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第三军医大学学报 2013年第9期35卷 854-857页

作者：胡畔李涛丁晓莉刘良明第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室/创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的:研究脓毒性休克大鼠内质网应激模型中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulatedprotein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBPhomologousprotein,CHOP)蛋白表达的变化及其与血管通透性改变的关系。方法:42只成... 详细信息

目的:研究脓毒性休克大鼠内质网应激模型中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulatedprotein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBPhomologousprotein,CHOP)蛋白表达的变化及其与血管通透性改变的关系。方法:42只成年sD大鼠,雌雄各半,体质量200－220g,随机分为3组:①假手术组;②盲肠造瘘组,按照术后时间长短盲肠造瘘组又分为术后1、2、4、6、8h等5个亚组;③盲肠造瘘+牛磺酸组(n=6)。用异硫氰酸荧光素标记的牛血清门蛋白注入肺组织.往术后1、2、4、6、8h时分别取各组相应大鼠肺脏,牛磺酸干预组于术后6h取出,乍理盐水进行肺灌洗,观察其荧光物质渗透率的变化测量肺毛细血管通透性;Westernblot方法测量肺血管内皮细胞GRP78和CHOP蚩h的表达并对各组进行比较。结果:①大鼠盲肠造瘘术后1、2、4、6、8h后GRP78和CHOP蛋白表达均呈递增趋势[(,(GRP78)<0.05;P(CHOP)<0.05],肺血管荧光物质渗透率也随着时问的延长呈直线递增的趋势(P=0.006<0.05),“肠造瘘组各组GRP78和CHOP蛋白的表达与肺血管荧光物质渗透率的改变呈正相炎(R2=0.785,P<0.05;R2=0.881.P<0.05);②牛磺酸处理后,6h点肺血管荧光物质渗透率显著低于单纯盲肠造瘘术后(P=0.007<0.05),GRP78和CHOP蛋白的表达也较盲肠造瘘组低(P=0.004<0.05)。结论:脓毒性休克内质网臆激参与了血管通透性增高的发生,GRP78和CHOP蛋门为重要的参与分子。

关键词：博来霉素长春新碱多柔比星肺环磷酰胺毛细血管通透性泼尼松休克脓毒性大鼠动物男(雄)性牛女(雌)性

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不同年龄大鼠非控制性失血性休克的理想复苏压力

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创伤外科杂志 2013年第2期15卷 111-114页

作者：吴跃朱娱田昆仑彭小勇蓝丹刘良明李涛第三军医大学大坪医院野战外科研究所二室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察不同年龄(6周、14周和1年)大鼠在失血性休克时的理想复苏压力。方法通过横断脾实质和切断1根脾动脉分支复制非控制性出血性大鼠休克模型,用乳酸林格液(LR)和羟乙基淀粉(HS)(体积比2:1)进行复苏,将复苏血压分别维持在40、50、60... 详细信息

目的观察不同年龄(6周、14周和1年)大鼠在失血性休克时的理想复苏压力。方法通过横断脾实质和切断1根脾动脉分支复制非控制性出血性大鼠休克模型,用乳酸林格液(LR)和羟乙基淀粉(HS)(体积比2:1)进行复苏,将复苏血压分别维持在40、50、60、70和80mmHg 1h,彻底止血后用全血(由供血鼠提供)和乳酸林格氏液1:2进行复苏使平均动脉压维持在80～90mmHg 2h。观察不同年龄大鼠的出血量、输液量、血流动力学指标、血气分析、动物存活、组织血流量和器官功能。结果 6周龄大鼠,非控制性出血期间失血性休克复苏的允许性低血压是40～50mmHg。14周龄鼠和1年鼠在非控制性出血期间的允许性复苏血压力分别是50～60mmHg和70mmHg。6周和14周大鼠,雌性大鼠低压复苏比雄性大鼠有更好的效果,但是1年龄大鼠低压复苏影响无性别差异。结论不同年龄段失血性休克大鼠在活动性出血期间(非控出血期间)具有不同允许性低压复苏血压。6周、14周和1年龄大鼠允许性低血压分别为40～50mmHg,50～60mmHg和70mmHg。

关键词：失血性休克复苏血压大鼠

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一种便携式医用磁感应测量装置的设计

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医疗卫生装备 2013年第8期34卷 7-9,23页

作者：高丹丹吴宝明冯正权第三军医大学大坪医院野战外科研究所第五研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的:设计一种便携式高精度的磁感应相位检测装置。方法:设计一种基于梯度线圈主磁场抵消技术以及新型鉴相芯片SYPD-1的便携式医用磁感应测量装置。整个系统包括梯度线圈结构、差动放大器、鉴相器、单片机处理电路和显示电路。SYPD-1是... 详细信息

