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缺氧诱导因子-1α对失血性休克大鼠肠系膜上动脉血管环舒张反应性的调控作用

第三军医大学学报 2010年第4期32卷 319-323页

作者：陈垦刘良明第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)对失血性休克大鼠内皮依赖性和内皮非依赖性血管舒张反应性的影响。方法208只SD大鼠随机分为正常对照组、休克组和寡霉素(Oligomycin,HIF-1α特异性拮抗剂)处理组,休克组... 详细信息

目的探讨缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)对失血性休克大鼠内皮依赖性和内皮非依赖性血管舒张反应性的影响。方法208只SD大鼠随机分为正常对照组、休克组和寡霉素(Oligomycin,HIF-1α特异性拮抗剂)处理组,休克组和寡霉素处理组又分为休克即刻、0.5、1、2、3、4h6个时相点;取肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)制成血管环,分别观察休克后和注射寡霉素后对硝普钠(sodium nitroprusside,SNP,内皮非依赖性舒张剂)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach,内皮依赖性舒张剂)诱导的舒张反应性变化。RT-PCR法分析HIF-1αmRNA的表达变化规律。结果各休克组SMA血管环对低浓度SNP(10-9、10-8、10-7mol/L)的舒张反应性降低;寡霉素可进一步降低其最大舒张反应。休克后血管对Ach的舒张反应性呈下降-上升-再下降的趋势,即在休克即刻有一短暂降低,随后呈代偿性增加,休克2h达峰值,2h后呈下降趋势;使用寡霉素后,血管对Ach的舒张反应性在休克早期(休克即刻～休克1h)显著下降(P<0.01),而在休克晚期(休克2～4h)呈上升趋势。与正常组相比,休克后HIF-1αmRNA的表达增加;与休克早期内皮依赖的舒张反应呈正相关(r=0.984,P<0.05),而与休克晚期的呈负相关(r=-0.999,P<0.05),与内皮非依赖的舒张反应性没有相关性。结论内皮依赖性血管舒张反应在休克早期存在代偿性回升,晚期失代偿降低;内皮非依赖性血管舒张反应在休克后呈持续降低。HIF-1α在休克后内皮非依赖性和内皮依赖性舒张反应性的调节中均具有重要作用。

关键词：失血性休克血管缺氧诱导因子-1α 舒张反应

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舱室内爆炸致大鼠脑血流量改变及其意义

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第三军医大学学报 2010年第18期32卷 1962-1966页

作者：许明伟许民辉赖西南王丽丽张子焕崔红第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经外科重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究舱室内爆炸致伤后大鼠脑血流量(cerebral blood flow,CBF)变化及其意义。方法 160只SD大鼠完全随机分为舱内组、舱外组,S-亚硝基谷胱甘肽(S-Nitrosoglutathione,GSNO)治疗组,各48只,采用DDNP纸质点爆源在模拟装甲舱室和舱外开... 详细信息

目的研究舱室内爆炸致伤后大鼠脑血流量(cerebral blood flow,CBF)变化及其意义。方法 160只SD大鼠完全随机分为舱内组、舱外组,S-亚硝基谷胱甘肽(S-Nitrosoglutathione,GSNO)治疗组,各48只,采用DDNP纸质点爆源在模拟装甲舱室和舱外开阔地爆炸建立颅脑爆炸伤模型。GSNO治疗组为舱室内致伤后立即给予GSNO50μg/kg腹腔内注射。另设正常对照组(16只);采用激光多普勒血流仪(LDF)和双抗体夹心法(ELISA)检测伤前、伤后1、6、12、24、48hCBF和血浆神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)浓度,取脑组织测脑水肿指数并行病理学观察。结果舱内组伤后1h CBF较伤前明显降低,达最低值(P<0.01),伤后24h仍低于伤前(P<0.01)。舱外组伤后1h CBF降低达最低值(P<0.01),伤后12h恢复至伤前水平。2组CBF在伤后1、6、12、24h存在显著差异(P<0.01)。舱内组经GSNO治疗后CBF明显升高,在伤后1、6、12、24h存在显著差异(P<0.01)。舱内组血浆NSE浓度及脑水肿指数均在伤后6h达峰值,显著高于对照组(P<0.01),伤后48h仍高于对照组(P<0.05)。舱外组则在伤后12h达峰值,显著高于对照组(P<0.01),伤后48h恢复致伤前水平。舱内组血浆NSE浓度及脑水肿指数均较舱外组升高显著(P<0.05)。舱内组经GSNO治疗后血浆NSE浓度及脑水肿指数明显降低(P<0.01)。病理学观察舱内组可见明显脑水肿改变,表现为血管内皮细胞肿胀,神经元皱缩、变性、坏死、周围间隙明显增宽等改变。舱外组及治疗组均仅见少量神经细胞变性、坏死。结论舱室内爆炸较开阔环境地爆炸大鼠脑血流量下降程度重、持续时间长。脑血流量的下降可能参与了大鼠颅脑爆炸伤后的继发性脑损害。

