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第三军医大学学报 2006年第3期28卷 201-204页

作者：吴丽娟蒋建新朱佩芳康格非第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所全军交通医学实验室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 重庆医科大学检验系重庆40016

目的利用酵母表达技术制备重组人A20蛋白(rhA20),为进一步研究其在脓毒血症中的治疗作用奠定基础。方法利用基因工程技术构建rhA20毕赤酵母表达载体yevCFP-hA20,电转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,筛选高拷贝阳性菌株,甲醇诱导表达rhA20。... 详细信息

目的利用酵母表达技术制备重组人A20蛋白(rhA20),为进一步研究其在脓毒血症中的治疗作用奠定基础。方法利用基因工程技术构建rhA20毕赤酵母表达载体yevCFP-hA20,电转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,筛选高拷贝阳性菌株,甲醇诱导表达rhA20。产物用SDS-PAGE和W estern B lot鉴定。同时对诱导表达培养基的pH值和配方,以及培养环境温度等条件进行了优化研究。结果表达产物分子量约93×103,表达条件的优化研究提示:降低诱导培养基pH值、添加低剂量EDTA、蛋白酶水解物和降低培养温度,可以使全长表达产物提高11倍,占总蛋白的18.24%,达到(254.10±24.52)μg/m l水平。结论我们成功在巴斯德毕赤酵母GS115中表达了rhA20,通过对诱导培养基成分及诱导温度的优化,使全长rhA20表达得到明显提高,探索了人A20的生物合成途径,也为巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白遭遇降解时的处理提供了新的方法。

关键词： A20 基因表达巴斯德毕赤酵母基因工程

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穿膜肽-人A20融合蛋白对单核细胞内毒素应答的影响

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中华创伤杂志 2006年第1期22卷 45-48页

作者：吴丽娟刘素秀蒋建新朱佩芳康格非第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所检验科重庆400042 第三军医大学全军交通医学研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室重庆400042 重庆医科大学医学检验系

目的探讨穿膜肽-人A20融合蛋白(CPP-hA20)对单核细胞内毒素(LPS)应答的影响,明确其对实验性细胞炎症反应的调节能力。方法利用激光共聚焦技术观察CPP-hA20定位,用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测细胞内hA20水平的改变证实CPP-hA20的跨膜... 详细信息

目的探讨穿膜肽-人A20融合蛋白(CPP-hA20)对单核细胞内毒素(LPS)应答的影响,明确其对实验性细胞炎症反应的调节能力。方法利用激光共聚焦技术观察CPP-hA20定位,用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测细胞内hA20水平的改变证实CPP-hA20的跨膜活性;以核因子(NF)-κB活性、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1水平为指标,观察CPP-hA20对单核细胞LPS应答的影响。结果CPP-hA20在40min内即可进入单核细胞内;实验组细胞NF-κB活性、TNF-α和IL-1水平较对照组在不同程度上都有所降低,且呈现剂量依赖性特点。结论CPP-hA20具有主动跨越单核细胞膜进入到细胞内的能力,能够明显抑制LPS对单核细胞NF-κB的激活,降低细胞TNF-α和IL-1的分泌水平,对单核细胞LPS炎症应答具有负向调节作用。

关键词：蛋白质转运 A20 融合蛋白内毒素炎症反应单核细胞

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锌指蛋白A20基因沉默载体研究与初步应用

锌指蛋白A20基因沉默载体研究与初步应用

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第五次全国中青年检验医学学术会议

作者：吴丽娟陈伟康格非蒋建新朱佩芳第三军医大学大坪医院检验科第三军医大学大坪医院检验科重庆医科大学医学检验系第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

锌指蛋白A20(zinc finger protein A20,简称A20)是细胞凋亡研究中发现的一种肿瘤坏死因子α(TNFα)应答基因的编码产物,具有抑制细胞凋亡和下调NF-κB活性的双重功效闭。我们在相关研究中发现在LPS所致内毒素血症小鼠动物模型中,A20在... 详细信息

锌指蛋白A20(zinc finger protein A20,简称A20)是细胞凋亡研究中发现的一种肿瘤坏死因子α(TNFα)应答基因的编码产物,具有抑制细胞凋亡和下调NF-κB活性的双重功效闭。我们在相关研究中发现在LPS所致内毒素血症小鼠动物模型中,A20在外周血白细胞、肝、肺等组织中均存在高水平表达,且伴随动物体

