD2基因转录活性的影响,进一步揭示DRD2基因第3内含子区的单核苷酸多态性影响创伤后应激障碍发病风险的分子机制。方法以人全血基因组DNA为模板... 详细信息

目的探讨人多巴胺D2受体(DRD2)基因第3内含子区51 103 bp位点单核苷酸多态性(rs2075652)对DRD2基因转录活性的影响,进一步揭示DRD2基因第3内含子区的单核苷酸多态性影响创伤后应激障碍发病风险的分子机制。方法以人全血基因组DNA为模板,扩增DRD2基因第3内含子区序列(399 bp),51 103 bp处分别为T或C,与报告基因载体pmir Glo相连接,构建重组荧光素酶表达载体,经限制性内切酶酶切及测序得以鉴定,然后分别与pRL-CMV共转染人胚肾癌细胞株HEK293,检测细胞中荧光素酶的相对表达量。结果双酶切及测序结果证实成功构建重组质粒pmir Glo-T/pmir Glo-C,荧光素酶检测结果显示,当第3内含子区51 103 bp位点为C时荧光素酶活性显著高于为T时(P<0.01)。结论成功构建了pmir Glo-T/pmir Glo-C报告基因重组质粒,DRD2基因第3内含子区rs2075652位点由T突变为C后,可能增强基因转录活性,该结果为进一步研究DRD2基因内含子区的功能奠定了基础。

关键词：多巴胺受体D2 内含子区荧光素酶活性基因多态性

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胸部撞击伤复合脂多糖致急性肺损伤大鼠模型的建立

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创伤外科杂志 2014年第1期16卷 46-49页

作者：王海燕杜娟赵玉金李海胜杨策岳彩黎蒋建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的建立SD(Sprague Dawley)大鼠经胸部撞击复合内毒素所致急性肺损伤(ALI)模型,为后续ALI的救治和发病机制研究提供支撑。方法采用BMI-Ⅲ型生物撞击机,对SD大鼠行右侧胸部准静态正面撞击,比较动物受撞击后的呼吸及伤后24h肺部大体伤情... 详细信息

目的建立SD(Sprague Dawley)大鼠经胸部撞击复合内毒素所致急性肺损伤(ALI)模型,为后续ALI的救治和发病机制研究提供支撑。方法采用BMI-Ⅲ型生物撞击机,对SD大鼠行右侧胸部准静态正面撞击,比较动物受撞击后的呼吸及伤后24h肺部大体伤情。确认25kPa为合适的驱动压力后,于撞击后即刻通过尾静脉分别注射10、15、20mg/kg 3种剂量脂多糖(LPS),观察伤后动物的死亡率及肺损伤病理情况。结果 250kPa所致肺损伤伤情中度,动物无死亡。撞击后即刻复合LPS的3种剂量中,20mg/kg可致动物48h死亡率为80%,10mg/kg则致动物48h死亡率仅20%,15mg/kg致动物48h死亡率为70%。250kPa+15mg/kg条件下的肺组织病理检测可见撞击区旁红细胞、炎细胞聚集,肺泡腔及肺泡间隔出现粉红色液体,肺泡间隔增厚等ALI典型病变。结论以250kPa驱动压力行右侧胸部撞击复合15mg/kg的LPS静脉注射,既保证伤情达到一定严重程度,又保证后续能得到有效的治疗观察结果,为最佳致伤条件。所建立的大鼠ALI动物模型操作简便,致伤参数可控,且重复性好,病变典型,可作为研究急性肺损伤较理想的实验动物模型。

关键词：胸部损伤肺损伤撞击伤生物撞击机大鼠

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新型靶向光敏剂光动力诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

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肿瘤学杂志 2014年第5期20卷 383-387页

作者：李鹏熙李毅李东红创伤烧伤复合伤国家重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所二室重庆400042 第三军医大学大坪医院肿瘤中心重庆400042

[目的]研究新型靶向光敏剂Ⅰ光动力诱导HeLa细胞死亡的方式。[方法]用流式细胞仪分析照射剂量和光敏剂浓度对HeLa细胞凋亡的影响,细胞凋亡和坏死的比例;并采用激光共聚焦观察细胞F-actin和核的变化;透射电镜观察细胞超微结构的改变。[结... 详细信息

[目的]研究新型靶向光敏剂Ⅰ光动力诱导HeLa细胞死亡的方式。[方法]用流式细胞仪分析照射剂量和光敏剂浓度对HeLa细胞凋亡的影响,细胞凋亡和坏死的比例;并采用激光共聚焦观察细胞F-actin和核的变化;透射电镜观察细胞超微结构的改变。[结果]光敏剂Ⅰ介导的光动力治疗可诱导HeLa细胞的凋亡和坏死,但凋亡的比例明显大于坏死(P=0.0053),且细胞凋亡的量分别与光照剂量(r=0.987,P<0.001)和光敏剂浓度(r=0.995,P<0.001)呈正相关;光动力诱导后,细胞的F-actin结构破坏,细胞皱缩,透射电镜下可见凋亡小体的形成。[结论]光敏剂Ⅰ介导的光动力治疗主要通过凋亡途径导致HeLa细胞的死亡。