关键词：创伤与损伤冲击波脑损伤脑血流量脑水肿

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爆炸致舱内大鼠高加速度负载时脑损伤的病理特点

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第三军医大学学报 2010年第19期32卷 2045-2048页

作者：张子焕许民辉赖西南王丽丽许明伟崔红第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经外科重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察爆炸致舱内大鼠高加速度负载时脑损伤的病理特点,探讨其相关机制。方法引爆密闭舱室下方聚能盘内点爆源,模拟装甲车触雷爆炸,制作爆炸致舱内大鼠(坐姿)高加速度负载时脑损伤模型;48只SD雄性大鼠随机分为对照组、400mgTNT爆炸当... 详细信息

目的观察爆炸致舱内大鼠高加速度负载时脑损伤的病理特点,探讨其相关机制。方法引爆密闭舱室下方聚能盘内点爆源,模拟装甲车触雷爆炸,制作爆炸致舱内大鼠(坐姿)高加速度负载时脑损伤模型;48只SD雄性大鼠随机分为对照组、400mgTNT爆炸当量致伤组(400mg组)及800mgTNT爆炸当量致伤组(800mg组),每组16只,其中8只用于测量舱室内座位与大鼠头颅的加速度峰值(PA)及持续作用时间(TD),于伤后6h处死,取脑、脊髓组织行病理检查,对海马CA1区正常锥体细胞记数及组织损伤分级,另8只行Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆功能。结果 400mg组PA座位为(5745±1036)g,TD座位为(6.87±0.58)ms,PA头颅为(701±309)g,TD头颅为(1.00±0.14)ms;800mg组PA座位为(13109±1167)g,TD座位为(11.08±1.43)ms,PA头颅为(3383±935)g,TD头颅为(1.32±0.18)ms,两组数据对应参数之间差异显著(P<0.01)。伤后6h大鼠大体解剖无明显异常,但光镜下大脑、脊髓存在神经元急性损伤改变,800mg组电镜下还见大脑毛细血管、轴索损伤。海马CA1组织学损伤分级:800mg组>400mg组>对照组;神经元密度:800mg组<400mg组<对照组(P<0.01)。与对照组比较,第1～4天800mg组逃避潜伏期延长(P<0.05),学习记忆曲线右移,延后1d趋于稳定,经过平台次数及跨越目标象限时间减少(P<0.05);400mg组介于两者之间。结论爆炸致舱内大鼠高加速度负载时大鼠可出现轻度弥漫性脑损伤,可能产生相应的早期症状或晚期后遗症,可推得装甲车辆触雷爆炸底板未击穿、变形小时乘员存在脑损伤可能。

关键词：密闭舱室加速度脑损伤病理特点

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复合海绵的细胞毒性及生物相容性研究

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中国生化药物杂志 2010年第4期31卷 221-224页

作者：刁俊林刘建仓李东红创伤烧伤复合伤国家重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室重庆400042

目的评价复合海绵的细胞毒性及生物相容性。方法采用MTT实验考察复合海绵浸提液对L929细胞增殖的抑制作用;扫描电镜观察L929细胞在海绵表面的生长情况;利用分光光度法测定其对鼠抗凝血的溶血作用;在鼠肝脏造成活性出血创面,用复合海绵... 详细信息

目的评价复合海绵的细胞毒性及生物相容性。方法采用MTT实验考察复合海绵浸提液对L929细胞增殖的抑制作用;扫描电镜观察L929细胞在海绵表面的生长情况;利用分光光度法测定其对鼠抗凝血的溶血作用;在鼠肝脏造成活性出血创面,用复合海绵或明胶海绵止血后,光镜观察海绵与肝脏组织的相容性。结果复合海绵浸提液对L929细胞增殖无抑制作用,该细胞可在海绵表面正常生长;无溶血作用,组织相容性较好。结论复合海绵无细胞毒性,且具有良好的生物相容性。

关键词：壳聚糖复合海绵细胞毒性血液相容性组织相容性

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汶川地震899例颅脑损伤伤情及救治分析

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重庆医学 2010年第24期39卷 3373-3374,3377页

作者：袁丹凤邱俊周继红张良第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室/创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨汶川地震住院患者颅脑伤伤情特点,为地震所致颅脑伤救治提供参考。方法利用《创伤数据库系统》V3.0软件系统对颅脑伤患者的病历资料进行汇总分析。结果颅脑伤患者899例。致伤原因以钝器伤为主。损伤部位以头皮为主(72.56%)。颅... 详细信息

