检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医院感染学杂志 2006年第4期16卷 478-480,405页

作者：胡晓梅胡福泉第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

细菌的生物学特性往往是群体行为的结果。细菌能够感知它们所处的环境，并通过对自身细胞密度的感应来进行相互间联系，对信息进行加工处理进而做出适当的反应，这种被称为群体感应（quorum—sensing）或细胞间信号（cell—to—cell sig... 详细信息

细菌的生物学特性往往是群体行为的结果。细菌能够感知它们所处的环境，并通过对自身细胞密度的感应来进行相互间联系，对信息进行加工处理进而做出适当的反应，这种被称为群体感应（quorum—sensing）或细胞间信号（cell—to—cell signaling）的生命现象普遍存在于多种革兰阴性菌和革兰阳性菌中。尽管这种现象早在1970年就已在海生费氏弧菌中被发现，但是直到最近10年，它才成为对致病菌深入研究中的焦点，并且成为研究进展最快的微生物学领域之一。

关键词：细胞间信号铜绿假单胞菌感染

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难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序

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第三军医大学学报 2006年第6期28卷 539-542页

作者：李明申晓冬丛延广谭银玲饶贤才胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛... 详细信息

目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp。结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列。

关键词：大片段克隆噬菌体基因组测序 PaP1

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末端酶介导的双链DNA病毒核酸组装

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生命的化学 2006年第5期26卷 429-431页

作者：陈志瑾申晓冬张克斌饶贤才重庆市第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆4000038

病毒是一类非细胞结构的微生物,专性宿主细胞内寄生,以复制方式进行增殖。在病毒复制的过程中,组装是其特有的过程。不同类型病毒之组装的机制有很大差异,目前对双链DNA(dsDNA)病毒的组装机制研究较多,包括位点特异性组装和满头组装两... 详细信息

病毒是一类非细胞结构的微生物,专性宿主细胞内寄生,以复制方式进行增殖。在病毒复制的过程中,组装是其特有的过程。不同类型病毒之组装的机制有很大差异,目前对双链DNA(dsDNA)病毒的组装机制研究较多,包括位点特异性组装和满头组装两种方式,采用何种方式进行组装与其基因组编码的末端酶有关。该文介绍末端酶介导的dsDNA病毒组装的有关进展。

关键词：末端酶双链DNA病毒组装

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转录因子Blimp-1的原核表达、纯化及抗体制备

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第三军医大学学报 2006年第3期28卷 205-207页

作者：邓少丽胡福泉蹇锐饶贤才蒋静程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫... 详细信息

目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备B limp-1多抗。采用ELISA方法检测其效价,W estern检验抗体特异性及在骨髓瘤细胞株中的表达。结果构建了表达B limp-1前350个氨基酸的原核表达质粒PQE-B limp-1,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,得到分子量约46×103的融合蛋白,免疫家兔后得到多抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20 000。W esternb lot结果显示此多克隆抗体与B limp-1蛋白特异性结合,并在骨髓瘤细胞中表达。结论本研究获得B limp-1纯化蛋白,制备了B limp-1多克隆抗体,为进一步研究B limp-1的作用机制及与血液疾病间的关系奠定了基础。

关键词： Blimp-1 原核表达抗体制备

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IFN-β基因启动子调控区域的分析及IRF-3报告基因的构建

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 896-899页

作者：蒋静胡福泉蹇锐张伟邓少丽程小星第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞... 详细信息

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞系后观察细胞对LPS刺激的反应。结果IFN-β启动子PRD调控区域上游序列、PRD I区,PRD II区和PRD IV区缺失后,LPS同样能诱导EGFP报告基因的表达。只保留PRD区及IFN-β启动子核心区的载体转染Raw264.7细胞后,可以在LPS刺激下诱导EGFP报告基因的高表达。结论构建了能检测IRF-3活性的报告基因载体,为进一步研究LPS激活IRF-3的信号转导通路奠定了基础。

关键词： IRF-3 IFN-β 启动子调控元件报告基因

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光化学作用增强阳离子聚合物介导EGFP转染结肠癌

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 922-925页

作者：肖卫东陈炜陈祖林刘嘉葛海燕第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用... 详细信息

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用,同时以阳离子聚合物PEI为DNA载体,EGFP质粒为目的DNA,通过流式细胞技术对比观察光化学作用对阳离子聚合物介导EGFP质粒转染结肠癌细胞的影响。结果TPPS2 a在2种结肠癌细胞系呈颗粒状分布于细胞质;基于TPPS2 a的光动力效应对结肠癌细胞的生长抑制作用随光照剂量增大而逐渐加大,SW 480细胞取得IC50的光照时间为约6 m in,而HT29取得IC50的光照时间为约12 m in;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可将阳性细胞率分别提高至(29.61±1.15)(SW 480细胞)和(23.47±0.62)(HT29细胞)(P<0.05)。结论TPPS2 a的胞内分布与内吞密切相关;基于TPPS2 a的光化学细胞毒性作用呈剂量依赖性;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可明显提高阳离子聚合物介导转染目的DNA的阳性细胞率。