关键词：靶向性光敏剂I HeLa细胞光动力治疗细胞凋亡

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吴茱萸碱抗炎机制的初步研究

吴茱萸碱抗炎机制的初步研究

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：范霞杨雪唐婉琦严军梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的体外研究吴茱萸碱的抗炎效应及其作用机制。方法本研究先用酵母多糖刺激RAW264.7细胞株。细胞经不同浓度的吴茱萸碱(25μM,50μM,100μM)预作用1h后,加入100μg/ml酵母多糖并作用6h。分别通过荧光定量PCR和ELISA方法检测炎症因子IL-... 详细信息

目的体外研究吴茱萸碱的抗炎效应及其作用机制。方法本研究先用酵母多糖刺激RAW264.7细胞株。细胞经不同浓度的吴茱萸碱(25μM,50μM,100μM)预作用1h后,加入100μg/ml酵母多糖并作用6h。分别通过荧光定量PCR和ELISA方法检测炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA以及蛋白水平。为了进一步探究吴茱萸碱的分子作用机制,收集酵母多糖与吴茱萸碱联合作用1h的细胞团块,并通过ELISA和Western blot方法检测NF-κB p65的DNA结合活性以及NF-κB相关信号通路分子的蛋白表达水平,同时利用免疫荧光检测NF-κB p65入核情况。结果与酵母多糖单独处理组相比,吴茱萸碱能够有效降低IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白水平(P<0.01),并且呈现浓度梯度依赖性;在1h时,吴茱萸碱能显著下调NF-κB p65的DNA结合能力(P<0.05)。Western blot和免疫荧光结果显示吴茱萸碱并不能抑制MAPKs家族(ERK,JNK,p38)的活化,但是可显著降低胞核中p65的含量及其磷酸化水平,同时吴茱萸碱对IκBα蛋白的降解以及IκBα磷酸化具有抑制作用。结论吴茱萸碱具有明显的抗炎效应,而此作用是通过下调IκBα磷酸化水平,阻止IκBα蛋白的降解,进而阻抑NF-κB p65入核来实现的。

关键词：吴茱萸碱抗炎效应酵母多糖抗炎机制磷酸化水平初步研究

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胍丁胺对脂多糖诱导的急性肝损伤的保护作用

胍丁胺对脂多糖诱导的急性肝损伤的保护作用

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：李炫飞范霞郑志华杨雪刘政龚建平梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的研究胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导肝损伤的保护作用,并探讨其相应的分子机制。方法将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(20只,腹腔注射磷酸盐缓冲液)、LPS模型组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg)和AGM... 详细信息

目的研究胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导肝损伤的保护作用,并探讨其相应的分子机制。方法将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(20只,腹腔注射磷酸盐缓冲液)、LPS模型组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg)和AGM治疗组(20只,腹腔注射LPS10mg/kg和AGM200mg/kg),各组于注射后6h和24h处死,每组每时相点10只,采集血和肝组织标本。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和肝组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)的含量,全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,Western Blot检测肝组织匀浆中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)在细胞核内的含量,并观察肝组织病理变化。结果 LPS注射6h各组小鼠均表现为精神萎靡、蜷缩少动、禁饮食水,但其中AGM治疗组小鼠精神和活动明显好于LPS模型组。AGM治疗后能有效降低LPS所致小鼠外周血中ALT(U/L:107.9±8.5比189.9±13.6,P<0.05)、AST(U/L:347.4±24.9比716.8±60.4,P<0.05)、TBIL(μmol/L:8.3±1.9比10.6±2.5,P<0.05)和炎症因子TNF-α(ng/ml:296.3±42.5比627.2±81.3,P<0.05)、IL-1β(ng/ml:109±12.3比264±18.8,P<0.05)、IL-6(μg/ml:11.4±1.9比23-6±2.5,P<0.05)的含量,减少肝脏组织匀浆中TNF-α(ng/g:287.4±32.5比461±31.4,P<0.05)、IL-1β(pg/g:146±13.5比351±28.7,P<0.05)和NF-κB p65入核蛋白水平(NF-κB/核内参灰度值比值:0.54比0.85,P<0.05)。另外,LPS注射后24h肝脏出现明显病理改变,如肝细胞肿胀、坏死、充血和炎性细胞浸润等,但AGM治疗后肝组织损伤明显缓解。结论胍丁胺可能通过抑制LPS诱导的NF-κB入核,减少炎症因子的合成和释放,进而减轻小鼠肝组织的损伤。

