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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：杨策钟河江王海燕严军周建云刘庆黄苏娜程英蒋建新重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)是HPA轴的最终效应激素,对免疫系统具有重要调控作用。因GCs具有广泛而重要的免疫抑制特性,被临床上作为抗炎药物。大量研究表明,除了免疫抑制效应外,内源性或天然GCs也可产生免疫刺激作用。本研究... 详细信息

目的糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)是HPA轴的最终效应激素,对免疫系统具有重要调控作用。因GCs具有广泛而重要的免疫抑制特性,被临床上作为抗炎药物。大量研究表明,除了免疫抑制效应外,内源性或天然GCs也可产生免疫刺激作用。本研究从内质网应激(endoplasmic reticulumstress,ERS)角度研究低浓度GCs对小鼠腹腔巨噬细胞免疫刺激作用。方法应用不同浓度皮质酮

关键词：小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激皮质酮免疫刺激作用免疫功能糖皮质激素

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腹主动脉夹闭缺血预处理对失血性休克大鼠血管反应性及钙敏感性的影响

腹主动脉夹闭缺血预处理对失血性休克大鼠血管反应性及钙敏感性的...

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：胡弋唐小唪李涛葛衡江刘良明第三军医大学大坪医院野战外科研究所麻醉科第二研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的严重创伤/休克病人常出现不同程度的血管低反应性,这种血管低反应性的发生严重影响着休克的发生、发展以及治疗,是休克后期血压难以回升和导致死亡的重要原因之一。本实验室前期研究表明在休克后血管低反应性的发生机制中,钙失敏具... 详细信息

目的严重创伤/休克病人常出现不同程度的血管低反应性,这种血管低反应性的发生严重影响着休克的发生、发展以及治疗,是休克后期血压难以回升和导致死亡的重要原因之一。本实验室前期研究表明在休克后血管低反应性的发生机制中,钙失敏具有重要的作用。因此,寻求增加休克后血管钙敏感性,并进而改善血管低反应性的方法具有重要的临床意义。同时,本实验室前期研究还发现应用药物预处理的方法可明显改善在体失血性休克大鼠血管的反应性。本研究拟采用缺血预处理的

关键词：钙敏感性失血性休克缺血预处理主动脉

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急性束缚应激对CRH基因敲除小鼠免疫细胞内质网应激的影响及其与免疫功能变化的关系

急性束缚应激对CRH基因敲除小鼠免疫细胞内质网应激的影响及其与...

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：杨策钟河江王海燕严军周建云刘庆黄苏娜程英蒋建新重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的创伤后即刻出现的神经内分泌反应对免疫功能具有重要的调控作用。下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)轴激活是创伤早期主要的神经内分泌反应。促肾上腺皮质素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)是... 详细信息

目的创伤后即刻出现的神经内分泌反应对免疫功能具有重要的调控作用。下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)轴激活是创伤早期主要的神经内分泌反应。促肾上腺皮质素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)是HPA轴的枢纽分子。本研究通过观察急性束缚应激后HPA轴活性对免疫细胞ERS的影响及其与免疫功能变化的关系。方法选用CRH三种基因型(+/+,+/-,-/-)小鼠,雌雄不拘,观察在束缚应激1 h后腹腔细胞内质网应激(endoplasmic reticulum

关键词：急性束缚应激免疫细胞内质网应激基因敲除小鼠 CRH 免疫功能

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去甲肾上腺素通过巨噬细胞内质网应激XBP-1途径影响天然免疫功能

去甲肾上腺素通过巨噬细胞内质网应激XBP-1途径影响天然免疫功能

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：杨策钟河江王海燕严军周建云刘庆黄苏娜程英蒋建新重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的神经内分泌激素对天然免疫功能的调控在创伤机体恢复内环境稳定中发挥着至关重要的作用。本研究观察天然去甲肾上腺素在无免疫刺激条件下对腹腔巨噬细胞天然免疫功能的影响及其与内质网应激的关系。方法应用不同浓度去甲肾上腺素处... 详细信息

目的神经内分泌激素对天然免疫功能的调控在创伤机体恢复内环境稳定中发挥着至关重要的作用。本研究观察天然去甲肾上腺素在无免疫刺激条件下对腹腔巨噬细胞天然免疫功能的影响及其与内质网应激的关系。方法应用不同浓度去甲肾上腺素处理小鼠腹腔巨噬细胞,观察细胞黏附、趋

