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第三军医大学学报 2005年第14期27卷 1453-1455页

作者：凌贤龙陆应麟杜芝燕第三军医大学新桥医院消化内科重庆400037 军事医学科学院基础医学研究所病理生物学研究室北京100850

目的探讨线粒体DNA损伤对人肺癌细胞生长和侵袭能力的影响。方法采用溴化乙锭处理获得线粒体DNA缺失细胞;软琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;MTT方法测定细胞长状态。结果线粒体DNA缺失细胞较... 详细信息

目的探讨线粒体DNA损伤对人肺癌细胞生长和侵袭能力的影响。方法采用溴化乙锭处理获得线粒体DNA缺失细胞;软琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;MTT方法测定细胞长状态。结果线粒体DNA缺失细胞较之于其母本细胞系,具有更强的集落形成和侵袭能力,以及更明显的生长优势结论线粒体损伤可能参与了肺癌细胞恶性表型的形成。

关键词：线粒体线粒体DNA 肺癌恶性表型

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甲状腺激素人工神经支架的构建

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西部医学 2005年第5期17卷 421-423页

作者：王敏杨志焕周跃潘君 Maquet V 第三军医大学附属新桥医院骨科重庆400037 第三军医大学附属大坪医院野战研究所四室重庆大学生物工程学院

目的用聚乳酸(P LA)构建一种含有甲状腺激素(T3),并具有纵行排列管经三维立体结构的神经组织工程支架,观察支架中T3溶出度的变化及其对大鼠血清T3的影响。方法按每毫克消旋聚乳酸(PDLLA)中含35ngT3的比例将T3混合在PDLLA中,采用热致相... 详细信息

目的用聚乳酸(P LA)构建一种含有甲状腺激素(T3),并具有纵行排列管经三维立体结构的神经组织工程支架,观察支架中T3溶出度的变化及其对大鼠血清T3的影响。方法按每毫克消旋聚乳酸(PDLLA)中含35ngT3的比例将T3混合在PDLLA中,采用热致相分离法制备三维立体支架,支架内表面涂附纤维粘连蛋白,做扫描电镜观察。同时用放射免疫测定法测定T3溶出度。将材料埋入大鼠体内,分别在1-7天,2、4、8周10个时象点检测大鼠血清T3的浓度,并比较该材料对大鼠血清T3的影响。结果构建的支架材料具有管状纵行排列的立体结构,孔径60-100μm之间。材料每天释放0.96-1.80ngT3,植入体内后大鼠体内的T3浓度均在0.87-1.03ng/m l范围。结论用热致相分离法制备的P LA三维立体支架有良好的立体构型,类似周围神经结构。材料的T3能平稳地释放,植入体内后大鼠体内的血清T3浓度均在正常范围内,对大鼠血清T3浓度无影响。

关键词：聚乳酸甲状腺激素组织工程周围神经热致相分离法

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主动脉平滑肌细胞钙信号与CREB活性的关系

主动脉平滑肌细胞钙信号与CREB活性的关系

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第八次全国动脉硬化性疾病学术会议

作者：刘健张涛何秀娟许蜀闽王培勇第三军医大学新桥医院心外科第三军医大学新桥医院心外科第三军医大学新桥医院心外科第三军医大学高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室第三军医大学高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室

目的探讨钙信号的不同变化引起细胞CREB 活性动态变化的特点。方法培养的主动脉平滑肌细胞通过转染钙敏感绿色荧光蛋白标记的转录因子GFP-CREB,用激光共聚焦显微镜实时动态研究去极化、血管紧张素Ⅱ受体兴奋、β受体兴奋以及阻断钙调蛋... 详细信息

目的探讨钙信号的不同变化引起细胞CREB 活性动态变化的特点。方法培养的主动脉平滑肌细胞通过转染钙敏感绿色荧光蛋白标记的转录因子GFP-CREB,用激光共聚焦显微镜实时动态研究去极化、血管紧张素Ⅱ受体兴奋、β受体兴奋以及阻断钙调蛋白、络合细胞内钙离子时CREB 活性强度的特点。结果细胞内GFP-CREB 主要分布在细胞核,KCI（18 mmol/L）刺激膜除极化,核荧光强度缓慢下降约10 min 后,又缓慢恢复到基线水平;钙调蛋白阻断剂三氟拉嗪(10 mol/L)使核荧光强度随时间呈线性大幅度降低;细胞内Ca螯合剂BAgFA/AM（20 μmol/L）首先使核荧光强度小幅度短暂上升,然后缓慢下降至基线;加入血管紧张素Ⅱ

