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BAPTA对去甲肾上腺素刺激的大鼠心肌细胞蛋白合成及c-fos和β-MHC表达的影响

第三军医大学学报 2005年第15期27卷 1534-1537页

作者：张恒王培勇刘健严竣第三军医大学高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室全军高原医学重点实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院心血管外科重庆400037

目的观察去甲肾上腺素(norep inephrine,NE)刺激导致的心肌细胞肥大中,钙信号通路和心肌细胞蛋白合成以及c-fos和β-MHC表达之间的关系。方法去甲肾上腺素(10-5mol/L)刺激原代培养的心肌细胞,细胞内钙离子络合剂BAPTA(20μmol/L)阻断钙... 详细信息

目的观察去甲肾上腺素(norep inephrine,NE)刺激导致的心肌细胞肥大中,钙信号通路和心肌细胞蛋白合成以及c-fos和β-MHC表达之间的关系。方法去甲肾上腺素(10-5mol/L)刺激原代培养的心肌细胞,细胞内钙离子络合剂BAPTA(20μmol/L)阻断钙信号通路,通过3H-leuc ine掺入测定蛋白质合成,RT-PCR测定c-fos及β-MHC mRNA的表达。结果NE刺激组的心肌细胞3H-leuc ine摄入量、c-fos及β-MHC的表达均显著高于正常对照组(P<0.01),BAPTA阻断后明显降低(P<0.01),单纯BAPTA阻断组的3H-leuc ine摄入量和β-MHC的表达低于正常对照组(P<0.01),在正常对照组及单纯BAPTA阻断组未见c-fos明显表达。结论Ca2+信号通路不但参与NE刺激引起的心肌细胞蛋白合成增加、c-fos及β-MHC的过度表达,且在正常心肌细胞蛋白质合成及β-MHC表达中也起重要作用。

关键词：去甲肾上腺素钙信号心肌细胞肥大

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甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白的分离纯化及其抗血清的制备

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 607-609页

作者：胡明冬徐剑铖冯英凯周长喜龚传明第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的　提纯甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白并制备其抗血清。方法　酸裂解法分离副伤寒杆菌鞭毛蛋白,通过半饱和硫酸铵提取、AKTAExplorer蛋白纯化系统除盐及弱阴离子交换层析纯化,所获得鞭毛蛋白的产量通过考马斯亮蓝法测定。纯化后的鞭毛蛋白... 详细信息

目的　提纯甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白并制备其抗血清。方法　酸裂解法分离副伤寒杆菌鞭毛蛋白,通过半饱和硫酸铵提取、AKTAExplorer蛋白纯化系统除盐及弱阴离子交换层析纯化,所获得鞭毛蛋白的产量通过考马斯亮蓝法测定。纯化后的鞭毛蛋白免疫新西兰大白兔,通过免疫印迹试验和双向免疫扩散试验,确定血清中是否有抗鞭毛蛋白抗体产生及其效价。结果　SDS PAGE提示,纯化的鞭毛蛋白为1条相对分子量为5 2×10 3 蛋白带;免疫印迹实验亦提示条带在5 2×10 3 处;蛋白定量测得每1克湿重的细菌可提取(4 8±0 5 )mg鞭毛蛋白;抗鞭毛蛋白抗血清效价为1∶64。结论　经酸裂解法可获得高产量的鞭毛蛋白,其抗血清易于制备,滴度高,该抗血清可能在拮抗脓毒血症炎症损伤作用方面有积极意义。

关键词：甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白 AKTA Explorer蛋白纯化系统

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反义annexinⅡ对人肺腺癌细胞系SPC-A-1裸鼠移植瘤生长的抑制作用

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第三军医大学学报 2005年第4期27卷 306-308页

作者：贾晋伟钱桂生黄桂君第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的　分析annexinⅡ基因反义表达载体对裸鼠移植瘤生长的影响。方法　在裸鼠皮下分别接种SPC A 1(亲代组 )和SPC A 1 annexinⅡ(反义组 )细胞 ,测定成瘤时间、肿瘤体积及重量 ,显微镜下观察肿瘤细胞及其对周围组织的影响。结果　成瘤... 详细信息