关键词：天然免疫去甲肾上腺素巨噬细胞 XBP-1 内质网应激

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免疫组化技术方法的分析总结

免疫组化技术方法的分析总结

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：代维刘大维重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的分析免疫组化操作过程中的影响因素、探讨操作要点及改进方法。方法通过我室免疫组化700余例标本的制作,分析总结免疫组化操作过程中的影响因素和操作要点。结果切片染色定位准确,背景清晰,与临床病理相符或基本相符的有673例,占91.... 详细信息

目的分析免疫组化操作过程中的影响因素、探讨操作要点及改进方法。方法通过我室免疫组化700余例标本的制作,分析总结免疫组化操作过程中的影响因素和操作要点。结果切片染色定位准确,背景清晰,与临床病理相符或基本相符的有673例,占91.7%;脱片者16例占2.2%;非特异性染

关键词：免疫组化技术操作过程操作要点分析总结

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水下冲击伤后犬主要脏器的病理学改变

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西北国防医学杂志 2009年第1期30卷 1-4页

作者：刘大维杨志焕周继红张波蒋建新黄宏朱佩芳王正国尹志勇张岫竹宁心李晓炎代维严军董蕻王锋张良杨在亮第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆/全军交通医学研究所重庆400042

目的:观察动物水下冲击伤后主要脏器的形态学变化。方法:采用大体、光镜和电镜的方法观察犬水下冲击伤后肺脏、小肠及心脏的病理变化。结果:损伤动物大体解剖可见明显肺出血、水肿,光镜下可见肺出血、淤血,肺泡腔内有大量的红细胞及纤... 详细信息

目的:观察动物水下冲击伤后主要脏器的形态学变化。方法:采用大体、光镜和电镜的方法观察犬水下冲击伤后肺脏、小肠及心脏的病理变化。结果:损伤动物大体解剖可见明显肺出血、水肿,光镜下可见肺出血、淤血,肺泡腔内有大量的红细胞及纤维蛋白渗出,电镜下可见肺泡壁毛细血管内皮细胞破坏严重,部分线粒体出现空泡变与髓鞘样结构。以出血为主的肠道损伤明显可见。可见少量心肌纤维断裂,心肌细胞肿胀。结论:严重的肺出血、水肿可能是水下冲击伤动物早期死亡的主要原因。动物伤情的严重程度与水下冲击波的正向冲量密切相关。肠道损伤也应引起足够重视。

关键词：水下冲击伤肺损伤肠损伤

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小鼠XBP1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及筛选

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现代生物医学进展 2009年第8期9卷 1401-1404页

作者：钟河江蒋建新王海燕杨策张冲严军刘庆黄苏娜第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所全军交通伤重点实验室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的:构建小鼠XBP1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,筛选具有较好干扰效率的小鼠XBP1 siRNA靶序列。方法:针对小鼠XBP1基因特异性序列,设计4个RNAi靶序列及1个阴性对照序列,合成含有正义和反义OligoDNA的互补DNA序列,退... 详细信息

目的:构建小鼠XBP1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,筛选具有较好干扰效率的小鼠XBP1 siRNA靶序列。方法:针对小鼠XBP1基因特异性序列,设计4个RNAi靶序列及1个阴性对照序列,合成含有正义和反义OligoDNA的互补DNA序列,退火形成双链DNA,并克隆到经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCL-GFP载体连接产生短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定。由病毒包装系统进行包装,经滴度测定后感染NIH3T3细胞,应用Real-timePCR鉴定干扰效率。结果:PCR鉴定与DNA测序证实合成的寡核苷酸链插入正确,293T细胞测定病毒滴度为1×108TU/ml。Real-timePCR证实XBP1-siRNA-3靶点的干扰效率最高,其干扰效率达到95%以上。结论:成功构建并筛选了小鼠XBP1基因RNAi慢病毒载体,为研究XBP1在巨噬细胞免疫功能调控中的作用奠定了基础。

关键词： RNA干扰 XBP1 慢病毒

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皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞发生内质网应激的作用

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现代生物医学进展 2009年第7期9卷 1233-1236页

目的:观察内源性糖皮质激素皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激相关蛋白GRP78、XBP1-S及ATF6蛋白表达水平的影响,并探讨皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激的作用。方法:分离成年雄性C57/BL6小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为四组,分别以... 详细信息

