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Actin骨架偶联IRAK-NF-κB信号通路参与细菌脂蛋白诱导的交叉耐受

中国病理生理杂志 2008年第8期24卷 1604-1609页

作者：周荣刘建仓刘良明刘韧肖南第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤、烧伤及复合伤国家重点实验室重庆400042

目的:采用人单核细胞株(THP-1),建立小剂量BLP诱导THP-1细胞对BLP耐受的细胞模型,观察BLP诱导THP-1细胞对BLP耐受及对LPS交叉耐受时细胞actin骨架的变化情况,并探讨细胞actin骨架在BLP耐受及交叉耐受形成中的作用。方法:采用人单核细胞... 详细信息

目的:采用人单核细胞株(THP-1),建立小剂量BLP诱导THP-1细胞对BLP耐受的细胞模型,观察BLP诱导THP-1细胞对BLP耐受及对LPS交叉耐受时细胞actin骨架的变化情况,并探讨细胞actin骨架在BLP耐受及交叉耐受形成中的作用。方法:采用人单核细胞株THP-1,建立小剂量BLP预处理诱导的BLP耐受细胞模型;采用ELISA法测定炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6浓度;采用FITC标记的鬼笔环肽进行actin骨架染色;采用EMSA法检测NF-κB转录活性。结果:大剂量BLP(100μg/L)及大剂量LPS(100μg/L)孵育6h可诱导THP-1细胞的炎症反应激活,TNF-α、IL-1β及IL-6的释放显著增加,白细胞介素-1受体相关激酶-1(IRAK-1)活性显著增强,NF-κB转录活性明显上调,细胞actin骨架收缩成团块状,细胞形态改变并形成伪足;而用小剂量BLP(10μg/L)预处理12h后,THP-1细胞对大剂量BLP(100μg/L)及大剂量LPS(100μg/L)孵育6h的耐受性均明显增强,炎症因子(TNF-α、IL-1β及IL-6的释放明显减少,IRAK-1激酶活性被显著抑制,NF-κB转录活性明显降低,细胞伪足形成明显减少且形态明显改善,但仍有肌动蛋白聚集呈"团块"样;此外,actin骨架聚集抑制剂鬼笔环肽可取消由小剂量BLP诱导的耐受及交叉耐受,TNF-α、IL-1β、IL-6释放明显升高,IRAK-1激酶活性明显提高,NF-κB转录活性明显上调。结论:细胞骨架actin参与THP-1细胞BLP耐受及BLP交叉耐受的形成,其机制与actin骨架偶联的IRAK-NF-κB信号通路有关。

关键词：细菌脂蛋白类交叉耐受肌动蛋白细胞骨架 THP-1细胞

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几种不同液体复苏失血性休克大鼠的适宜量研究

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第三军医大学学报 2008年第3期30卷 199-202页

作者：李涛刘良明刁有芳廖自福范小青陈凤第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的对几种不同液体复苏失血性休克大鼠适宜量进行探讨。方法SD大鼠分别做35%、45%放血失血性休克模型,以不同量的乳酸林格液(LR)、羟乙基淀粉(HES)、高渗氯化钠右旋糖酐(HSD)和LR+HES进行复苏,观察其对失血性休克大鼠平均动脉血压(mean... 详细信息

目的对几种不同液体复苏失血性休克大鼠适宜量进行探讨。方法SD大鼠分别做35%、45%放血失血性休克模型,以不同量的乳酸林格液(LR)、羟乙基淀粉(HES)、高渗氯化钠右旋糖酐(HSD)和LR+HES进行复苏,观察其对失血性休克大鼠平均动脉血压(mean arterial blood pressure,MAP)、左心室收缩压(left intraventricular systolic pressure,LVSP)、左心室压力上升或下降的最大速率(the maximal change rate of left intraventricular pressure,±dp/dtmax)的影响,同时观察血气指标变化和存活率的变化。结果在35%失血性休克(中度休克)时,不同剂量的LR、HSD输注对休克大鼠血流动力学的影响无显著差异(P>0.05);30ml/kg HES输液后血流动力学指标明显优于20ml/kg HES(P<0.05);1倍失血量LR+HES输注优于2倍和3倍失血量的LR+HES(P<0.05)。在45%失血性休克(重度休克)时,3倍失血量LR输液后血流动力学指标明显比1倍和2倍失血量的LR效果好(P<0.05);6ml/kg的HSD输注后血流动力学效果比4、8ml/kg的HSD效果好(P<0.05)。同样,30ml/kg HES和2倍失血量的LR+HES输液后改善血流动力学指标,血气指标和存活时间效果优于其他剂量组的HES和LR+HES(P<0.05),除HSD各剂量组明显降低血pH值外,其他各液体对血气指标的影响均不大。结论LR除复苏重度休克以3倍失血量输注效果好外,其余液体以HES30ml/kg,HSD6ml/kg以及2倍失血量的LR+HES复苏失血性休克效果较好,是较理想的失血性休克复苏容量。