关键词：基因沉默 A20 siRNA 初步应用锌指蛋白

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细菌脂多糖、脂蛋白和DNA对小鼠肺泡巨噬细胞体外激活的协同作用

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中华医学杂志 2005年第21期85卷 1468-1472页

作者：黄宏蒋建新朱佩芳王正国张道杰杨程 400042 重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的通过体外实验,从受体水平观察细菌脂多糖(LPS)、细菌脂蛋白(BLP)和细菌DNA对肺泡巨噬细胞的协同刺激效应及其可能机制.方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,随机将细胞分为7组,分别为LPS组、CpG-ODN组、BLP组、LPS + CpG-ODN 组、LPS + BL... 详细信息

目的通过体外实验,从受体水平观察细菌脂多糖(LPS)、细菌脂蛋白(BLP)和细菌DNA对肺泡巨噬细胞的协同刺激效应及其可能机制.方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,随机将细胞分为7组,分别为LPS组、CpG-ODN组、BLP组、LPS + CpG-ODN 组、LPS + BLP组、LPS +CpG-ODN + BLP组和培养基对照组.刺激6 h后,收集上清和细胞,上清用于TNF-α检测,细胞用于提取总RNA,通过RT-PCR检测主要模式识别受体(PRRs)CD14、SR、TLR2、TLR4、TLR9的表达.结果 LPS、BLP和CpG-ODN不仅体外能协同增加肺泡巨噬细胞释放TNF-α等细胞因子,而且具有协同增强效应细胞表面模式识别受体的表达,以三者同时存在时,协同作用最强.结论细菌内毒素、细菌脂蛋白和细菌DNA在体外不仅能上调相互的模式识别受体,而且具有协同增强其他细菌结构成分对相应受体的刺激作用.

关键词：脓毒症脂多糖类模式识别肿瘤坏死因子

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肿瘤坏死因子α、干扰素γ刺激对肺泡巨噬细胞表面主要模式识别受体表达的影响

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中华外科杂志 2005年第11期43卷 740-744页

作者：黄宏蒋建新朱佩芳王正国张道杰杨程 400042 重庆第三军医大学第三附属医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的观察脓毒症主要相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)对巨噬细胞表面主要模式识别受体(PRRs)表达的影响.方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,用TNFα、IFNγ(终浓度均为20 ng/ml )分别刺激细胞3 h、6 h、12 h,通过逆转录... 详细信息

目的观察脓毒症主要相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)对巨噬细胞表面主要模式识别受体(PRRs)表达的影响.方法分离培养小鼠肺泡巨噬细胞,用TNFα、IFNγ(终浓度均为20 ng/ml )分别刺激细胞3 h、6 h、12 h,通过逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学检测细胞内PRRs,包括白细胞分化抗原14(CD14)、Toll样受体4(TLR4)、清道夫受体(SR)、细菌脂蛋白受体TLR2和细菌DNA受体TLR9 mRNA表达及其蛋白表达.结果 TNFα和IFNγ表现为不同程度地上调与炎细胞激活作用有关的PRRs(CD14、TLR2、TLR9)(P<0.05),下调与炎细胞防御作用有关的SR(P<0.05),而对TLR4基因及蛋白表达无显著刺激作用(P>0.05).结论效应细胞释放的促炎因子TNFα、IFNγ能从基因转录和蛋白水平上对细胞表面PRRs产生明显的反馈调控作用,对于促进失控性炎症反应的发生具有一定病理生理意义.

关键词：脓毒症巨噬细胞,肺泡肿瘤坏死因子α 干扰素Ⅱ型模式识别受体

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细菌脂多糖、脂蛋白和DNA体内协同致病作用观察

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中华创伤杂志 2005年第9期21卷 668-671页

作者：黄宏蒋建新朱佩芳王正国张道杰杨程 400042 重庆第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所全军交通医学研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室