目的探讨汶川地震住院患者颅脑伤伤情特点,为地震所致颅脑伤救治提供参考。方法利用《创伤数据库系统》V3.0软件系统对颅脑伤患者的病历资料进行汇总分析。结果颅脑伤患者899例。致伤原因以钝器伤为主。损伤部位以头皮为主(72.56%)。颅脑AIS评分1分者624例。合并其他部位损伤711例次,以胫骨骨折为主。手术治疗198例,以头皮清创缝合术最多。结论颅脑伤多以轻度损伤为主,可能是由于大批重症颅脑伤员现场死亡或因救治不及时死亡,应提高地震所致颅脑伤的早期救治水平和加强灾害的早期预防。

关键词：地震颅脑伤伤情

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脑源性神经营养因子基因转染修复大鼠坐骨神经损伤的组织学观察及功能评价

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第三军医大学学报 2010年第22期32卷 2383-2388页

作者：李培建李兵仓北京军区总医院神经外科北京100700 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察重组腺病毒载体AxCA-BDNF转染大鼠损伤坐骨神经后的脊髓前角运动神经元存活、神经生长和功能恢复情况。方法将90只成年Wistar大鼠分成3组,AxCA-BDNF转染组(硅胶管内置AxCA-BDNF原液)、BDNF组(硅胶管内置BDNF溶液)和对照组(硅胶... 详细信息

目的观察重组腺病毒载体AxCA-BDNF转染大鼠损伤坐骨神经后的脊髓前角运动神经元存活、神经生长和功能恢复情况。方法将90只成年Wistar大鼠分成3组,AxCA-BDNF转染组(硅胶管内置AxCA-BDNF原液)、BDNF组(硅胶管内置BDNF溶液)和对照组(硅胶管内置空白病毒稀释液),每组30只,另取5只Wistar大鼠作为正常组。应用组织学图像分析技术对脊髓前角运动神经元和新生神经纤维进行计数,对新生神经髓鞘厚度进行测量分析;应用足印分析和电生理检查技术,从功能角度判定BDNF基因转移的生物效应。结果在3、7、14d及1个月4个时相点,光镜、电镜病理组织学检查和图像分析证实,AxCA-BDNF转染组和BDNF组脊髓前角运动神经元存活的数量、新生神经纤维数目及其髓鞘厚度均明显优于对照组(P<0.01);HRP逆行示踪也证实神经联接的再形成优于对照组(P<0.01);在坐骨神经功能指数测定、神经传导速度和复合肌肉动作电位振幅等神经功能恢复指标上,AxCA-BDNF转染组和BDNF组均优于对照组(P<0.01)。结论应用腺病毒介导的BDNF基因转移,不仅能促进损伤神经纤维再生,也能保护损伤的脊髓神经元,大鼠的神经功能得到了明显改善。

关键词：坐骨神经损伤重组腺病毒脑源性神经营养因子基因转染免疫组织化学坐骨神经功能指数

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人pri-miR-155重组腺病毒的制备及其表达与活性鉴定

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免疫学杂志 2010年第3期26卷 246-250,254页

作者：黄钢王海燕王凯蒋建新白云第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所全军交通伤重点实验室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学基础部医学遗传教研室重庆400042

目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体p... 详细信息

目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒重组并扩增后转染293FT细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增,对其进行安全性、滴度的测定。用此腺病毒感染A549细胞,采用RT-PCR法检测成熟miR-155的表达,双报告基因法检测其干扰活性。结果构建的人pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒经酶切及测序鉴定正确;用此腺病毒感染A549细胞后,RT-PCR检测成熟miR-155表达较无关序列病毒感染对照组显著增强。腺病毒感染A549细胞后,通过转染后双报告基因检测相对萤光素酶活性较对照组降低,显示此腺病毒感染A549细胞后,可有效表达成熟miR-155,并具有生物学活性。结论成功制备人pri-miR-155重组腺病毒,并在感染肺腺癌细胞A549后高效表达成熟有活性miR-155。

关键词： miR-155 重组腺病毒免疫调控

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体外LPS诱导血管内皮细胞通透性改变及其与连接蛋白43的关系

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第三军医大学学报 2010年第24期32卷 2582-2585页

