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第十次全国生物制品学术会议

作者：邹全明第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心，重庆 400038

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)由澳大利亚的B. Marshall及R. Warren于1983年发现，并因此荣获2005年度诺贝尔医学/生理学奖。经20余年国际广泛研究证实，Hp是人类上消化道疾病的重要致病菌，为慢性胃炎、胃溃疡及十二指肠溃疡的... 详细信息

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)由澳大利亚的B. Marshall及R. Warren于1983年发现，并因此荣获2005年度诺贝尔医学/生理学奖。经20余年国际广泛研究证实，Hp是人类上消化道疾病的重要致病菌，为慢性胃炎、胃溃疡及十二指肠溃疡的主要病因。由于Hp疫苗蕴藏着巨大的经济效益和社会效益，早在二十世纪80年代就有Hp疫苗动物模型研究的相关报道，20余年过去了，现在全世界Hp疫苗的研究正处于方兴未艾，激烈竞争的研发阶段。Hp疫苗主要分为全菌疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗和DNA疫苗，本文现做一概述。

关键词：幽门螺杆菌上消化道疾病亚单位疫苗动物模型

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基于新月柄杆菌RsaA外运机制的EspA及EspA-IL-24融合蛋白胞外分泌表达研究

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生物技术通讯 2008年第3期19卷 353-357页

作者：宁亚蕾周立雄毛旭虎张卫军程琰余抒邹全明第三军医大学临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 香港大学医学院

目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵... 详细信息

目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统。方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将获得的RsaA系统元件编码序列和异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒,构建新的胞外分泌表达质粒pQABP2S;以大肠杆菌为宿主菌诱导表达EspA及EspA-IL-24融合蛋白,并通过Westernblot检测目标蛋白在培养上清中的表达。结果:获得了新的胞外分泌表达载体pQABP2S;与对照相比,该载体宿主系统培养上清中目标蛋白EspA及EspA-IL-24的表达量明显增加。结论:在大肠杆菌中通过RsaA分泌系统可实现分子大小不同的EspA及EspA-IL-24融合蛋白的特异性分泌表达,进一步证实该分泌表达策略的有效性和通用性;调整调控序列以优化分泌系统的尝试,为此类基因工程技术平台的开发提供了借鉴。

关键词：新月柄杆菌 RsaA分泌系统大肠杆菌分泌蛋白A 白细胞介素-24 分泌表达表达载体大肠杆菌

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壳聚糖-海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球疫苗制备工艺研究

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重庆医学 2007年第13期36卷 1285-1287页

作者：王毅超邹全明任建敏郭刚解庆华刘健第三军医大学临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 北华大学附属医院吉林132011

目的改变壳聚糖-海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球制备中的各项参数,最终确认微球制备工艺。方法根据形成乳液的溶解性、流动性及黏稠度,选择微球制备过程中海藻酸钠(AGS)浓度及植物油与海藻酸钠的配比,通过比较形成微球的粒径大小,... 详细信息

目的改变壳聚糖-海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球制备中的各项参数,最终确认微球制备工艺。方法根据形成乳液的溶解性、流动性及黏稠度,选择微球制备过程中海藻酸钠(AGS)浓度及植物油与海藻酸钠的配比,通过比较形成微球的粒径大小,最终确定微球制备中CaCl2溶液的滴定程序及搅拌速率、搅拌时间等实验参数。结果确定了AGS乳液浓度为2%、植物油与AGS乳液配比为2∶8、CaCl2溶液反滴滴定法等MS制备工艺,并确定了搅拌速率800r/min、药物浓度2mg/ml、制备温度25℃、搅拌时间30min等参数。结论依照上述参数可以制备出符合实验要求的微球疫苗。

关键词：微球工艺幽门螺杆菌

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microRNA在胃肠道肿瘤中的研究进展

microRNA在胃肠道肿瘤中的研究进展

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：黎伯胜肖斌刘真邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

本文对microRNA在胃肠道肿瘤中的研究进展情况进行了阐述。microRNA(miRNA)是一段长度约22nt的内源性非编码单链RNA分子，能在转录后水平调控基因的表达。研究证实miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发... 详细信息

本文对microRNA在胃肠道肿瘤中的研究进展情况进行了阐述。microRNA(miRNA)是一段长度约22nt的内源性非编码单链RNA分子，能在转录后水平调控基因的表达。研究证实miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用。近年来，miRNA已经被证实能够抑制癌基因或抑癌基因的表达，参与了人类胃肠道肿瘤的发生和发展。

关键词：胃肠道肿瘤幽门螺杆菌细胞增殖基因表达

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致泻性大肠杆菌疫苗研究进展

致泻性大肠杆菌疫苗研究进展

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：毛旭虎邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