关键词：病理学与病理生理学钙绿色荧光蛋白 CREB 平滑肌细胞

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斯氏狸殖吸虫重组免疫诊断抗原的实验研究

斯氏狸殖吸虫重组免疫诊断抗原的实验研究

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第十届全军检验医学学术会议

作者：邱宗文张锡林王英段文元第三军医大学附属新桥医院检验科第三军医大学基础部病原生物学教研室第三军医大学基础部病原生物学教研室第三军医大学基础部分子遗传学教研室

目的克隆及构建含斯氏狸殖吸虫成虫半胱蛋白酶基因片段的pET22b(+)表达载体,利用SDS-PAGE和免疫印迹分析阳性克隆菌株的诱导表达及其表达产物的免疫反应性。方法提取斯氏狸殖吸虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增及TA克隆后测定其核苷酸序列并进... 详细信息

目的克隆及构建含斯氏狸殖吸虫成虫半胱蛋白酶基因片段的pET22b(+)表达载体,利用SDS-PAGE和免疫印迹分析阳性克隆菌株的诱导表达及其表达产物的免疫反应性。方法提取斯氏狸殖吸虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增及TA克隆后测定其核苷酸序列并进行序列查询与比。根据已获得的序列和pET22b(+)载体的内切酶位点信息设计引物并再次进行TA克隆,阳性克隆质粒经NcoI和XhoI双酶切后将目的片段与pET22b(+)载体连接并转化至BL21(DE3)菌株,收集经IPTG诱导表达后的菌液进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。结果SDS-PAGE显示经诱导表达的阳性克隆菌株、未经诱导菌株与空载体菌株之间的蛋白带型未见明显差异.但经诱导表达的阳性克隆菌株有一条约22kDa的蛋白条带比另两菌株明显,免疫印迹证实该蛋白条带与抗斯氏狸殖吸虫成虫的免疫豚鼠血清呈强阳性反应。结论成功克隆及构建了含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因的pET22b(+)载体,经诱导表达的融合蛋白与抗斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原的免疫豚鼠血清具有较强的免疫反应性。

关键词：斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶免疫诊断抗原

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油酸/脂多糖致伤老年大鼠MODS的Toll样受体4 mRNA表达变化及意义

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第三军医大学学报 2005年第7期27卷 621-624页

作者：王兴胜吴国明钱桂生徐智陈维中李淑平薛桥王士雯第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037 解放军总医院老年心血管病研究所北京100853

目的　观察油酸/脂多糖(OA/LPS)致伤的老年大鼠多器官功能障碍综合征(MODSE)主要脏器组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达变化,探讨TLR4在MODSE发生中的作用。方法　80只SD大鼠分为老年组及青年组,予以油酸(OA ,0 2 5ml/kg)和脂多糖(LPS ,3 ... 详细信息

目的　观察油酸/脂多糖(OA/LPS)致伤的老年大鼠多器官功能障碍综合征(MODSE)主要脏器组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达变化,探讨TLR4在MODSE发生中的作用。方法　80只SD大鼠分为老年组及青年组,予以油酸(OA ,0 2 5ml/kg)和脂多糖(LPS ,3 5mg/kg)分次静脉注射(间隔4h) ,建立二次打击MODSE和青年MODS模型。观察对照组及伤后2、6、2 4h ,重要器官(肺、心、肝、肾)病理及功能的变化,分别检测肺、心、肝和肾组织中TLR4mRNA表达变化。结果　OA/LPS致伤后,肺脏损害出现最早,PaO2 于2h降至最低值,而心、肝、肾功能损害指标于6h达峰值。在同一时相点,老年鼠脏器损害重于青年鼠(P <0 0 5 ,P <0 0 1)。致伤后肺、心、肝和肾组织中TLR4mRNA表达均显著升高(P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;其中以肺组织中最高,升高幅度最大,于2h达峰值;心、肝、肾组织中于6h达峰值。在相同时相点老年鼠各组织中TLR4mRNA表达高于青年鼠(P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论　油酸+脂多糖所致老年鼠多器官功能障碍重于青年鼠,以肺损伤出现最早,损伤最重。致伤后大鼠肺、心、肝、肾组织中TLR4mRNA表达升高,老年组高于青年组,以肺组织中最高,升高幅度最大,在MODSE发病机制中起重要作用,可能是MODSE发生过程中肺脏最先且严重受损的原因之一。