目的　分析annexinⅡ基因反义表达载体对裸鼠移植瘤生长的影响。方法　在裸鼠皮下分别接种SPC A 1(亲代组 )和SPC A 1 annexinⅡ(反义组 )细胞 ,测定成瘤时间、肿瘤体积及重量 ,显微镜下观察肿瘤细胞及其对周围组织的影响。结果　成瘤时间反义组明显晚于亲代组。反义组接种后形成的肿瘤体积、重量均显著低于亲代组 ,且无一例出现局部侵犯 ,而亲代组则有 2例侵犯周围组织。结论　annexinⅡ基因在促进肿瘤细胞生长及对周围组织的侵袭方面具有重要作用。

关键词： annexinⅡ 肺癌裸鼠

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外源性一氧化氮对LPS诱导的人单核巨噬细胞株NFκB活性的影响

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第三军医大学学报 2005年第10期27卷 935-937页

作者：吴学玲钱桂生徐德斌侯一峰陈维中第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的　研究NO供体硝普钠(sodiumnitroprusside ,SNP)对脂多糖(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U93 7核转录因子κB(NFκB)活性的影响。方法　佛波脂(PMA)诱导U93 7成熟后分为4组,分别为正常对照组(不给任何药物)、LPS组(10ng/mlLPS + 10 0ng... 详细信息

目的　研究NO供体硝普钠(sodiumnitroprusside ,SNP)对脂多糖(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U93 7核转录因子κB(NFκB)活性的影响。方法　佛波脂(PMA)诱导U93 7成熟后分为4组,分别为正常对照组(不给任何药物)、LPS组(10ng/mlLPS + 10 0ng/mlrhLBP)、低剂量SNP组(LPS +rhLBP + 5 0mol/LSNP)、高剂量SNP组(LPS +rhLBP + 5 0 0mol/LSNP)。用免疫细胞化学染色图像分析法和蛋白质定量分析法(Westernblotting)测定U93 7细胞中NFκB的活性;ELISA测定U93 7细胞培养上清液中TNF α的含量。结果　LPS刺激后NFκBP65进入核内,而LBP抑制肽组核易位明显减少。低、高剂量SNP组P65胞浆灰度比较LPS组明显减小(P <0 0 1,P <0 0 5 )。各SNP组细胞核P65的D(4 5 0 )较LPS组降低;各抑制肽组细胞浆P65的D(4 5 0 )较LPS组升高。低、高剂量SNP组TNF α较LPS组显著降低(均P <0 0 5 )。结论　SNP能显著抑制LPS诱导的U93 7细胞NFκB的活化,并降低其TNF α的释放。表明SNP对急性肺损伤或脓毒血征可能具有潜在的预防和早期治疗作用。

关键词：一氧化氮脂多糖类核转录因子κB 肿瘤坏死因子α

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一氧化氮调节脂多糖致炎大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体功能的研究

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第三军医大学学报 2005年第12期27卷 1223-1225页

作者：钱频张芳钱桂生陈维中第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的　研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法　将GR荧光表达质粒pGFP GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP GR核移位情况;相对荧光... 详细信息

目的　研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法　将GR荧光表达质粒pGFP GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP GR核移位情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性;EMSA检测检测细胞NF κB活性。结果　5 0 0 μmol LSNP作用2h出现GFP GR核移位,同时GR转录激活活性显著增强,NF κB活性被显著抑制。运用GR特异性拮抗剂RU486后,NF κB活性抑制现象消失。结论　肺泡巨噬细胞在致炎因子作用条件下,一氧化氮供体(5 0 0 μmol LSNP )通过活化GR发挥抗炎活性。

关键词：一氧化氮供体糖皮质激素受体 NF-κB 转录激活活性

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多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞A549/CDDP及其亲代细胞作用机制的初步研究