大肠杆菌引起的腹泻多发生在儿童及发展中国家,发展致泻性大肠杆菌疫苗具有特殊的意义。除了灭活疫苗、减毒疫苗、结合多糖疫苗和亚单位疫苗外,新近出现的DNA疫苗、转基因植物疫苗和ghost疫苗技术为疫苗的研制提供了新的思路。本文综述... 详细信息

大肠杆菌引起的腹泻多发生在儿童及发展中国家,发展致泻性大肠杆菌疫苗具有特殊的意义。除了灭活疫苗、减毒疫苗、结合多糖疫苗和亚单位疫苗外,新近出现的DNA疫苗、转基因植物疫苗和ghost疫苗技术为疫苗的研制提供了新的思路。本文综述了目前致泻性大肠杆菌疫苗研究的新进展。

关键词：致泻性大肠杆菌疫苗 DNA疫苗转基因植物疫苗 ghost疫苗

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解放军检验医学杂志 2010年第1期6卷 13-17页

作者：丁红雷毛旭虎王豪举邹全明西南大学动物科技学院暨重庆市牧草与草食家畜重点实验室重庆400716 第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的了解大肠杆菌O157分离菌株携带毒力及黏附相关基因的情况及菌株的多态性.方法用聚合酶链式反应扩增stxl、stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因.选用限制性内切酶Hincl和EcoRll对分离的O157:H7菌株eaeA基因进行酶切.选用限制性内切酶... 详细信息

目的了解大肠杆菌O157分离菌株携带毒力及黏附相关基因的情况及菌株的多态性.方法用聚合酶链式反应扩增stxl、stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因.选用限制性内切酶Hincl和EcoRll对分离的O157:H7菌株eaeA基因进行酶切.选用限制性内切酶HaeⅢ、HinfⅠ、EcoRⅡ和RsaⅠ对分离的O157:H7菌株ehxA基因进行酶切,最后对这两个基因进行PCR-RFLP分析.结果所有O157:H7菌株扩增出eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因,但没有扩增出stxl和stx2基因;4株O157:H1菌株,均没有扩增出stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因,且只有1株扩增出stx1基因.所有分离菌株的eaeA基因和ehxA基因选用限制性内切酶酶切之后所得酶切片段数目和大小与标准菌株的eaeA基因和ehxA基因选用限制性内切酶酶切之后所得酶切片段数目和大小相同.结论由于所有菌株缺失stx2基因,其致病力相对较低,且在基因水平较为保守,多态性较为单一.

关键词：大肠杆菌O157 毒力及黏附相关基因 PCR RFLP

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Rv0341用于诊断依赖利福平结核分枝杆菌结核病的研究概况

Rv0341用于诊断依赖利福平结核分枝杆菌结核病的研究概况

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中国防痨协会临床委员会、中国防痨协会基础委员会学术研讨会

作者：吴园钟敏王易伟钟静胡频频毛旭虎第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆市肺科医院暨重庆市结核基因诊断中心实验室

1990年日本Nakamura等报道了1例依赖利福平的结核分枝杆菌（依R菌）感染病例。1999年我国耐药结核学术研讨会上首次提出结核分枝杆菌依赖利福平生长的现象。方法对依R菌的研究中发现,有R和无R两种生长条件下,其形态、结构、染色性、毒... 详细信息