目的:设计一种便携式高精度的磁感应相位检测装置。方法:设计一种基于梯度线圈主磁场抵消技术以及新型鉴相芯片SYPD-1的便携式医用磁感应测量装置。整个系统包括梯度线圈结构、差动放大器、鉴相器、单片机处理电路和显示电路。SYPD-1是新上市的无源鉴相芯片,鉴相带宽1～100 MHz,灵敏度8 mV/(°),相位差分辨率不超过0.03°,是当前分辨率最高的鉴相芯片,使用方便。结果 :该装置可以分辨出电导率为0.5、1.3、7.8 S/m的3种同体积NaCl溶液,且具有较好的线性度。结论:该磁感应测量装置实现了高精度和便携式的要求,具有一定的实用价值和很大的改进空间。

关键词：磁感应相位差电导率梯度线圈 SYPD-1

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小鼠血管内皮细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用的研究

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解放军医药杂志 2013年第1期25卷 10-13页

作者：段朝霞陈魁君张洁元李兵仓王建民第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨小鼠血管内皮细胞的培养、鉴定方法及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对其增殖活性的调节作用。方法取小鼠主动脉,去除周围的脂肪和结缔组织,将动脉环剪成0.5 mm大小,放入基质胶处理的12孔培养板内,待细胞长满,用胰酶消化后,取单细... 详细信息

目的探讨小鼠血管内皮细胞的培养、鉴定方法及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对其增殖活性的调节作用。方法取小鼠主动脉,去除周围的脂肪和结缔组织,将动脉环剪成0.5 mm大小,放入基质胶处理的12孔培养板内,待细胞长满,用胰酶消化后,取单细胞悬液用抗CD146免疫磁珠纯化,再用CD31抗体鉴定细胞纯度,按104个细胞/孔加入96孔板培养,细胞70%～80%融合时用不同浓度MIF或MIF抑制剂处理细胞,48 h后用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖程度。结果经CD146磁珠纯化后细胞纯度为95%以上,MTT检测结果显示低剂量MIF能促进血管内皮细胞的增殖,并具有剂量效应关系,而高剂量MIF则与MIF抑制剂一样,抑制血管内皮细胞的增殖。结论成功建立了简单可行的小鼠血管内皮细胞的体外培养方法,并证实一定剂量范围内的MIF能促进血管内皮细胞的增殖,说明MIF在血管内皮细胞的多种病理生理反应中起重要作用。

关键词：巨噬细胞移动抑制因子血管内皮细胞细胞培养技术剂量效应关系小鼠

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创伤后并发症的定义与诊断专家共识

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中华创伤杂志 2013年第6期29卷 481-484页

作者：蒋建新顾玮张连阳周建张茂郝定元马渝胡平白祥军李占飞王立祥陈德昌李维勤第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心重庆400042 浙江大学医学院第二附属医院急诊中心重庆市医疗急救中心华中科技大学同济医学院同济医院创伤科武警总医院急救中心第二军医大学附属长征医院急救中心南京军区总医院普通外科研究所

中华医学会创伤学分会创伤感染学组创伤急救与多发伤学组随着创伤急救体系的不断完善和救治技术的日益提高，因创伤直接导致的死亡虽已有明显减少，但是，早期救治得以生存的严重创伤患者在院内治疗过程中仍面临各种并发症的严重威胁... 详细信息

中华医学会创伤学分会创伤感染学组创伤急救与多发伤学组随着创伤急救体系的不断完善和救治技术的日益提高，因创伤直接导致的死亡虽已有明显减少，但是，早期救治得以生存的严重创伤患者在院内治疗过程中仍面临各种并发症的严重威胁，是患者早期和后期死亡的主要原因。创伤并发症的种类很多。目前普遍存在定义与诊断标准不完全一致的问题，致使临床上创伤并发症的分类较为混乱。

关键词：创伤感染后并发症诊断标准创伤并发症专家创伤患者早期救治中华医学会

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cdk5在LPS诱导培养实验大鼠腹主动脉内皮细胞凋亡中的可能作用

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微循环学杂志 2013年第2期23卷 40-43,I0002页

作者：周荣丁晓莉刘良明第三军医大学第三附属医院野战外科研究所第二研究室创伤烧伤及复合伤国家重点实验室重庆400042

目的:探讨周期素依赖性蛋白激酶5(cdk5)在脂多糖(LPS)诱导培养血管内皮细胞(VEC)凋亡中的可能作用。方法:采用原代培养的大鼠腹主动脉EC,经LPS刺激培养不同时间后,ELISA测定cdk5和半氮酶酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,同时观察cdk5特异性抑... 详细信息