关键词：失血性休克羟乙基淀粉高渗氯化钠右旋糖酐

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调控RhoA／Rac平衡对失血性休克大鼠血管双相反应性的影响

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第三军医大学学报 2008年第21期30卷 1976-1979页

作者：李涛徐竞杨光明范小青廖自福陈凤刘良明第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察调控RhoA/Rac平衡在休克后血管反应性双相变化中的作用。方法采用失血性休克模型,分别取RhoA、Rac激动剂或抑制剂,观察其对休克早期或休克晚期大鼠平均动脉血压(mean arterial pressure,MAP)、肠系膜上动脉血管管径对去甲肾上腺... 详细信息

目的观察调控RhoA/Rac平衡在休克后血管反应性双相变化中的作用。方法采用失血性休克模型,分别取RhoA、Rac激动剂或抑制剂,观察其对休克早期或休克晚期大鼠平均动脉血压(mean arterial pressure,MAP)、肠系膜上动脉血管管径对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)收缩反应性的影响。结果失血性休克后整体动物肠系膜上动脉对NE的收缩反应和NE的升压反应呈双相变化,休克早期升高,休克晚期降低。Rac激动剂血小板衍生生长因子(platete-derived growth factor,PDGF)和RhoA特异性抑制剂C3转移酶可降低休克早期肠系膜动脉对NE收缩反应性和NE升压反应性;RhoA激动剂U-46619和Rac特异性抑制剂NSC23766可改善休克晚期肠系膜上动脉对NE的收缩反应和NE的升压效果,也进一步升高休克早期收缩反应性;RhoA激动剂U-46619和Rac激动剂PDGF的作用可以分别被其特异性抑制剂所拮抗。结论用RhoA或Rac激动剂或拮抗剂可调控失血性休克大鼠血管反应性双相变化,提示休克早期RhoA活性升高,Rac活性降低,而休克晚期RhoA活性降低,Rac活性升高,RhoA/Rac活性平衡参与了休克后血管反应性双相变化的调节。

关键词：休克 RhoA Rac 血管反应性

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Cx40、Cx43在失血性休克大鼠血管舒张反应调节中的作用

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第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1227-1230页

作者：明佳张瑗李涛杨光明徐竞刘良明第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究Cx40、Cx43在失血性大鼠肠系膜上动脉内膜依赖的血管舒张反应性调节中的作用及其可能的调节机制。方法以SD大鼠肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)为研究对象,采用体外缺氧模型,以Cx40或Cx43的反义寡脱氧核苷酸(Cx40... 详细信息

目的研究Cx40、Cx43在失血性大鼠肠系膜上动脉内膜依赖的血管舒张反应性调节中的作用及其可能的调节机制。方法以SD大鼠肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)为研究对象,采用体外缺氧模型,以Cx40或Cx43的反义寡脱氧核苷酸(Cx40/43 antisense oligodeoxyribonucleotide,Cx40/43 AODN)阻断SMA的Cx40或Cx43表达,观察Cx40/43 AODN对缺氧处理SMA舒张反应性、MLCP和MLCK活性等的影响。结果Cx40 AODN可以显著增加SMA内膜依赖的舒张反应性(P<0.01);Cx43 AODN可以显著降低SMA内膜依赖的舒张反应性(P<0.01)。Cx40/43 AODN对SMA的MLCK、MLCP活性无明显作用。结论Cx40和Cx43参与了失血性休克后内膜依赖的血管舒张反应性的调节,其机制与血管的MLCK和MLCP活性无明显关系。

关键词：血管低反应性连接蛋白40/43 内膜依赖性舒张反应性

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载光敏剂磁性纳米粉的制备及其光敏活性

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应用化学 2008年第9期25卷 1065-1068页

作者：李东红刁俊林刘建仓创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室第三军医大学(大坪医院)野战外科研究所第二研究室重庆400042

采用乳化和共沉淀法,制备了载四(对-羟基苯基)卟啉光敏剂的磁性纳米粉。通过X射线衍射、透射电子显微镜、红外光谱、振动探针式磁强计(VSM)、紫外可见光谱等测试技术对磁性纳米微粒的大小、形貌、化学成分、磁化率及其光敏剂含量等进行... 详细信息

