检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床康复 2006年第25期10卷 43-45页

作者：郝嘉严俊郭红肖颖彬解放军第三军医大学新桥医院心血管外科重庆市400037 解放军第三军医大学高原医学系病理生理教研室重庆市400038

目的:利用短发夹RNA干扰载体介导的RNA干扰技术沉默成年大鼠心脏成纤维细胞中黏附斑激酶,观察细胞增殖和凋亡的变化。方法:实验于2004-12/2005-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。实验选用10～12周龄清洁级的雄性Wistar大... 详细信息

目的:利用短发夹RNA干扰载体介导的RNA干扰技术沉默成年大鼠心脏成纤维细胞中黏附斑激酶,观察细胞增殖和凋亡的变化。方法:实验于2004-12/2005-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。实验选用10～12周龄清洁级的雄性Wistar大鼠24只,以转染靶向黏附斑激酶的重组RNA干扰质粒的心脏成纤维细胞为干预组,选择未转染细胞和转染空质粒、非特异siRNA的细胞为不同对照组,共4组,各6只。消化法培养大鼠心脏成纤维细胞,设计、构建和鉴定黏附斑激酶RNA干扰载体,westernblot法测量黏附斑激酶的沉默效率,四唑盐比色法检测细胞增殖,DNA缺口末端标记技术检测细胞凋亡,流式细胞仪测定B细胞淋巴瘤2和bax的变化。结果:Wistar大鼠24只,全部进入结果分析。①酶切鉴定和测序鉴定表明黏附斑激酶RNA干扰载体构建成功,转染细胞后,Westernblot结果表明第二个重组黏附斑激酶RNA干扰载体的RNA沉默效率最高,为72.1%,其余分别为66.2%和55.3%。②Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组A490值明显低于未转染细胞和转染空质粒、非特异siRNA组(0.179±0.017,0.30±0.002,0.296±0.006,0.281±0.007;t=17.802,16.436,14.993,P<0.01);凋亡率较其余各组则明显升高犤(22.28±2.13)%,(4.72±1.67)%,(6.36±0.92)%,(8.19±1.33)%;t=-19.05,-17.31,-15.16,P<0.01犦。③Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组bax上升明显,与正常对照组和空质粒转染组比较,差异十分显著(2.15±058,1.01±0.04,1.12±0.04;t=-4.79,-4.318,P<0.01);与阴性对照组比较,差异显著(1.19±0.31,t=-3.59,P<0.05)。④Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组B细胞淋巴瘤-2表达较正常对照组、空质粒转染组、阴性对照组显著上升(1.62±0.15,1.04±0.03,1.09±0.01,1.23±0.04;t=-9.39,-8.701,-6.338,P<0.05)。结论:通过RNA干扰技术沉默心脏成纤维细胞中黏附斑激酶基因的表达,可诱导心脏成纤维细胞凋亡,抑制或降低心脏成纤维细胞中黏附斑激酶表达可能是防治心肌纤维化的一种手段。

关键词：心肌/细胞学成纤维细胞基因表达转录遗传转染脱噬作用

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不同分化程度胶质瘤细胞增殖和凋亡相关差异表达基因的鉴定(英文)

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中国临床康复 2006年第24期10卷 170-172,F0003页

作者：郭德玉杨忠曹健王志成解放军第三军医大学西南医院病理学研究所重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市400038 解放军第三军医大学新桥医院药剂科重庆市400038

背景:胶质瘤的发生、发展不仅涉及细胞周期调控基因,也涉及到细胞侵袭、转移和细胞凋亡的调节基因。目的:用基因芯片技术分析不同分化程度的胶质瘤细胞增殖和凋亡相关的差异表达基因,为进一步研究胶质瘤细胞的增殖和凋亡机制奠定基础。... 详细信息