目的:探讨周期素依赖性蛋白激酶5(cdk5)在脂多糖(LPS)诱导培养血管内皮细胞(VEC)凋亡中的可能作用。方法:采用原代培养的大鼠腹主动脉EC,经LPS刺激培养不同时间后,ELISA测定cdk5和半氮酶酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,同时观察cdk5特异性抑制Roscvitine(Ros)对caspase-3活性的影响;WesternBlot-ting检测cdk5蛋白表达。结果:培养的大鼠腹主动脉EC经LPS(10μg/ml)刺激培养4～24h,其caspase-3活性升高,cdk5活性也明显增强(P<0.05或P<0.01),Ros(25～50μM)可显著抑制LPS刺激培养后VECcaspase-3活性(P<0.05)。培养的EC胞浆及胞核均有cdk5蛋白表达,LPS刺激培养15～30min,cdk5由胞浆向胞核转位,1～8h胞浆及胞核cdk5表达均显著增强(P<0.05或P<0.01)。结论:cdk5可能参与LPS致VEC凋亡。

关键词：脂多糖内皮细胞周期素依赖性蛋白激酶5 半胱氨酸蛋白酶-3

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关于胰岛素样生长因子Ⅰ及其与炎症关系的研究进展

关于胰岛素样生长因子Ⅰ及其与炎症关系的研究进展

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国际休克·脓毒症高峰论坛暨第九届中国病理生理学会休克专业委员会学术大会

作者：张醇严军刘东擘范霞杨雪梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

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胍丁胺对酵母多糖诱导的小鼠全身炎症反应的影响

胍丁胺对酵母多糖诱导的小鼠全身炎症反应的影响

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2013中国医师协会中西医结合医师大会

作者：李炫飞顾颖范霞杨雪严军梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆 400042

目的探讨胍丁胺(一种生物活性胺)对酵母多糖诱导的小鼠全身炎症反应的影响。方法将32只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组、胍丁胺对照组、酵母多糖刺激组、胍丁胺治疗组4组,每组8只。给药12h后检测各组肝、肾、胰腺... 详细信息

目的探讨胍丁胺(一种生物活性胺)对酵母多糖诱导的小鼠全身炎症反应的影响。方法将32只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组、胍丁胺对照组、酵母多糖刺激组、胍丁胺治疗组4组,每组8只。给药12h后检测各组肝、肾、胰腺血清酶标记物、血清及腹腔渗出液中TNF-α、IL-6,总一氧化氮(NO)水平,同时检测肺和小肠组织中TNF-α、IL-6、髓过氧化物酶(MPO)活性及凋亡情况,并观察肺和小肠的组织病理学改变。结果与酵母多糖组相比,胍丁胺治疗后可明显降低血清及腹腔渗出液中TNF-α、IL-6和NO水平,减轻酵母多糖对肺、肝及胰腺的损害,抑制酵母多糖诱导的肺和小肠组织的凋亡及组织病理学改变。结论胍丁胺能够拮抗酵母多糖诱导的小鼠全身炎症反应的发生,发挥器官功能的保护效应。

关键词：胍丁胺酵母多糖炎症

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吴茱萸碱对成熟骨髓来源树突状细胞功能的体外调节作用

吴茱萸碱对成熟骨髓来源树突状细胞功能的体外调节作用

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2013中国医师协会中西医结合医师大会

作者：杨雪范霞唐婉琦严军梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆 400042

目的在完成骨髓树突状细胞(bone marrow dendritic cell, BMDC)的体外培养、诱导和鉴定的基础上,探讨吴茱萸碱(evodiamine,Evo)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的成熟BMDC功能的影响.方法 BMDC细胞源自4-6周的C57BL/6小鼠.常规脱颈处死小鼠,分离其双后肢股骨内的骨髓细胞进行体外培养一周(RPMI1640+10％FBS).每隔48h加入GM-CSF(终浓度为25ng/ml),持续诱导7d,使其悬浮细胞或轻微贴壁细胞主要类型为为BMDC.然后分为以下6组进行药物刺激：(1)iDC组;(2)iDC+Evo(10μM)组;(3) iDC+Evo(50μM)组;(4) iDC+LPS(1μg/ml)组;(5)iDC+LPS(1μg/ml) +Evo(10μM)组;(6) iDC+LPS(1μg/ml)+Evo(50μM)组.刺激24h后,取DBA/2J小鼠脾,制备细胞悬液,置于6孔板中,RPMI1640+10％FBS、 37℃、5％CO2培养2-3h,取非粘附脾细胞备用.然后将各组刺激后的BMDC细胞与异原的非粘附脾细胞以1∶16的细胞量进行共培养,4天后用MTT的方法检测其细胞活性.同时,收集多余的BMDC细胞进行膜标记分子(CD11c)、共刺激分子(CD40、 CD80、 CD86)、共抑制分子(PD-L1)和MHC分子(I-A/I-E);收集细胞上清用于IL-6、 IL-10、IL-12和TNF-α的ELISA检测. 结果从形态上看,骨髓细胞体外诱导7d后大部分已具备BMDC的多刺状结构,FACS结果显示,悬浮和轻微贴壁细胞中CD11c+的比例约在80％以上,与未加LPS刺激的三组(iDC组和不同浓度Evo干预组)相比,LPS刺激后的三组(iDC+LPS组和不同浓度Evo干预+LPS组)CD40+、CD80+、 CD86+、PD-L1+和I-AA-E的比例都明显升高,其IL-6、IL-10、 IL-12和TNF-α的表达也高于前者各组.相对于仅加LPS组而言,加入不同浓度的Evo对于其表达CD40+、CD80+、CD86+、PD-L1+和I-A,/I-E的水平均有不同程度的降低趋势,而且除IL-10以外,IL-6、IL-12和TNF-α的表达也明显降低,其中高浓度Evo干预对上述各分子以及细胞因子的抑制作用更为明显.在异源淋巴细胞增殖实验中,加入LPS刺激组的细胞活性均比未加入LPS刺激组的要高,而Evo能抑制其激活非粘附脾细胞的增长.结论 BMDC的体外诱导体系正常,可获得纯度较高的***刺激后的BMDC功能得到活化,可明显激活非粘附脾细胞的增长,而Evo干预能够在一定程度上抑制共刺激分子、共抑制分子、MHC分子、异源淋巴细胞增殖水平以及炎性因子的表达,并且这种作用随Evo干预浓度的增加而加强.提示Evo可以负向影响成熟BMDC的抗原递呈功能,可能是其抗炎作用发挥的另一机制.