作者：明佳袁侨英周艳苟元彬刘良明第三军医大学西南医院乳腺疾病中心重庆400038 第三军医大学西南医院老年科重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究缝隙连接蛋白(connexin,Cx)43在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)通透性中的表达变化及其意义。方法以1、2、3、4μg/ml LPS刺激原代培养的大鼠VEC,观察作用15、30 min,1、2、3、4、5、6、7 h后VEC增殖活力和通透性的变化;2μg/ml LPS刺激VEC后,采用RT-PCR和Western blot等方法检测Cx43的表达变化;分析VEC通透性和Cx43表达之间的相关性。结果 1、2μg/ml的LPS对VEC增殖活力无明显影响,3、4μg/ml的LPS明显降低了VEC的增殖(P<0.01);2μg/ml的LPS能够较好地模拟脓毒性休克的血管高通透性(P<0.01);用此浓度的LPS刺激VEC后Cx43的mRNA和蛋白表达均逐渐降低(P<0.01);Cx43的表达与LPS引起的VEC通透性改变呈负相关关系(r=-0.877,P<0.01)。结论 Cx43可能参与了脓毒性休克后VEC通透性的调节;Cx43可能具有抑制脓毒性休克后血管内膜通透性的作用。[关键词]脓毒性休克;脂多糖;血管通透性;血管内皮细胞;

关键词：脓毒性休克脂多糖血管通透性血管内皮细胞连接蛋白43

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大鼠坐骨神经缺损后组织工程人工神经对外周靶器官及脊髓神经元的保护作用

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中华创伤杂志 2010年第3期26卷 265-269页

作者：游华矫树生冯帅南陈建梅李兵仓第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 南京军区福州总医院骨科

目的研究嗅球成鞘细胞（olfactory ensheathing cell,OEC）-雪旺细胞（Schwann cell,SC）-细胞外基质成分（extracellular matrix,ECM）-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物[poly（DLlactide-co-glycolide acid）,PLGA]桥接体对大鼠坐骨神经缺损后外周靶器官及脊髓神经元的保护作用.方法建立SD大鼠右侧坐骨神经15 mm缺损模型后,用OEC、SC、ECM以及自行制备的PLGA导管,构成OEC-SC-ECM-PLGA桥接体进行修复,同时设OEC-ECM-PLGA组、SC-ECM-PLGA组、ECM-PLGA组、PLGA组和自体神经移植对照组.在术后1,3,6,9周行腓肠肌湿重恢复率及运动终板检测,并于术后9周行CM-Dil和霍乱毒素B亚单位-辣根过氧化物酶（CB-HRP）逆行示踪检测.结果术后各组动物术侧腓肠肌湿莺和运动终板数量下降,3周后除ECM-PLGA组和PLGA组外,腓肠肌湿重和运动终板数量逐渐增加.9周时OEC-SC-ECM-PLGA组腓肠肌湿重、运动终板数量及运动终板长轴长度与自体神经移植组差异无统计学意义（P＞0.05）.9周时CM-DiI和CB-HRP逆行示踪结果显示,OEC-SC-ECM-PLGA组标记的脊髓前角运动神经元数量与自体神经移植组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 OEC-SC-ECM-PLGA桥接体对大鼠坐骨神经缺损后的外周靶器官及脊髓神经元具有一定的保护作用.

关键词：创伤和损伤周围神经组织工程

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大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件的优化及生物学特性

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第三军医大学学报 2010年第20期32卷 2163-2167页

作者：赵玉金李瑶琛赖洁娟王海燕黄苏娜蒋建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学西南医院全军眼科中心重庆400038 第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的建立一种新的高效体外骨髓间充质干细胞纯化培养方法,并对所获得细胞进行生物学行为研究。方法采用全骨髓培养获得原代骨髓间充质干细胞,经体外成脂、成骨诱导分化并检测细胞表面分子表达对所获得干细胞进行鉴定,传代后低密度接种(3... 详细信息

目的建立一种新的高效体外骨髓间充质干细胞纯化培养方法,并对所获得细胞进行生物学行为研究。方法采用全骨髓培养获得原代骨髓间充质干细胞,经体外成脂、成骨诱导分化并检测细胞表面分子表达对所获得干细胞进行鉴定,传代后低密度接种(3×103/cm2)结合机械擦除对所培养细胞进行纯化,并对未纯化及纯化细胞分别进行集落形成单位实验、生长曲线及细胞周期分析来研究其生物学特性。结果全骨髓贴壁法可以成功培养出骨髓间充质干细胞,细胞呈现干细胞特性生长;可在体外成功地进行成脂、成骨分化;阴性表面标记分子CD34、CD45表达率均小于2%,阳性表面标记CD73、CD90表达率均高于95%。经纯化后的细胞具有更优的生物学行为,表现在:克隆形成率达到(28.80±5.00)%(P<0.01);培养12d后细胞数量增加(26.18±4.80)倍(P<0.05);处于S+G2/M期的细胞比例达到(45.98±1.60)%(P<0.01)。结论低密度接种结合机械擦除方法可以获得高纯度骨髓间充质干细胞,且该细胞具有更佳的生物学特性。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞生物学行为细胞培养条件优化

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