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 610-613页

作者：郭芮伶吴国明戢福云黄桂君陈维中第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的　探讨多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞A5 49/CDDP及其亲代细胞的生长抑制作用及其抗肿瘤作用机制。方法　应用MTT比色法和透射电镜等方法,观察A5 49/CDDP及其亲代细胞在多西紫杉醇作用后,细胞生长曲线、生长抑制率及形态学等方面... 详细信息

目的　探讨多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞A5 49/CDDP及其亲代细胞的生长抑制作用及其抗肿瘤作用机制。方法　应用MTT比色法和透射电镜等方法,观察A5 49/CDDP及其亲代细胞在多西紫杉醇作用后,细胞生长曲线、生长抑制率及形态学等方面的变化。结果　MTT比色结果表明,多西紫杉醇对A5 49/CDDP细胞及其亲代细胞具有明显的生长抑制作用,并且在0 1～2 μg/ml剂量范围内存在剂量及时间依赖关系。A5 49/CDDP细胞在多西紫杉醇作用12～2 4h较亲代细胞敏感(P <0 0 1) ,在48h开始表现出其药物耐受性(P <0 0 1) ,在72h则与亲代细胞间无显著性差异(P >0 0 5 ) ;透射电镜观察结果发现,A5 49/CDDP细胞及其亲代细胞的胞质内空泡均明显增多,微绒毛减少甚至消失,线粒体出现肿胀甚至空泡化,同时,还存在少数凋亡小体和脱落的不含细胞器成分的细胞质。结论　多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞及其亲代细胞均具有明显的生长抑制作用,并可能通过诱导肿瘤细胞坏死、凋亡和胞质自切,从而发挥其细胞毒作用。

关键词：多西紫杉醇肺腺癌多药耐药胞质自切

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小鼠骨髓来源的树突状细胞体外扩增与鉴定

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第三军医大学学报 2005年第10期27卷 942-944页

作者：夏俊波吴奎孙鲲王长征第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的　改进目前体外大量扩增树突状细胞(DC)的方法,以获得大量高纯度的树突状细胞,从形态学和免疫表型等方面给予鉴定。方法　用2 0ng/ml重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM CSF)诱导小鼠骨髓细胞体外分化为树突状细胞,用相差显... 详细信息

目的　改进目前体外大量扩增树突状细胞(DC)的方法,以获得大量高纯度的树突状细胞,从形态学和免疫表型等方面给予鉴定。方法　用2 0ng/ml重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM CSF)诱导小鼠骨髓细胞体外分化为树突状细胞,用相差显微镜观察形态学变化,进行扫描、电镜观察和FACS检测细胞表面分子。结果　培养10d ,可获得大量典型DC ,经流式细胞仪检测,DC表达表面分子CD11C、CD80、MHCⅡ。结论　本实验方法可以获得大量高纯度的树突状细胞。

关键词：树突状细胞重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子分离纯化

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氯氨顺铂诱导耐药后肺腺癌细胞株生物学特性及染色体核型分析

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2226-2229页

作者：熊玮钱桂生黄桂君第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的建立肺腺癌氯氨顺铂诱导耐药细胞株,分析耐药细胞株生物学特性及染色体核型,为肺腺癌的治疗提供实验依据。方法采用氯氨顺铂(c is-d iam inod ichlorop latin,CDDP)大剂量冲击+逐步诱导法建立肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP和SPC-A-1/CD... 详细信息

目的建立肺腺癌氯氨顺铂诱导耐药细胞株,分析耐药细胞株生物学特性及染色体核型,为肺腺癌的治疗提供实验依据。方法采用氯氨顺铂(c is-d iam inod ichlorop latin,CDDP)大剂量冲击+逐步诱导法建立肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP和SPC-A-1/CDDP,MTT法检测细胞耐药指数,生物发光法测定细胞能量代谢,流式细胞仪测试细胞周期,染色体G显带技术和光谱核型分析(spectral karyotyp ing,SKY)技术分析染色体变化。结果MTT检测结果显示,A549/CD-DP和SPC-A-1/CDDP耐药指数为14.0和12.0,其ATP、ADP、AMP含量较A549和SPC-A-1显著降低,细胞周期无明显变化。G显带结果表明A549/CDDP和SPC-A-1/CDDP染色体均为亚三倍体,SKY分析见两株耐药细胞均出现数条衍生染色体。结论CDDP可以成功诱导肺腺癌耐药细胞株,衍生染色体,包括der(21)t(21;22)等可能与肺腺癌耐药有关。