目的观察细菌脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS)、脂蛋白(bacterial lipoprotein, BLP)及其DNA[鸟嘌呤二核苷酸(CpG)寡核苷酸(oligonucleoetide), CpG-ODN]的体内协同致病作用. 方法 147只小鼠随机分为等渗盐水对照组、单纯LPS组、单纯CpG-ODN组、单纯BLP组、LPS+BLP组、LPS+ CpG-ODN组和LPS+BLP+CpG-ODN组,尾静脉注射给药,观察小鼠死亡率及血清肿瘤坏死因子(TNF)-α水平. 结果注射后12,24,48 h,二联组的死亡率显著高于单独给药组(P <0.05或P< 0.01);三联给药组各时相点死亡率显著高于二联组(P<0.05).单独给药后6 h,TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.05),12,24 h与对照组比较,差异无统计学意义.二联组与单因素组和对照组比较,6,12 h血TNF-α均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).三者联合刺激时,6,12 h血TNF-α与二联组比较,差异有统计学意义(P<0.05),至24 h仍显著高于对照组(P<0.05). 结论细菌LPS、细菌脂蛋白和细菌DNA不仅自身存在一定的致病能力,而且三者间具有明显的协同效应,特别是三者联合给药时作用最强.

关键词：脂多糖细菌脂蛋白细菌DNA 肿瘤坏死因子

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汽车正向碰撞所致交通伤的实验研究

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中华创伤杂志 2005年第5期21卷 378-380页

作者：郭晓丽朱佩芳王正国尹志勇谭浩陈海斌蒋建新第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所全军交通医学研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室重庆400042

目的应用实车碰撞模拟轿车驾驶员无防护状态下的交通伤,探讨轿车正向高速碰撞交通伤的发生情况和伤情特点。方法杂种大白猪8只随机分为4组,分别将猪以坐姿固定于驾驶员座椅上,以49,64,72.80km/h的行驶速度正向与壁障相撞,观察伤后猪存... 详细信息

目的应用实车碰撞模拟轿车驾驶员无防护状态下的交通伤,探讨轿车正向高速碰撞交通伤的发生情况和伤情特点。方法杂种大白猪8只随机分为4组,分别将猪以坐姿固定于驾驶员座椅上,以49,64,72.80km/h的行驶速度正向与壁障相撞,观察伤后猪存活情况、器官组织形态学改变以及伤情特点。结果伤后猪5min内死亡2只,11,15min各死亡1只,4只存活4h以上。损伤类型主要为撞击伤和挤压伤,形态学改变主要表现为躯体部分挤压毁损、体腔破裂、肢体离断骨折,心、肺、肝、脾、胃肠等器官均有不同程度损伤、破裂和出血,伤后肺含水量明显增多。实验猪均存在多发伤和胸腹联合伤。结论车辆正向碰撞极其危险,多发伤发生率高,伤情复杂、严重,多合并有重要脏器损伤。

关键词：交通伤碰撞实验研究形态学改变汽车伤情特点胸腹联合伤发生情况存活情况器官组织损伤类型主要表现肢体离断不同程度脏器损伤驾驶员多发伤挤压伤撞击伤含水量发生率轿车破裂

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汽车碰撞防护栏致交通伤的动物实验模型

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中国临床康复 2005年第30期9卷 120-121,i0004页

作者：郭晓丽朱佩芳王正国尹志勇谭浩陈海斌解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市400042

目的:应用实车进行碰撞实验,探讨轿车与防护栏相碰撞交通伤发生情况和伤情特点。方法:实验于2004-07/12在解放军交通医学研究所进行。选择重庆本地中国家养普通白猪10只,分为驾驶员组和前排乘员组,每组5只。以坐姿分别固定于驾驶员座椅... 详细信息

目的:应用实车进行碰撞实验,探讨轿车与防护栏相碰撞交通伤发生情况和伤情特点。方法:实验于2004-07/12在解放军交通医学研究所进行。选择重庆本地中国家养普通白猪10只,分为驾驶员组和前排乘员组,每组5只。以坐姿分别固定于驾驶员座椅上和前排乘员座椅上,以49km/h的行驶速度和45°角与右侧防护栏相撞。观察事故现场0h至伤后24h两组猪存活情况,损伤组织形态学改变[(包括损伤部位、损伤定级评分(AIS)、肺含水率、肺体指数及损伤严重程度评分(ISS)]。参照器官损伤定级(OIS)和简明损伤定级标准(AIS-98,0分为正常,分值越高表示损伤越严重),损伤程度评分(ISS)为身体3个最严重损伤区AIS评分的平方和。结果:纳入家猪10只均进入结果分析。①两组猪存活及损伤情况:驾驶员组家猪全部存活24h,前排乘员组家猪伤后4h全部死亡、其中死于事故现场3只。家猪伤后体表损伤较轻,内脏器官损伤严重,平均损伤定级标准(AIS)评分为3.41±0.97,最高分驾驶员组低于前排乘员组(2.80±0.84,4.00±0.70);肺含水率和肺体指数驾驶员组均低于前排乘员组[(75.95±5.26)%比(84.70±6.34)%;(0.81±0.10)比(1.19±0.11)];损伤严重度评分(ISS)驾驶员组亦低于前排乘员组(22.40±3.65,33.80±5.89);器官损伤定级在较重至危重范围。损伤伤类主要为撞击和挤压所致钝挫撕裂伤。②两组猪损伤组织形态学改变结果:主要表现为肢体骨折,心、肺、肝、脾、胃肠等器官不同程度的损伤破裂和出血,伤后肺水含量明显增加。组织切片光镜观察可见细胞变性、坏死,肺泡毛细血管损伤、肺间质及肺泡内有血液渗出及间质性肺水肿。结论:车辆侧向碰撞防护栏非常危险,交通伤发生率高,伤型伤类复杂,前排乘员侧动物伤情重于驾驶员侧动物,多并发重要脏器损伤。