关键词：多器官功能障碍综合征老年大鼠油酸脂多糖 Toll样受体4

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造血干细胞移植对卵巢功能的影响45例分析

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中国实用妇科与产科杂志 2005年第12期21卷 723-725页

作者：陈琬玲侯开宇李真潘兴华苏瑾蒋璧谦武警云南省总队医院妇产科 650111 云南省第二人民医院 650031 第三军医大学附属新桥医院 400037 昆明陆军总医院中心实验室 650031

目的探讨造血干细胞移植对卵巢功能的影响。方法观察2002年10月至2003年10月间在昆明陆军总医院,昆明医学院附属第一、二医院以及云南省肿瘤医院中45例因急性非淋巴细胞白血病分别接受同种异体造血干细胞移植(Allo-SCT)和自体造血干细... 详细信息

目的探讨造血干细胞移植对卵巢功能的影响。方法观察2002年10月至2003年10月间在昆明陆军总医院,昆明医学院附属第一、二医院以及云南省肿瘤医院中45例因急性非淋巴细胞白血病分别接受同种异体造血干细胞移植(Allo-SCT)和自体造血干细胞移植(Auto-SCT)患者的月经恢复情况和性激素变化以及卵巢的形态学改变,同时抽取45例同年龄段健康妇女作为对照。结果Allo-SCT中有2例月经恢复,Auto-SCT中有4例恢复,移植时年龄越小,卵巢功能越易恢复。Allo-SCT和Auto-SCT后促性腺激素较对照组显著升高,而雌激素显著降低,Allo-SCT的雄激素也显著降低。此外,移植组的子宫和卵巢体积均小于正常对照组(P<0.01),而Allo-SCT组的子宫和卵巢体积则更小。结论造血干细胞移植后引起的卵巢功能降低主要是因为移植前化疗对卵巢的损害,但Allo-SCT引起的免疫调节障碍可进一步使卵巢功能减退。

关键词：造血干细胞移植卵巢功能骨髓抑制性治疗

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培养的人动脉平滑肌细胞诱导高密度脂蛋白氧化修饰

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中国动脉硬化杂志 2005年第1期13卷 17-19页

作者：江渝刘红彭家和叶治家何凤田董燕麟第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆市400038 第三军医大学新桥医院血液科重庆市400037

目的　探讨高密度脂蛋白氧化修饰发生的机制。方法　利用体外培养的人动脉平滑肌细胞与人血浆高密度脂蛋白共同温育后 ,用琼脂糖凝胶电泳方法观察高密度脂蛋白电泳迁移率 ,紫外光分光光度法测定高密度脂蛋白共轭二烯的含量 ,利用荧光分... 详细信息

目的　探讨高密度脂蛋白氧化修饰发生的机制。方法　利用体外培养的人动脉平滑肌细胞与人血浆高密度脂蛋白共同温育后 ,用琼脂糖凝胶电泳方法观察高密度脂蛋白电泳迁移率 ,紫外光分光光度法测定高密度脂蛋白共轭二烯的含量 ,利用荧光分光光度法测定其硫代巴比妥酸反应物质的量 ,用可见光分光光度法测定高密度脂蛋白的脂氢过氧化物含量。结果　人血浆高密度脂蛋白与人动脉平滑肌细胞共同培养 4 8h后 ,与天然高密度脂蛋白比较 ,其电泳迁移率明显增加 ,其共轭二烯、硫代巴比妥酸反应物质及脂氢过氧化物的含量均比天然高密度脂蛋白显著增加 (P <0 .0 1)。

关键词：病理学与病理生理学培养细胞诱导高密度脂蛋白氧化修饰蛋白电泳迁移率高密度脂蛋白人动脉平滑肌细胞氧化修饰细胞培养

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脐血间充质干细胞分离、培养与鉴定

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重庆医学 2005年第6期34卷 879-881,884页