目的:观察内源性糖皮质激素皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激相关蛋白GRP78、XBP1-S及ATF6蛋白表达水平的影响,并探讨皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激的作用。方法:分离成年雄性C57/BL6小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为四组,分别以终浓度为0、10、50及1000ng/ml皮质酮处理小鼠腹腔巨噬细胞,时间为1h,提取细胞总蛋白,应用Westernblotting方法检测内质网分子伴侣GRP78蛋白及未折叠蛋白反应信号转导通路转录因子XBP1-S和ATF6蛋白质表达变化。结果:低浓度皮质酮(10、50ng/ml)处理小鼠腹腔巨噬细胞1h后,均可显著地增加内质网分子伴侣GRP78蛋白表达,以50ng/ml皮质酮组增加最明显,而当皮质酮浓度达1000ng/ml时,GRP78蛋白增加不显著。并且,低浓度皮质酮(10、50ng/ml)可显著增强未折叠蛋白反应两个重要转录因子XBP1-S和p50ATF6蛋白表达。结论:这些结果表明低浓度内源性糖皮质激素皮质酮可诱发小鼠腹腔巨噬细胞发生内质网应激,激活未折叠蛋白质反应信号转导通路,其可能与巨噬细胞免疫功能增强有关。

关键词：皮质酮巨噬细胞内质网应激

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CRH促进大鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌及其受体途径

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中国神经免疫学和神经病学杂志 2009年第4期16卷 276-280页

作者：王伍超陈金萍张岫竹王旭辉刘大维周继红第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室全军/重庆市交通医学研究所重庆400042

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对大鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响及其受体途径。方法将原代培养的大鼠腹腔巨噬细胞分为对照组、CRH组、CRH受体(CRHR)1选择性阻断剂CP-154526+CRH组(简称CP+CRH组)、CRHR1/2非选... 详细信息

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对大鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响及其受体途径。方法将原代培养的大鼠腹腔巨噬细胞分为对照组、CRH组、CRH受体(CRHR)1选择性阻断剂CP-154526+CRH组(简称CP+CRH组)、CRHR1/2非选择性阻断剂α-helical CRH9-41+CRH组(简称HL+CRH组)以及蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89+CRH组(简称H89+CRH组)5组。对照组仅加入新鲜RPMI1640培养液2 mL培养;CRH处理组加入1×10^(-9) mol/L CRH培养液2 mL;后3组分别加入含CP-154526(5×10^(-4) mol/L)、α-helical CRH9-41(1×10^(-6) mol/L)以及H89(1×10^(-6) mol/L)培养基预孵育2 h,然后加入CRH使培养液CRH终浓度为1×10^(-9) mol/L。各组分别于CRH刺激后0.5、1、2、4、8 h收集培养皿中上清液,应用ELISA法检测IL-6水平。结果对照组巨噬细胞分泌IL-6维持在低水平。CRH组巨噬细胞分泌IL-6在2 h时增加,达(7.7±0.741)μg/g prot,高于同一时点的对照组(P<0.05),4 h时达高峰[(16.60±3.94)μg/gprot],接近同时相点对照组的3倍(P<0.01)。CP+CRH组巨噬细胞IL-6分泌量在2、4 h时下降非常显著,与同时点CRH组比较分别下降约88%、92%(P<0.01),低于同时点对照组(P<0.01)。H89+CRH组中巨噬细胞分泌IL-6在2、4 h显著下降(P<0.01),其抑制效应约66%～79%。结论 CRH可通过CRHR1激活巨噬细胞促进IL6分泌,与细胞内PKA信号密切相关。CRH在激活巨噬细胞的过程中可能起到允许和易化作用。

关键词：促肾上腺皮质激素释放激素促肾上腺皮质激素释放激素受体蛋白激酶A 巨噬细胞白细胞介素-6

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皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞发生内质网应激的作用

皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞发生内质网应激的作用

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：钟河江蒋建新王海燕杨策张冲严军刘庆黄苏娜重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的观察不同浓度皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激相关蛋白——糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein-78,GRP78)、X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)及激活转录因子6(activating transcription factor6,ATF6)蛋白表达水平的影响,探讨皮质酮诱导小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激的作用。方法分离培养成年雄性C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为四组,

关键词：小鼠腹腔巨噬细胞内质网应激皮质酮

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