背景:胶质瘤的发生、发展不仅涉及细胞周期调控基因,也涉及到细胞侵袭、转移和细胞凋亡的调节基因。目的:用基因芯片技术分析不同分化程度的胶质瘤细胞增殖和凋亡相关的差异表达基因,为进一步研究胶质瘤细胞的增殖和凋亡机制奠定基础。设计:开放性实验。单位:解放军第三军医大学,西南医院病理学研究所,基础医学部神经生物学教研室,新桥医院药剂科。材料:人脑恶性胶质瘤细胞系CHG-5(WHO分级为Ⅱ级)由本实验室建立并保存培养;SHG-44(WHO分级为Ⅳ级),由苏州医学院附属二院脑肿瘤研究室提供,小牛血清由杭州四季青生物材料研究所生产并提供。实验中还采用了RPMI-1640培养基(Gibco)、Trizol试剂盒(Gibco-BRL)、RNAsecureTM溶液(Ambion,Austin,Texas)、光度适应计(Eppendorf,Hamburg,Germany)。基因芯片含9,984个人类cDNA片段,由香港城市大学准备和提供(UniGEMV2cloneset已知的基因和ESTs购自Incyte公司),SuperscriptⅡ反转录酶由Gibco-BRL公司提供,荧光染料Cy3&Cy5为AmershamPharmacia公司产品。方法:实验于2001/2003在重庆第三军医大学和香港城市大学完成。用Trizol试剂盒抽提总RNA,用SuperscriptⅡ反转录酶进行反转录聚合酶链反应,并用荧光染料Cy3&Cy5标记cDNA产物,然后进行芯片杂交,检测人胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44瘤细胞基因表达的差异,特别是与细胞增殖和凋亡相关基因表达的差异,并用Northernblot杂交来验证芯片结果。主要观察指标:不同分化程度的人胶质瘤细胞基因表达的差异;Northern杂交结果与相应基因芯片结果的比较。结果:①与CHG-5相比,SHG-44细胞中检测到了有120个基因表达明显上调和22个基因表达明显下调,这些差异表达基因的种类很多,其中凋亡类相关基因共6个,上调基因有3个,下调基因3个;细胞周期与增殖类相关基因共12个,上调基因有5个,下调基因7个。②芯片结果进一步得到Northernblot杂交结果的支持。结论:初步揭示了胶质瘤进展的差异表达基因,特别是与细胞增殖和凋亡相关的差异表达基因。

关键词：肿瘤细胞,培养的基因表达脱噬作用遗传学技术

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内毒素血症大鼠交感-迷走神经平衡的改变

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中华创伤杂志 2006年第10期22卷 771-774页

作者：黄健杨志焕张年春陈力勇周健第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所ICU 重庆市400042 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第四研究室重庆市400042 第三军医大学附属新桥医院骨科第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所麻醉科重庆市400042

目的观察内毒素血症时交感-迷走神经张力平衡的改变以及迷走神经刺激对二者间平衡的影响。方法24只SD大鼠按随机数字法分为内毒素组(LPS组)、内毒素+迷走神经刺激组(LPS+VNS组)、等渗盐水+迷走神经刺激组(NS+VNS组)和对照组(CON组,只注... 详细信息

目的观察内毒素血症时交感-迷走神经张力平衡的改变以及迷走神经刺激对二者间平衡的影响。方法24只SD大鼠按随机数字法分为内毒素组(LPS组)、内毒素+迷走神经刺激组(LPS+VNS组)、等渗盐水+迷走神经刺激组(NS+VNS组)和对照组(CON组,只注射等量的等渗盐水)。各组分别于注射LPS或等渗盐水后0min、2h、4h、6h进行心率变异性(HRV)分析,观察极低频功率(VLF)、标准化低频功率(LFnm)、标准化高频功率(HFnm)、低频与高频功率比值(LF/HF),并检测各组肝组织中去甲肾上腺素(NE)和乙酰胆碱(ACh)的水平。结果注射LPS后HFnm、LFnm、LF/HF、VLF以及肝组织ACh水平均升高,肝组织NE水平下降,与NS+ VNS组和CON组比较,差异有统计学意义(P＜0．05)；VNS后,HFnm升高,LF、VLF和LF/HF降低,肝组织ACh水平升高。与NS+VNS组和CON组比较,差异有统计学意义(P＜0．05)。结论内毒素血症时交感-迷走神经张力平衡失衡,交感神经张力高于迷走神经；VNS是调节交感-迷走神经张力平衡的有效措施之一,可提高迷走神经兴奋性,降低交感神经兴奋性,有利于迷走神经发挥其抗炎作用。