关键词：吴茱萸碱树突状细胞体外调节

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炎症反应过程中胍丁胺对淋巴细胞凋亡的干预作用研究

炎症反应过程中胍丁胺对淋巴细胞凋亡的干预作用研究

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2013中国医师协会中西医结合医师大会

作者：严军杨雪李炫飞范霞唐婉琦梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆 400042

目的体内和体外探讨酵母多糖(Zymosan,Zym)是否会引起T细胞和B细胞凋亡及其规律,同时采用研究不同浓度胍丁胺(Agmatine)进行干预以明确其对机体淋巴细胞凋亡是否具有保护作用.方法在体内研究中,以C57BL/6小鼠为实验动物,腹腔注射Zym(6... 详细信息

目的体内和体外探讨酵母多糖(Zymosan,Zym)是否会引起T细胞和B细胞凋亡及其规律,同时采用研究不同浓度胍丁胺(Agmatine)进行干预以明确其对机体淋巴细胞凋亡是否具有保护作用.方法在体内研究中,以C57BL/6小鼠为实验动物,腹腔注射Zym(600mg/kg和1500mg/kg)以制备小鼠致炎剂量和致死剂量体内腹膜炎模型,同时采用不同浓度(200mg/kg、400mg/kg和800mg/kg)的胍丁胺硫酸盐(Agmatine Sulfate Salt,ASS)为干预药物(致炎条件研究用200mg/kg ASS,致死条件研究ASS剂量用200mg/kg、400mg/kg和800mg/kg),设立对照组、Zym处理组和Zym复合各浓度ASS组,时间点为处理后12小时、24小时和7天(前2个时间点为致炎条件研究,后1个时间点为致死条件研究),到各时间点后取小鼠胸腺和脾,观察器官形态后制备细胞悬液,APC-CD4或APC-CD19、 FITC-Annexin V、 PI染色,流式细胞检测凋亡情况(凋亡和坏死细胞占CD4+/CD19+细胞的比例);在体外研究中,取C57BL/6小鼠胸腺和脾细胞进行细胞培养,加入不同浓度Zym (0、 10、 50、 100、250和500μg/ml),同时分别加入不同浓度ASS(60、300、1500μM),以确定其最佳量效关系,设立组别同体内实验,时间点设立同体内实验中的致炎研究,后续方法同体内实验.结果体内研究中,Zym处理7天后,小鼠脾和胸腺体积与对照组差异明显,凋亡率和坏死率在Zym和Zym复合800mg/kg ASS组中的差异不显著(P＞0.05),但与200mg/kg以及400mg/kg的差异较明显(P＜0.05).体外研究中,Zym与胸腺和脾细胞凋亡呈剂量依赖型关系,其最佳作用浓度为50μg/ml,而ASS发挥最佳保护效应的浓度为60μM.结论 Zym可以引起体内和体外T、B淋巴细胞大量凋亡(尤其是B细胞),而一定浓度ASS对机体炎症后的细胞凋亡具有保护作用,但与其浓度有关.60μM ASS对T细胞(包括胸腺和脾)的保护作用最强,随着ASS浓度的持续升高,保护作用开始减弱,但对B细胞的抗凋亡保护作用逐渐增强.

关键词：炎症胍丁胺淋巴细胞凋亡

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