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癌症 2004年第7期23卷 788-793页

作者：王卫东陈正堂李德志段玉忠王志新曹正怀第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心重庆400037

背景与目的放射-基因治疗是近年来国际上肿瘤治疗的新策略,由于实体瘤常处于缺氧状态而对放射敏感性低,放射-基因治疗尚未达理想疗效。本研究拟构建缺氧/辐射双敏感性启动子,增强缺氧条件下放射诱导的HSV-TK表达水平,提高肺癌放射-基因... 详细信息

背景与目的放射-基因治疗是近年来国际上肿瘤治疗的新策略,由于实体瘤常处于缺氧状态而对放射敏感性低,放射-基因治疗尚未达理想疗效。本研究拟构建缺氧/辐射双敏感性启动子,增强缺氧条件下放射诱导的HSV-TK表达水平,提高肺癌放射-基因治疗效果。方法利用基因重组构建HRE-Egr启动子及其调控的HSV-TK表达载体;脂质体介导重组质粒转染肺癌A549细胞,分为对照组、放射组(6Gy)、缺氧组(1%氧浓度)和放射合并缺氧组,Northernblot法检测转染细胞中HSV-TK表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测放射、缺氧和GCV处理后的细胞存活率。建立BALB/c裸鼠肺癌移植瘤模型,检测放射合并质粒转染后移植瘤体积变化并计算抑瘤率。结果对照组细胞仅可检测到HyTK的低水平表达(21U),放射组和缺氧组HyTK基因表达水平均显著升高(分别为227U和94U),放射合并缺氧组(769U)显著高于放射组。在缺氧条件下,放射合并GCV处理后细胞存活率为(7.2±1.8)%,显著低于常氧组的(32.7±4.6)%。放射联合GCV可明显抑制HRE-Egr启动子转染肺癌移植瘤,抑瘤率达91.2%。结论HRE-Egr启动子具有辐射/缺氧双重敏感性,并使放射后的HSV-TK表达水平在缺氧下得到显著增强。放射联合HRE-Egr启动子可显著抑制肺癌移植瘤的生长。

关键词：肺肿瘤放射-基因治疗缺氧反应元件

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大规模平行测序技术(MPSS)研究进展

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生物化学与生物物理进展 2004年第8期31卷 761-765页

作者：陈杰第三军医大学新桥医院肿瘤科重庆400037

大规模平行测序技术 (massivelyparallelsignaturesequencing ,MPSS)是以DNA测序为基础的大规模高通量基因分析新技术 ,通过标签库的建立、微珠与标签的连接、酶切连接反应和生物信息分析等步骤 ,获得基因表达序列 .MPSS具有能测定表达... 详细信息

大规模平行测序技术 (massivelyparallelsignaturesequencing ,MPSS)是以DNA测序为基础的大规模高通量基因分析新技术 ,通过标签库的建立、微珠与标签的连接、酶切连接反应和生物信息分析等步骤 ,获得基因表达序列 .MPSS具有能测定表达水平较低、差异较小的基因 ,不必预先知道基因的序列 ,自动化和高通量等特点。

关键词：大规模平行测序技术 MPSS 基因克隆生物信息分析酶切连接反应

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基因电路研究现状及面临的问题

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生物医学工程学杂志 2007年第2期24卷 460-462页

作者：王卫东陈正堂第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆400037

将不同基因按一定规则连接在一起即构成基因电路(Genetic circuits),上游基因的蛋白产物调控下游基因的表达活性,环环相扣,从而完成特定的生物学功能。通过构建基因逻辑电路并导入细胞,可以扩展和修饰细胞行为。迄今已构建了自抑制子(Au... 详细信息

将不同基因按一定规则连接在一起即构成基因电路(Genetic circuits),上游基因的蛋白产物调控下游基因的表达活性,环环相扣,从而完成特定的生物学功能。通过构建基因逻辑电路并导入细胞,可以扩展和修饰细胞行为。迄今已构建了自抑制子(Autorepressor)、套环开关(Toggle-switch)、振动子(Oscillator)等原型基因电路。目前主要采用推理法和定向进化法设计和验证基因电路。类似目前的计算机编程,将来我们可随意设计细胞行为。

关键词：基因电路自抑制子套环开关振动子

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缺氧及辐射双敏感性启动子增强抑瘤素M表达治疗肺癌的实验研究

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中华结核和呼吸杂志 2004年第4期27卷 240-243页

作者：王卫东陈正堂李德志段玉忠王志新曹正怀第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆400037

目的　构建缺氧及辐射双敏感性启动子 ,增强缺氧条件下放射诱导的抑瘤素M (OSM)表达水平 ,提高肺癌放射基因治疗效果。方法　利用基因重组构建缺氧及辐射双敏感性缺氧反应元件早期生长反应基因 (HRE Egr)启动子及其调控的OSM表达载体 ... 详细信息