关键词：胍丁胺 LPS 急性肝损伤白细胞介素

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外周胆碱酯酶抑制剂对严重创伤小鼠的保护作用

外周胆碱酯酶抑制剂对严重创伤小鼠的保护作用

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：刘政肖雅靳贺范霞杨雪唐婉琦严军梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的探讨外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明对严重创伤小鼠的保护作用。方法采用随机数字表法将18只体重18～19g的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组,脂多糖对照组,2次打击模型组和新斯的明干预组(0.14mg/kg),每组6只。通过双后肢骨折并去眼球放血以... 详细信息

目的探讨外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明对严重创伤小鼠的保护作用。方法采用随机数字表法将18只体重18～19g的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组,脂多糖对照组,2次打击模型组和新斯的明干预组(0.14mg/kg),每组6只。通过双后肢骨折并去眼球放血以及48h后注射脂多糖,构建"2次打击"小鼠模型模拟严重创伤并发院内感染。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的水平。生化分析仪测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。另70只雌性C57BL/6小鼠构建2次打击模型后,随机分为生理盐水对照组(34只)和新斯的明干预组(36只),观察生存情况。结果较脂多糖对照组,2次打击模型组内毒素休克反应更为迅速、强烈,表现为明显湿冷、腹泻、萎靡、寒颤等。新斯的明下调2次打击小鼠血清TNF-α、IL-6水平,而不影响IL-10的表达。与模型组相较,新斯的明干预组血清ALT、AST和LDH含量显著降低。严重创伤后注射新斯的明似乎可以降低2次打击小鼠病死率(22.22%vs 41.18%),但差异无统计学意义(p=0.083)。结论外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明能显著减轻严重创伤并发感染小鼠炎症反应,保护肝脏功能,但未能明显改善生存率。

关键词：创伤感染出血胆碱酯酶抑制剂

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应重视战伤批量伤员各阶梯抗感染策略研究

应重视战伤批量伤员各阶梯抗感染策略研究

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：梁华平王正国第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

业已证明,战伤感染是仅次于休克的致死原因,已成为并仍是野战外科学领域亟需解决的关键科学问题。现代战争中,由于战伤防护装备(如头盔、防弹衣)、急救技术前伸(前线机动手术队+损伤控制技术)以及快速后送工具的应用使得早期被抢救成功... 详细信息

业已证明,战伤感染是仅次于休克的致死原因,已成为并仍是野战外科学领域亟需解决的关键科学问题。现代战争中,由于战伤防护装备(如头盔、防弹衣)、急救技术前伸(前线机动手术队+损伤控制技术)以及快速后送工具的应用使得早期被抢救成功的重伤伤员数量明显增多,但此类伤员是后续感染的高危人群。即使是在清创术、组织修复术和抗生素应

关键词：批量伤员多器官功能障碍综合征抗感染战创伤凝血功能障碍策略研究

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P13ⅣAKT／mToR信号通路介导黄芩苷抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2014年第1期30卷 60-67页

作者：吴登艳邓娅郝进徐祥重庆医科大学附属第二医院皮肤科第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

黄芩苷作为一种黄酮类成分可通过抑制细胞增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，但它是否对异常增生的瘢痕具有抑制增生的作用尚不清楚．本研究探讨黄芩苷抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的分子机制．采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷（... 详细信息

黄芩苷作为一种黄酮类成分可通过抑制细胞增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，但它是否对异常增生的瘢痕具有抑制增生的作用尚不清楚．本研究探讨黄芩苷抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的分子机制．采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷（2．24×10^-2～2．24×10^2mmol／L）对体外培养的增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的抑制作用．发现浓度为2．24×10^0～2．24×10^2mmol／L黄芩苷处理组明显抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖（P〈0．05）．转染后的荧光素酶报告基因活性检测、RT—PCR及Western印迹分析技术检测其mRNA水平及细胞的帽状依赖翻译的表达．2．24×10^2mmol／L黄芩苷处理后，黄芩苷作用组的mRNA水平并无明显差异（P〉0．05）；增生性瘢痕成纤维细胞的帽状依赖结构的翻译明显被黄芩苷所抑制．采用Western印迹分析检测被黄芩苷干预的增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖相关的蛋白的表达；m^7GTP琼脂糖殊沉淀结合蛋白4E—BPl与elF4E的变化．发现增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、4EBPl、elF4E及其上游的AKT表达明显下调（P〈0．05），而PTEN表达明显上调．p-AKT（Ser473）、p-mTOR（Ser2448）、p．S6（Ser235／236）、p4EBPl（Thr37／46）、p-PTEN（T380／S382／383）磷酸化水平下降（P〈0．05）．在黄芩苷作用下的增生性成纤维细胞中的游离的4E。BPl明显减少（P〈0．05），而与eIF4E结合的***明显增加（P〈0．05）黄芩苷诱导游离的4E—BP1与eIF4E结合，从而抑制帽状依赖蛋白翻译．以上结果说明，黄芩苷可通过抑制P13K／AKT／mTOR信号通路抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖．

关键词：黄芩苷人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖 P13K AKT mTOR信号通路

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