关键词：内毒素血症迷走神经电刺激心率变异性交感-迷走神经平衡

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光化学作用增强阳离子聚合物介导EGFP转染结肠癌

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 922-925页

作者：肖卫东陈炜陈祖林刘嘉葛海燕第三军医大学新桥医院普通外科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用... 详细信息

目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响。方法以结肠癌细胞SW 480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2 a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2 a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用,同时以阳离子聚合物PEI为DNA载体,EGFP质粒为目的DNA,通过流式细胞技术对比观察光化学作用对阳离子聚合物介导EGFP质粒转染结肠癌细胞的影响。结果TPPS2 a在2种结肠癌细胞系呈颗粒状分布于细胞质;基于TPPS2 a的光动力效应对结肠癌细胞的生长抑制作用随光照剂量增大而逐渐加大,SW 480细胞取得IC50的光照时间为约6 m in,而HT29取得IC50的光照时间为约12 m in;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可将阳性细胞率分别提高至(29.61±1.15)(SW 480细胞)和(23.47±0.62)(HT29细胞)(P<0.05)。结论TPPS2 a的胞内分布与内吞密切相关;基于TPPS2 a的光化学细胞毒性作用呈剂量依赖性;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可明显提高阳离子聚合物介导转染目的DNA的阳性细胞率。

关键词：光敏剂光动力疗法阳离子聚合物转染

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乳腺癌miRNAs表达谱检测及初步分析

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第三军医大学学报 2006年第22期28卷 2209-2212页

作者：廖荣霞孙建国张亮陈敏陈彬娄桂予周度金陈正堂第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院肿瘤科北京博奥生物芯片有限责任公司北京102206

目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分... 详细信息

目的制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析。方法利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,经T4RNA连接酶荧光标记后与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得乳腺癌miRNAs表达谱。结果成功制作哺乳动物miRNAs微阵列,筛选获得57个乳腺癌相关miRNAs,其中,29个为低表达,28个为高表达。结论建立了哺乳动物miRNAs检测微阵列的技术平台,并筛选到乳腺癌miRNAs表达谱,为进一步研究其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。

关键词： miRNAs 微阵列乳腺癌

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低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞中Gax基因表达及细胞增殖的影响

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第三军医大学学报 2006年第3期28卷 195-197页

作者：夏世金钱桂生胡明冬黄勇谭永红第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中生长终止特异性同源盒(growth arrest-spec ific homeobox,Gax)基因表达及细胞增殖的影响。方法以RT-PCR法、免疫细胞化学法和W estern blot法测定经低氧处理后的大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达3。H-TdR掺入法观察低氧处理后PASMCs增殖情况。结果RT-PCR、免疫细胞化学和W estern blot检测证实低氧(2.5%O2)处理后的PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达逐渐降低;与常氧组比较,低氧组Gax mRNA和蛋白的表达显著下降3。H-TdR掺入法测定结果示PASMCs3H-TdR掺入量在低氧6 h开始增加,随着低氧时间延长,3H-TdR掺入量逐渐增加,至低氧24 h时3H-TdR掺入量最高。结论低氧可下调大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达并诱导PASMCs增殖,提示Gax基因在低氧性PASMCs增殖过程中可能起着重要作用。

关键词： Gax基因低氧肺动脉平滑肌细胞增殖

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人糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及其活性研究

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第三军医大学学报 2006年第1期28卷 50-52页

作者：张方钱桂生吴学玲谢永宏王兴友陈维中第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能。方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand b ind ing dom ain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重... 详细信息

目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能。方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand b ind ing dom ain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重组质粒转染表达情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性。结果扩增出长1 601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genbank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞转录激活活性增强。结论成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性。

关键词：糖皮质激素受体 LBD 转录激活活性

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胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

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第三军医大学学报 2006年第24期28卷 2416-2418页

作者：王旭开王燕杨成明付春江张晔何作云第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆400042 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学新桥医院心血管内科全军心血管内科中心重庆400037

目的观察胰岛素对分离培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖及胶原蛋白合成的影响。方法采用大鼠的腹主动脉血管平滑肌细胞分离培养,应用3H-TdR和3H-脯氨酸掺入方法检测胰岛素对大鼠VSMCs干预后,VSMCs内DNA... 详细信息