目的　构建缺氧及辐射双敏感性启动子 ,增强缺氧条件下放射诱导的抑瘤素M (OSM)表达水平 ,提高肺癌放射基因治疗效果。方法　利用基因重组构建缺氧及辐射双敏感性缺氧反应元件早期生长反应基因 (HRE Egr)启动子及其调控的OSM表达载体 ;以脂质体转染肺癌A5 4 9细胞 ,给予照射 ( 6Gy)和 (或 )缺氧 ( 1%氧浓度 )处理 ,观察其OSM表达水平及细胞存活率的变化。利用肺癌移植瘤观察不同处理后的抑瘤效应。结果　HRE Egr启动子具有辐射及缺氧双重敏感性 ,它可使照射后的肺癌细胞OSM表达水平在缺氧条件下显著提高 ,为常氧条件下的 3倍。在缺氧条件下 ,重组质粒 pHEO转染合并照射处理后细胞存活率 [( 9 5± 2 8) % ]显著低于常氧组 [( 34 8± 3 6 ) % ;χ2 =11 375 ,P =0 0 0 3]。HRE Egr启动子转染合并照射可明显抑制肺癌移植瘤 ,并可使 6 0 %的移植瘤完全消退。结论　用HRE Egr启动子提高OSM表达水平 ,可增强肺癌移植瘤放射

关键词：缺氧辐射双敏感性启动子抑瘤素表达治疗肺癌实验研究

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RNA干涉分子机制研究进展

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生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 678-681页

作者：孙建国廖荣霞陈正堂第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心重庆400037 第三军医大学基础部生物化学教研室重庆400038

RNA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA (dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制 .双链RNA与同源mRNA互补结合而使特定基因失活 ,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示 .近... 详细信息

RNA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA (dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制 .双链RNA与同源mRNA互补结合而使特定基因失活 ,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示 .近来研究表明 ,2 1～ 2 5nt的小干涉RNA (smallinterferenceRNA ,siRNA)可介导哺乳动物细胞特异性基因沉默 .RNAi具有高效性和高度特异性。

关键词： RNA干涉分子机制研究进展基因沉默

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非小细胞肺癌组织蛋白酶D的表达及与预后的关系

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中华结核和呼吸杂志 1998年第3期21卷 164-166页

作者：王志新赵晓晏第三军医大学新桥医院肿瘤中心

目的探讨组织蛋白酶Ｄ（ＣＤ）表达与肺癌患者预后的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白－过氧化物酶（Ｓ－Ｐ）快速免疫组织化学法检测非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者肺癌组织和配对淋巴结标本中ＣＤ表达。结果６６％（４２／６４）的肺... 详细信息

目的探讨组织蛋白酶Ｄ（ＣＤ）表达与肺癌患者预后的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白－过氧化物酶（Ｓ－Ｐ）快速免疫组织化学法检测非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者肺癌组织和配对淋巴结标本中ＣＤ表达。结果６６％（４２／６４）的肺癌组织ＣＤ表达阳性，其中鳞癌为５７％（１７／３０），腺癌为７４％（２５／３４）。在３５例转移淋巴结标本中，２０例５７％ＣＤ阳性。Ⅲ～Ⅳ期肺癌病例中，肺癌组织ＣＤ表达高于Ⅰ～Ⅱ期病例（Ｐ＜０．０５）。腺癌伴有淋巴结转移组，ＣＤ表达显著高于淋巴结阴性组（Ｐ＜０．０１）。结论肺癌组织ＣＤ高表达与肿瘤临床分期和腺癌的淋巴结转移关系密切，ＣＤ有可能作为ＮＳＣＬＣ患者的预后指标。

关键词：肺肿瘤组织蛋白酶D 非小细胞癌预后

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三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡途径的研究

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中国药理学通报 2002年第1期18卷 87-90页

作者：邢茂张恩娟叶鑫第三军医大学新桥医院药剂科重庆400037 第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆400037

目的　探讨细胞线粒体跨膜电位 (Δψm)和半胱氨酶3(Caspase 3)在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法　以Namalwa、SGC790 1和Bcap37细胞为体外模型 ,流式细胞仪检测亚G1期细胞含量和细胞膜磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻... 详细信息

目的　探讨细胞线粒体跨膜电位 (Δψm)和半胱氨酶3(Caspase 3)在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法　以Namalwa、SGC790 1和Bcap37细胞为体外模型 ,流式细胞仪检测亚G1期细胞含量和细胞膜磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻量等方法鉴定细胞凋亡 ;碘化丙啶 (PI) /Rhodamine(Rh12 3)双染色检测Δψm变化并观察了Caspase 3抑制剂DEVD CHO对As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡的影响。结果　As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡效应与其诱导细胞Δψm下降和Caspase 3活性升高相关 ,抑制Caspase 3活性后As2 O3 使细胞选择坏死通路。结论　As2 O3 可能通过诱导细胞Δψm下降激活Caspase 3并最终使肿瘤细胞凋亡。

关键词：三氧化二砷肿瘤细胞细胞线粒体跨膜电位半胱氨酶3 实验研究细胞凋亡

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PAX3-FKHR转染对横纹肌肉瘤RD细胞分化及MRF4表达的影响