关键词：光敏剂光动力疗法阳离子聚合物转染

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慢病毒携带shRNA对宫颈癌细胞中HPV16型E6表达的抑制作用

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第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1218-1220页

作者：郭建新李力白垚程小星邓少丽郑秀惠第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆400042 重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的研究慢病毒携带的短发夹状干扰RNA(short hairp in RNA,shRNA)对宫颈癌Cask i细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap illom a virus,HPV)16型E6表达的抑制作用。方法将靶向HPV16型E6的shRNA表达序列克隆到改建的慢病毒表达载体PLL3.7中,经... 详细信息

目的研究慢病毒携带的短发夹状干扰RNA(short hairp in RNA,shRNA)对宫颈癌Cask i细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap illom a virus,HPV)16型E6表达的抑制作用。方法将靶向HPV16型E6的shRNA表达序列克隆到改建的慢病毒表达载体PLL3.7中,经限制性酶切鉴定和测序后,与3种包装质粒混合,以L ipofectam ine 2000包裹后转染293FT细胞,72 h后收取含病毒的上清液并感染宫颈癌Cask i细胞,感染48 h后加入G418筛选阳性克隆。每天对阳性细胞克隆进行细胞计数;提取细胞总mRNA,进行RT-PCR反应。结果与对照组相比HPV16型E6的表达降低70%,宫颈癌Cask i细胞生长速度减慢50%。结论慢病毒携带的短发夹状干扰RNA能干扰宫颈癌细胞中HPV16型E6的表达并有抑制癌细胞生长的作用。

关键词：宫颈癌慢病毒 RNA干扰人乳头瘤病毒

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铜绿假单胞菌外毒素A的表达、纯化与生物学活性研究

铜绿假单胞菌外毒素A的表达、纯化与生物学活性研究

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2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

外毒素A(pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PE)是铜绿假单胞菌最主要的致病物质。自二十世纪七十年代以来,人们建立了多种纯化PE的方法,这些传统生产毒素的方法, 产量很低、纯度不够,不能很好地满足研究工作的需要。大量制备邢的工作... 详细信息

外毒素A(pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PE)是铜绿假单胞菌最主要的致病物质。自二十世纪七十年代以来,人们建立了多种纯化PE的方法,这些传统生产毒素的方法, 产量很低、纯度不够,不能很好地满足研究工作的需要。大量制备邢的工作有赖于高效表达性工程菌株的建立。

关键词：生物学活性假单胞菌外毒素铜绿假单胞菌

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基因串联体的构建策略及其表达模式

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医学研究生学报 2006年第6期19卷 557-560页

作者：饶贤才胡福泉第三军医大学微生物学教研室/重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

为了获取足够的DNA片段或得到基因的表达产物,常需要构建基因串联体,将目的基因按头尾相连随机串联起来,克隆入克隆载体以制备需要的目的基因片段或克隆入表达载体进行高效表达。串联的策略包括定向串联法、PCR扩增串联法、化学拼接法... 详细信息

为了获取足够的DNA片段或得到基因的表达产物,常需要构建基因串联体,将目的基因按头尾相连随机串联起来,克隆入克隆载体以制备需要的目的基因片段或克隆入表达载体进行高效表达。串联的策略包括定向串联法、PCR扩增串联法、化学拼接法、同尾酶法等,不同方法构建的串联体基因表达模式也有一定差异。

关键词：串联体构建表达

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP1多糖水解酶的克隆表达及活性分析

铜绿假单胞菌噬菌体PaP1多糖水解酶的克隆表达及活性分析

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2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会

作者：孙卫忠胡晓梅贾鸣胡福泉第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室

细菌生物膜通过粘附、定植、抗吞噬、和对环境的高耐受性而突现其在医学中的重要意义,且被膜菌对常用抗生素都不敏感。故寻找控制细菌生物膜的有效措施,已成为当务之急。研究表明,噬菌体能产生多糖水解酶降解细菌胞外多糖,从而有可能成... 详细信息

细菌生物膜通过粘附、定植、抗吞噬、和对环境的高耐受性而突现其在医学中的重要意义,且被膜菌对常用抗生素都不敏感。故寻找控制细菌生物膜的有效措施,已成为当务之急。研究表明,噬菌体能产生多糖水解酶降解细菌胞外多糖,从而有可能成为破坏细菌生物膜的“酶学消毒剂”。在本室新分离的铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组中,有一个基

关键词：多糖水解酶铜绿假单胞菌噬菌体活性分析

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