采用乳化和共沉淀法,制备了载四(对-羟基苯基)卟啉光敏剂的磁性纳米粉。通过X射线衍射、透射电子显微镜、红外光谱、振动探针式磁强计(VSM)、紫外可见光谱等测试技术对磁性纳米微粒的大小、形貌、化学成分、磁化率及其光敏剂含量等进行了测试表征;利用MTT法测定了该磁性纳米光敏剂对人结肠癌Lovo细胞株的体外光动力活性。结果表明,该磁性纳米微粒呈较规则的球形,粒径<50 nm。其Fe3O4磁核被葡聚糖包裹,质量磁化率为68.27 emu/g,光敏剂含量为8.5%。当Lovo细胞培养液中,加入含光敏剂最终浓度为1×10-6mol/L的磁性纳米粉并光照30 min后,对该细胞的体外抑制率达到81.85%。

关键词：四(对-羟基苯基)卟啉载光敏剂磁性纳米粉制备性能体外光动力活性

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精氨酸血管加压素抗失血性休克作用及其与Rho kinase的关系

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第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1223-1226页

作者：方玉强李涛刘良明第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察精氨酸血管加压素(arginine vasopressin,AVP)抗失血性休克作用与Rho kinase的关系。方法采用大鼠失血性休克模型,整体动物观察AVP对失血性休克大鼠去甲肾上腺素(NE)的升压反应和对肠系膜上动脉收缩反应性的影响,同时观察Rho ki... 详细信息

目的观察精氨酸血管加压素(arginine vasopressin,AVP)抗失血性休克作用与Rho kinase的关系。方法采用大鼠失血性休克模型,整体动物观察AVP对失血性休克大鼠去甲肾上腺素(NE)的升压反应和对肠系膜上动脉收缩反应性的影响,同时观察Rho kinase在其中的作用;离体血管环观察AVP对失血性休克大鼠肠系膜上动脉反应性和钙敏感性的影响,并观察Rho kinase在其中的作用。结果失血性休克后大鼠对NE的升压反应性和肠系膜动脉对NE的收缩反应性明显降低,AVP 0.4U/kg可明显增加休克大鼠NE升压反应和肠系膜动脉的收缩反应性,Rho kinase特异性抑制剂Y-27632可明显拮抗由AVP引起的休克大鼠血管反应性的增加。在离体血管环研究表明,休克后血管反应性和钙敏感性明显降低,AVP在浓度为5nmol/L和0.5nmol/L可明显增加休克后血管反应性和钙敏感性,Y-27632可明显拮抗由AVP引起的血管反应性和钙敏感性的增加。结论AVP可通过增加休克血管平滑肌细胞的钙敏感性和血管反应性发挥抗休克作用,通过激活Rho kinase发挥其抗休克作用。

关键词：失血性休克精氨酸血管加压素血管反应性钙敏感性 Rho kinase

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血管扩张刺激磷蛋白调节失血性休克大鼠小肠屏障功能与闭锁连接蛋白1的关系

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第三军医大学学报 2008年第14期30卷 1364-1366页

作者：张晔徐竞刘建仓张连阳第三军医大学大坪医院野战外科研究所:创伤外科全军战创伤中心重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator stimulated phosphoprotein,VASP)调节失血性休克大鼠小肠屏障功能与闭锁连接蛋白1(ZO-1)的关系。方法采用失血性休克大鼠模型,以血浆D-乳酸含量反映肠屏障功能,观察失血性休克后大鼠小肠上皮黏... 详细信息

目的观察血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator stimulated phosphoprotein,VASP)调节失血性休克大鼠小肠屏障功能与闭锁连接蛋白1(ZO-1)的关系。方法采用失血性休克大鼠模型,以血浆D-乳酸含量反映肠屏障功能,观察失血性休克后大鼠小肠上皮黏膜VASP表达和磷酸化的变化、ZO-1的表达变化以及肠屏障功能变化,比较变化趋势,并观察失血性休克加入VASP磷酸化激动剂后对上述分子表达和肠屏障功能的影响。结果①与正常对照组相比,失血性休克后大鼠小肠黏膜VASP蛋白表达明显降低(P<0.01),VASP蛋白磷酸化在正常时表达量低,休克1h时增高,2～4h迅速降低(P<0.01);ZO-1表达随着休克时间的延长显著降低,在休克2h时降低明显(P<0.01);血浆D-乳酸含量在休克1h改变不明显,2～4h显著增高(P<0.01)。②VASP磷酸化激动剂cAMP可明显增强失血性休克2h大鼠小肠上皮VASP蛋白表达和VASP磷酸化、ZO-1的表达,降低失血性休克2h大鼠血浆D-乳酸含量增高幅度(P<0.01)。结论ZO-1可能与VASP对失血性休克大鼠肠屏障功能的调节作用有关。

关键词：闭锁连接蛋白1 血管扩张刺激磷蛋白肠屏障功能

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增生性瘢痕成纤维细胞P物质表达的研究

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第三军医大学学报 2008年第3期30卷 183-185页