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癌症 2003年第1期22卷 30-34页

作者：李光辉王东林万瑛陈正堂李德志第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆400037 第三军医大学全军免疫学中心重庆400037

背景与目的:研究报道融合基因PAX3-FKHR与腺泡型横纹肌肉瘤的发生有着密切的关系,但它对生肌调节因子的作用还不清楚。本研究拟探讨融合基因PAX3-FKHR对胚胎型横纹肌肉瘤细胞分化及MRF4表达的影响。方法:构建PAX3-FKHR的真核表达质粒,... 详细信息

背景与目的:研究报道融合基因PAX3-FKHR与腺泡型横纹肌肉瘤的发生有着密切的关系,但它对生肌调节因子的作用还不清楚。本研究拟探讨融合基因PAX3-FKHR对胚胎型横纹肌肉瘤细胞分化及MRF4表达的影响。方法:构建PAX3-FKHR的真核表达质粒,采用脂质体法将MRF4、PAX3-FKHR先后转染入人胚胎型横纹肌肉瘤RD细胞,观察转染前后RD细胞生物学特性、形态学改变以及肌分化标志蛋白MHC、α-actin的表达。结果:RD细胞在转染PAX3-FKHR后细胞的生长速度、生长方式及MHC、α-actin的表达均无显著的变化;在表达MRF4的RD细胞中转入PAX3-FKHR后,细胞MRF4表达无明显变化,细胞形态向低分化方向变化,细胞MHC和α-actin表达显著下降。结论:融合基因PAX3-FKHR转染对培养RD细胞的生物学特性及分化无明显影响,并不影响MRF4的表达,但可逆转MRF4促RD细胞分化的作用。

关键词： PAX3-FKHR 横纹肌肉瘤 RD细胞 MRF4 细胞分化

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双重免疫荧光染色法鉴定肺组织内CCA^+SP-C^+细胞

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肿瘤 2008年第1期28卷 32-35页

作者：钱莘敖绪军安江洪陈正堂第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心重庆400037

目的:通过双重免疫荧光染色法鉴定不同肺组织内是否存在Clara细胞特异性抗原(Clara cell specific antigen,CCA)和肺泡表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)共表达的双阳性细胞(double positive cell,DPCs)CCA+SP-C+细胞,为后续开展肺干细胞的相关研究提供实验基础。方法:取成年鼠(小鼠、大鼠)和新生鼠(小鼠、大鼠)的正常肺组织,人的肺鳞癌、腺癌的癌组织和癌旁组织,冰冻切片,进行双重免疫荧光染色,通过激光扫描共聚焦显微镜观察肺组织内是否存在DPCs。每例标本观察时镜下随机选择4~6个视野,计数100~200个肺细胞,得出每百个细胞内DPCs百分率,采用SPSS 11.0统计软件包对数据进行分析。结果:在成年鼠和新生鼠的正常肺组织中均发现了DPCs的存在,在人的肺腺癌组织中也发现了DPCs,而在鳞癌组织中未见DPCs;在人的癌旁组织DPCs数量明显多于相对应的癌组织(P<0.05)。结论:本研究不仅证实了DPCs细胞存在的广泛性,而且在人的肺腺癌组织中发现了DPCs,同时发现癌旁组织内的DPCs明显多于癌组织,为后续进一步分离、纯化DPCs,研究正常肺干细胞和肺癌干细胞的生物学特性提供了实验基础。

关键词：癌,非小细胞肺荧光抗体技术抗原,表面肺表面活性物质相关蛋白质C 肿瘤干细胞

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肺癌患者IL－2RmRNA表达的临床意义

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中国肿瘤临床 1996年第4期23卷 243-246页

作者：王志新张楚毅陈维中何冰汪子厚第三军医大学新桥医院肿瘤中心第三军医大学新桥医院肾病中心实验室

制备了人ＩＬ－２ＲａｃＤＮＡ探针，采用斑点印迹杂交法对４６例肺癌患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ的表达水平进行研究。结果发现ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ的表达程度与肿瘤转移关系密切。肺癌无转移组：ＩＬ－２Ｒｍ... 详细信息

制备了人ＩＬ－２ＲａｃＤＮＡ探针，采用斑点印迹杂交法对４６例肺癌患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ的表达水平进行研究。结果发现ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ的表达程度与肿瘤转移关系密切。肺癌无转移组：ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ表达显著高于对照组与转移组（Ｐ＜０．００１），且与患者的组织学类型及病期有明显关系。转移组：ＩＬ－２Ｒ表达显著低于对照组（Ｐ＜０．００１），提示此组病人存在免疫抑制．其抑制可能存在细胞活化阶段或ＩＬ－２Ｒ的转录水平。同期所测血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在两组患者无明显差异。本组结果提示：ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ表达水平与患者预后密切相关。

关键词：肺肿瘤 IL-2R 斑点印迹杂交 mRNA

来源：评论

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