作者：李启明程天民李宁粟永萍冉新泽艾国平第三军医大学全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学新桥医院高压氧中心重庆400037

目的研究脐带血(HUCB)中含有的间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养条件,探讨其作为种子细胞用于下一步实验研究的稳定性与实用性。方法无菌条件下取正常足生产的脐带血,经CPDA1复合抗凝剂抗凝,然后经过去红细胞处理,再用淋巴细胞分离液... 详细信息

目的研究脐带血(HUCB)中含有的间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养条件,探讨其作为种子细胞用于下一步实验研究的稳定性与实用性。方法无菌条件下取正常足生产的脐带血,经CPDA1复合抗凝剂抗凝,然后经过去红细胞处理,再用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,DMEM/F12培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层,采用定向诱导分化方法检测鉴定获得的MSCs。结果来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现形态学上可见间充质样的细胞,间充质样细胞为类似成纤维样的细胞形态,但偏向半月形弯曲状,经过成肌、成脂肪、成骨细胞诱导分化成功后确定为间充质干细胞。结论脐血来源的间充质干细胞能够在体外分离、培养出有用的进一步实验所需要的种子细胞。

关键词：脐带血间充质干细胞细胞培养诱导分化鉴定

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人骨骨髓间充质干细胞的分离培养及表型分析

人骨骨髓间充质干细胞的分离培养及表型分析

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第10届全国实验血液学会议

作者：梁雪粟永萍孔佩艳陈幸华彭贤贵徐辉常诚艾国平第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学附属新桥医院血液科第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的体外分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性,为进一步实验研究打下基础。方法通过密度梯度离心法及贴壁培养分离纯化人骨髓中的单个核细胞、体外培养传代、倒置相差显微镜观察细胞生长情况、瑞氏染色及透射电镜观察... 详细信息

目的体外分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性,为进一步实验研究打下基础。方法通过密度梯度离心法及贴壁培养分离纯化人骨髓中的单个核细胞、体外培养传代、倒置相差显微镜观察细胞生长情况、瑞氏染色及透射电镜观察细胞形态及结构、绘制生长曲线、流式细胞仪测细胞表面标记及增殖周期、免疫细胞化学及细胞化学染色对分离培养细胞鉴定、了解其一般特性。结果原代和传代培养的细胞以成纤维样为主,有较强的生长增殖能力;流式细胞仪检测细胞表面标记:CD29、CD105阳性,CD34阴性;细胞周期分析:90％的细胞处于C0/G1期;细

关键词：骨髓间充质干细胞分离培养

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应激引起大鼠脑卒中时细胞与机体防御基因的表达差异及其在发病学中的意义

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中华老年心脑血管病杂志 2005年第2期7卷 136-138页

作者：王先梅祝善俊祝之明赵斌惠汝太第三军医大学新桥医院心内科重庆400037 第三军医大学野战外科研究所大坪医院高血压内分泌科重庆400042 中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院中德分子医学研究室北京100037

目的　探讨应激引起大鼠脑卒中时细胞与机体防御基因的表达差异以及其在发病学中的意义。方法　制备大鼠高血压脑卒中模型,应用抑制性差减克隆技术对卒中样发作鼠(刺激因素组)和正常对照鼠脑(正常对照组)的差异基因进行筛选。经过两轮... 详细信息

目的　探讨应激引起大鼠脑卒中时细胞与机体防御基因的表达差异以及其在发病学中的意义。方法　制备大鼠高血压脑卒中模型,应用抑制性差减克隆技术对卒中样发作鼠(刺激因素组)和正常对照鼠脑(正常对照组)的差异基因进行筛选。经过两轮杂交后,产生的克隆均为脑卒中鼠脑组织特异表达的序列。每组随机挑取2 88个克隆,进行测序及GenBankBlast生物信息分析。结果　两组共有4 5 6个可用序列,我们对每个与已知基因高度同源的序列以功能为参照进行了分类,发现大鼠卒中后脑组织细胞与机体防御基因表达明显下调(P <0 .0 1) ,2 88个克隆中未发现运输蛋白/膜转运及应激反应相关基因的表达。结论　脑组织运输蛋白/膜转运及应激反应相关基因的表达发生改变,可能是脑卒中发生的分子机制之一。

关键词：脑血管意外应激防御机制基因表达大鼠

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