作者：朱剑武赖西南王正国王丽丽甯交琳莫立稳第三军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究P物质（substance P，SP）在人增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞的表达情况及其与正常皮肤之间的差异，探讨增生性瘢痕组织SP表达增高的原因。方法以酶消化法体外培养成人增生性瘢痕以及正常皮肤的成纤维细胞，将SP（终浓度为10^... 详细信息

目的研究P物质（substance P，SP）在人增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞的表达情况及其与正常皮肤之间的差异，探讨增生性瘢痕组织SP表达增高的原因。方法以酶消化法体外培养成人增生性瘢痕以及正常皮肤的成纤维细胞，将SP（终浓度为10^-7mol／L）加入培养液中刺激成纤维细胞，分别于刺激前和刺激后1、3、6、12、24h采用RT—PCR检测细胞内SP基因的表达情况，ELISA检测培养液中SP浓度。正常皮肤对照组及瘢痕对照组除不应用SP外，余处理均相同。结果未受SP刺激时，人增生性瘢痕及正常皮肤体外培养的成纤维细胞均能分泌一定浓度的SP，两者之间差异有统计学意义（P〈0．01）。SP刺激后，正常皮肤体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达均在1～3h内达到高峰，随后迅速下降，24h后仍高于其正常水平；而增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达在3～6h内达到高峰，随后缓慢下降，24h后仍高于其正常水平。两种成纤维细胞SP的分泌差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性SP可诱使成纤维细胞内SP的分泌增加，而增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞SP的分泌情况有明显差异。

关键词： P物质增生性瘢痕成纤维细胞

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肾上腺素对巨噬细胞吞噬和分泌功能的影响

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中华实验外科杂志 2008年第5期25卷 650-652页

作者：周建云蒋建新严军杨策刘庆程英王海燕周琳琳顾玮曾灵第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤、烧伤复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察肾上腺素对巨噬细胞吞噬和分泌功能的影响。方法收集大鼠腹腔巨噬细胞，采用不同浓度肾上腺素（E）（2—100μ/L）刺激lh或10μg/L肾上腺素刺激不时间，检测细胞趋化、黏附、吞噬功能和培养上清TNF-α的浓度。结果低浓度肾上腺... 详细信息

目的观察肾上腺素对巨噬细胞吞噬和分泌功能的影响。方法收集大鼠腹腔巨噬细胞，采用不同浓度肾上腺素（E）（2—100μ/L）刺激lh或10μg/L肾上腺素刺激不时间，检测细胞趋化、黏附、吞噬功能和培养上清TNF-α的浓度。结果低浓度肾上腺素处理时，巨噬细胞趋化、黏附、吞噬功能均明显增强，细胞分泌TNF-α明显增多，其中以10μg／L肾上腺素处理时细胞功能增强最明显。但是随着肾上腺素浓度进一步增加，巨噬细胞功能未见进一步增强。时效实验结果显示，不同时间处理（0．5—5．0）h可不同程度地增强巨噬细胞趋化、黏附，吞噬和分泌TNF-α的功能，其中以处理1h作用最明显。结论适度肾上腺素刺激可明显增强臣噬细胞免疫功能。

关键词：肾上腺素巨噬细胞免疫

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脂肪来源干细胞体外成骨诱导和成脂诱导分化

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第三军医大学学报 2008年第13期30卷 1219-1222页

作者：黄宏朱方强孙宏振冯帅南王正国朱佩芳张波第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨脂肪组织来源的多能干细胞(adipose tissue-derived stromal cells,ADSCs)的多向分化潜能。方法取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养ADSCs,经过原代培养和传代培养。分别加入成骨诱导剂和成脂诱... 详细信息

目的探讨脂肪组织来源的多能干细胞(adipose tissue-derived stromal cells,ADSCs)的多向分化潜能。方法取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养ADSCs,经过原代培养和传代培养。分别加入成骨诱导剂和成脂诱导培养。经过倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,并通过Gomori改良钙钴法、von Kossa染色和油红O染色对其成骨细胞和脂肪细胞表型进行鉴定,进一步比较细胞的转化率。结果ADSCs呈成纤维细胞样贴壁生长,其经成骨、成脂诱导培养2周后形态、体积发生明显改变。Gomori改良钙钴法染色显示其细胞质内富含碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)颗粒,诱导后15d和19d,ALP阳性细胞分别为(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%,von Kossa染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节;倒置显微镜,成脂诱导3、7、14d后脂肪细胞转化率分别为(22.3±12.5)%、(49.6±7.1)%和(89.4±9.3)%。油红O染色可见细胞质内出现橙红色脂滴,14d油红O染色阳性率高达(92.5±9.1)%。结论ADSCs经体外诱导培养后可向成骨细胞和脂肪细胞分化,并具有明显的成骨和成脂表型,表明ADSCs具有多向分化潜能。

关键词：干细胞脂肪组织脂肪来源干细胞脂肪细胞成骨细胞细胞分化

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