关键词：肺腺癌分子细胞遗传学光谱核型分析

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CTA与DSA在椎动脉检测中的对比实验研究

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中国矫形外科杂志 2005年第23期13卷 1803-1805页

作者：朱岩胡非克郭树章任先军梁善言梁文杰解放军第88医院CT室山东泰安271000 第三军医大学新桥医院骨科重庆市400037

[目的]对比分析DSA(d igital subtraction angiography,数字减影血管造影术)、CTA(CT angiography CT血管造影术)在椎动脉检测中的准确性、敏感性和安全性,探讨采用CTA观察椎动脉的价值。[方法]11例新鲜含椎动脉的尸体颈椎标本,模拟人... 详细信息

[目的]对比分析DSA(d igital subtraction angiography,数字减影血管造影术)、CTA(CT angiography CT血管造影术)在椎动脉检测中的准确性、敏感性和安全性,探讨采用CTA观察椎动脉的价值。[方法]11例新鲜含椎动脉的尸体颈椎标本,模拟人体椎动脉血流灌注,分别进行DSA和CTA检测,并把得出的数据进行对比分析。[结果]DSA检测人体椎动脉直径左侧(3.07±0.6645)mm,右侧(3.24±0.5628)mm,平均直径为(3.16±0.5917)mm,最小值为2.29mm,最大值为4.24mm;CTA检测椎动脉左直径左侧(2.99±0.7146)mm,右侧(3.18±0.5432)mm,平均直径为(3.09±0.6279)mm,最小值为2.04mm,最大值为4.25mm;两种检测方法测量值没有统计学差异;左右椎动脉直径没有统计学差异。[结论]CTA显示椎动脉的敏感性和准确性较高,同时可以观察其与骨性结构的解剖关系。

关键词：椎动脉动脉造影 DSA CTA

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结缔组织生长因子反义寡核苷酸抑制TGFβ_1诱导人肾小管上皮细胞转分化

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中国现代医学杂志 2005年第9期15卷 1316-1320页

作者：张璟卓文磊王彦杨惠标敖绪军黄云剑第三军医大学新桥医院肾内科全军肾脏病中心重庆市肾病研究所重庆400037 第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的探讨转化生长因子β-1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)过程中结缔组织生长因子(CTGF)的表达和作用。方法在用MTT比色、荧光分析证明阳离子脂质体(DOTAP)介导CTGF反义寡核苷酸(AS)转染HKC可行的基础上,将培养的HK... 详细信息

目的探讨转化生长因子β-1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)过程中结缔组织生长因子(CTGF)的表达和作用。方法在用MTT比色、荧光分析证明阳离子脂质体(DOTAP)介导CTGF反义寡核苷酸(AS)转染HKC可行的基础上,将培养的HKC分为4组:正常对照组(C组);TGFβ1组(T组);TGFβ1加AS组(T+AS组);4、TGFβ1加CTGF错义寡核苷酸组(T+SC组)。分组处理96h后,分别采用免疫组化、Westernblot和RT-PCR技术检测各组CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并分析CTGF和α-SMA表达量的相关性。结果C组:CTGF和α-SMA表达阴性;T组:CTGF和α-SMA表达阳性;T+AS组:CTGF和α-SMA表达阳性,但皆显著低于T组(P<0.01);T+SC组:CTGF和α-SMA表达皆和T组无显著差异(P>0.05)。相关分析:CTGF和α-SMA在表达量上皆呈较强的线性相关性。结论CTGF的AS能有效地抑制TGFβ1所诱导的TEMT,提示CTGF是TGFβ1诱导TEMT所必需的成份。

关键词：结缔组织生长因子肾小管上皮细胞肌成纤维细胞反义寡核苷酸

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