关键词：机动车辆事故,交通疾病特征猪

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巴斯德毕赤酵母基因组外源基因整合的高通量定量分析

巴斯德毕赤酵母基因组外源基因整合的高通量定量分析

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第十届全军检验医学学术会议

作者：吴丽娟蒋建新朱佩芳康格非第三军医大学大坪医院检验科第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆医科大学医学检验系

目的巴斯德毕赤酵母是当今生物合成功能性哺乳动物蛋白质及多肽的首选表达体系,挑选整合数恰当的外源基因阳性整合子是实现外源基因稳定高效表达的关键环节之一。本文旨在探索一种巴斯德毕赤酵母表达体系外源基因整合的高通量定量分析... 详细信息

目的巴斯德毕赤酵母是当今生物合成功能性哺乳动物蛋白质及多肽的首选表达体系,挑选整合数恰当的外源基因阳性整合子是实现外源基因稳定高效表达的关键环节之一。本文旨在探索一种巴斯德毕赤酵母表达体系外源基因整合的高通量定量分析方法。方法采用基因工程技术构建pPIC9K-HG质粒作为定量标准品,建立毕赤酵母基因组外源基因整合的高通量定量PCR分析方法,用灵敏度、特异性等对方法进行评价,将之初步用于hA20基因毕赤酵母转化子外源基因整合数的分析。同时对三种酵母基因组制备方法进行了比较。结果方法灵敏度达103拷贝,线性范围在104-109,平均变异系数6.62%,特异性100%。14株hA20基因毕赤酵母转化子外源基因整合数分析显示,成功收获外源基因整合数为单拷贝、3拷贝、4拷贝、5拷贝、15拷贝的阳性转化子。酵母基因组制各经典法、煮沸法和酶法阳性率分别为85.71%、28.57%和85.71%。经X2检验证实,酶法与经典法相比提取酵母基因组的效率一致(P>0.05);煮沸法与经典法相比提取酵母基因组的效率存在显著性差异(P<0.05)。结论成功建立了巴斯德毕赤酵母基因组外源基因整合高通量定量分析方法,方法学评价指标满意,可广泛用于不同外源基因整合之阳性菌株的大批量分析。酶法制备酵母基因组具有可靠、简单、迅速等优点,适合大规模提取酵母基因组。

关键词：基因表达异种基因多聚酶链反应基因整合

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我国2002～2003年的道路交通事故

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中华创伤杂志 2004年第11期20卷 641-644页

作者：王正国尹志勇肖凯第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤烧伤和复合伤国家重点实验室第四研究室解放军交通医学研究所重庆400042

我国近年来国民生产总值(GNP)的增长率持续保持在7%以上,机动车拥有量高速增长,道路交通事故亦呈不断上升的势头.值得注意的是,继2002年增长后,2003年的道路交通事故数及死伤人数呈全面下降趋势,这是10年来出现的首次下降.现以公安部发... 详细信息

我国近年来国民生产总值(GNP)的增长率持续保持在7%以上,机动车拥有量高速增长,道路交通事故亦呈不断上升的势头.值得注意的是,继2002年增长后,2003年的道路交通事故数及死伤人数呈全面下降趋势,这是10年来出现的首次下降.现以公安部发布的2002年和2003年全国道路交通事故情况[1,2]为基础,对这两年的道路交通事故情况进行重点回顾和分析讨论。

关键词：道路交通事故国道机动车拥有量下降趋势基础发布首次上升分析

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