目的观察胰岛素对分离培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖及胶原蛋白合成的影响。方法采用大鼠的腹主动脉血管平滑肌细胞分离培养,应用3H-TdR和3H-脯氨酸掺入方法检测胰岛素对大鼠VSMCs干预后,VSMCs内DNA合成以及胶原蛋白合成。结果胰岛素可促进处于静止状态的大鼠VSMCsDNA及胶原蛋白的合成,并呈现明显的浓度依赖关系,在40nmol/L的浓度时DNA及胶原蛋白的合成达到高峰,DNA及胶原蛋白分别处于36h和48h时合成最为显著。结论胰岛素可明显促进培养的VSMCs增殖及胶原蛋白的合成。

关键词：胰岛素血管平滑肌细胞胶原蛋白合成

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原发性肺癌染色体比较基因组杂交研究

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 351-353页

作者：熊玮钱桂生黄桂君第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的分析原发性肺癌不同病理分类(鳞癌、腺癌和其他类型原发性肺癌)的遗传物质不平衡特征,为寻找肺癌发生发展相关基因、揭示肺癌发病机制提供线索。方法应用比较基因组杂交技术分析55例原发性肺癌患者肿瘤细胞染色体,按病理分类分为鳞... 详细信息

目的分析原发性肺癌不同病理分类(鳞癌、腺癌和其他类型原发性肺癌)的遗传物质不平衡特征,为寻找肺癌发生发展相关基因、揭示肺癌发病机制提供线索。方法应用比较基因组杂交技术分析55例原发性肺癌患者肿瘤细胞染色体,按病理分类分为鳞状细胞癌组24例(鳞癌组),腺癌13例(腺癌组),其他组18例(腺鳞癌5例、细支气管肺泡癌8例、小细胞癌4例及非典型类癌1例),正常外周血淋巴细胞染色体DNA标本由20名健康男性志愿者提供。结果原发性肺癌鳞癌组常见染色体扩增区是2Q、5P、11Q、22Q,常见缺失区是1P、4Q、5Q、6Q、8P、9P、10Q、11P、13Q、18Q、21Q。腺癌组常见扩增区是5P、8Q、11Q,常见缺失区是10P、19。其他组中,腺鳞癌、肺泡细胞癌、小细胞癌等各有不同。结论原发性肺癌不同病理分型存在广泛的遗传物质不平衡现象,染色体基因扩增和缺失可能是不同类型肺癌发生发展的基础。

关键词：原发性肺癌比较基因组杂交染色体

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部分液体通气联合伊洛前列素治疗兔油酸型急性肺损伤

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第三军医大学学报 2006年第6期28卷 587-590页

作者：宋鹏李琦王长征易斌黄勇钱桂生第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的观察部分液体通气(partial liqu id ventilation,PLV)联合气道内给予血管扩张药伊洛前列素对急性肺损伤(acute lung in jury,ALI)兔肺气体交换、肺力学方面的影响。方法健康大白兔24只,用油酸混合兔血清复制成ALI模型后随机分为3组... 详细信息

目的观察部分液体通气(partial liqu id ventilation,PLV)联合气道内给予血管扩张药伊洛前列素对急性肺损伤(acute lung in jury,ALI)兔肺气体交换、肺力学方面的影响。方法健康大白兔24只,用油酸混合兔血清复制成ALI模型后随机分为3组。各组采用不同治疗方法:常规机械通气组(conventionalm echan ical ventilation,CMV);部分液体通气组(PLV);联合组为PLV+雾化吸入伊洛前列素(iloprost)。分别监测各组治疗前后各时相点PaO2、PaCO2及肺静态顺应性(Cstat)、肺动脉平均压(pu lmonary arterial pressure,PAP)的变化。结果联合组PaO2从(104±16)mmHg升高到(236±38)mmHg(P<0.05),肺动脉平均压从(22±5)mmHg降低到(16±3)mmHg(P<0.05)。联合组PaO2的升高及PAP的降低优于CMV组和PLV组。结论部分液体通气联合雾化吸入伊洛前列素不仅对于改善ALI肺氧合功能优于单纯部分液体通气,还可减低部分液体通气对肺血流动力学的影响,降低肺动脉高压。

关键词：部分液体通气全氟化碳急性肺损伤伊洛前列素

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