1990年日本Nakamura等报道了1例依赖利福平的结核分枝杆菌（依R菌）感染病例。1999年我国耐药结核学术研讨会上首次提出结核分枝杆菌依赖利福平生长的现象。方法对依R菌的研究中发现,有R和无R两种生长条件下,其形态、结构、染色性、毒力和蛋白质等方面均有明显差异。依R菌在有R管中菌落粗大、凸起、花菜样、易刮取和乳化;在光镜下菌体粗大、深染;在透射电镜下菌体细胞壁完整。而在无R管中菌落细小、扁平、荷包蛋样、不易刮取和乳化;在光镜下菌体细小、浅染且大小不等;在透射电镜下菌体细胞壁缺陷。提示依R菌在无R条件下可呈细胞L型样改变。感染依R菌的肺结核病患者表现为病灶范围广、症状重、体征明显、病程长。比较依R菌在两种生长条件下的蛋白图谱,发现84%的依R菌在含R管中假设蛋白Rv0341的表达量明显增加;86%的非依R菌和标准株HRv在含R管和无R对照管均没有Rv0341的高表达。结果利福平对Rv0341在依R菌中的表达有上调作用;Rv0341的高表达与依R菌结核病密切相关,可视为依R菌的相关蛋白或标志物。本研究用大肠杆菌做为阴性对照,利用聚合酶链式反应自依赖利福平（14株）、耐利福平（23株）、利福平敏感（12株）的结核分枝杆菌、HRv及卡介苗（共51株）中扩增编码假设蛋白Rv0341的iniB基因,经ApaⅠ和EcoRⅤ、KpnⅠ和SmaⅠ两组双酶切,1%琼脂糖凝胶电泳检测其带型,进行限制性片段长度多态性分析。结果显示:iniB在不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的,测序结果也证实了不同类型结核分枝杆菌的iniB基因无突变。研究还采用基因重组技术克隆并表达iniB基因,经镍离子亲和层析柱纯化得到纯度约98%的重组蛋白Rv0341,并分别把依R菌高表达的蛋白Rv0341 （天然蛋白Rv0341）、重组蛋白Rv0341和无关蛋白EspA-IL-24按常规进行SDS-PAGE,转移至NC膜后用1%BSA封闭并分别以临床依R菌肺结核患者和非依R菌肺结核患者的血清为一抗,HRP标记的羊抗人IgG为二抗进行Western blot,鉴定蛋白的反应原性及特异性。结果显示:天然蛋白Rv0341和重组蛋白Rv0341与依R菌肺结核患者血清反应均出现明显的棕黄色条带,呈强阳性反应;与非依R菌肺结核患者血清反应无棕黄色条带,呈阴性反应;而无关蛋白EspA-IL-24与依R菌肺结核患者、非依R菌肺结核患者血清反应均无棕黄色条带出现,呈阴性反应。结论重组蛋白Rv0341具有良好的反应原性及特异性,其编码基因亦相对保守,可用于依R菌结核病临床血清学快速诊断试剂盒的研发。

关键词：结核分枝杆菌重组蛋白利福平结核病 Rv0341 研究概况

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肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建与表达

肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建与表达

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：刘艳青毛旭虎王庆旭易勇曾明邹全明重庆第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心 400038 北京崇文区天坛西里2号中国药品生物制品检定所 100050

目的：构建表达肠血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素c-端免疫保护性片断(IntiminC300)的融合蛋白(***300)。方法：采用PCR技术从EHECO157:H7基因组中扩增EspA的编码基因espA及IntiminC300的编码基因eaeC300,T-A克隆后依次构建至表达载体pET-28a(+),转化宿主细胞*** BL21(DE3),测序鉴定,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测其表达量及表达形式,亲和层析法纯化目的蛋白,免疫印迹分析免疫反应性。结果：PCR法自EHECO157:H7基因组中分别扩增出了约580bp(espA)和900bp(eaeC300)的目的片段,将二者融合构建了重组质粒pET-28a(+)-espA-eaeC300,测序结果与理论预测值一致性为99.9％(1501/1502)。融合蛋在工程菌中表达量约40％,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子量(Mr)约54×103Da,破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达,包涵体洗涤后纯化,获得目的蛋白纯度约85％。免疫印迹显示融合蛋白能分别与兔抗EspA和IntiminC300血清发生免疫反应。结论：高效表达了融合蛋白(EspA-IntiminC300),此融合蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,为研制EHEC O157:H7多亚单疫苗奠定了基础。

关键词：肠血性大肠杆菌 Ⅲ型分泌蛋白紧密粘附素 C-端免疫保护性片断融合蛋白

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表达肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA抗原的减毒鼠沙门氏菌株的构建及免疫学性质研究

表达肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA抗原的减毒鼠沙门氏菌株的构建...

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：宁元元毛旭虎曾明邹全明重庆第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心 400038 北京崇文区天坛西里2号中国药品生物制品检定所 100050

目的:利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法:构建表达espA的重组质粒,,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检... 详细信息

目的:利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法:构建表达espA的重组质粒,,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋白的表达情况。并观察重组菌体外培养的稳定性。结果:利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌,经***-PAGE电泳出现了一条约21KDa的蛋白条带,***检测能与抗EspA的单克隆抗体发生特异性反应。且在没有选择压力的条件下体外能稳定地繁殖、生长和传代。结论:表达O157:H7 EspA的重组减毒鼠沙门氏菌构建成功,为发展口服抗EHEC O157:H7的疫苗奠定了初步基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 减毒鼠伤寒沙门氏菌平衡致死系统 EHEC O157:H7 EspA抗原免疫学性质

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猪链球菌感染的免疫研究概况

猪链球菌感染的免疫研究概况

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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：毛旭虎朱凤才第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 江苏省疾病预防控制中心急传科南京210009

人感染猪链球菌起病急骤,毒血症状严重,病情凶险,进展快,预后差,死亡率高。猪链球菌的致病机理还不甚清楚。了解该菌感染的免疫,对阐明其致病机理、建立诊断方法和研制开发有效的预防及治疗性疫苗具有重要的指导意义。本文就猪链球菌感... 详细信息

人感染猪链球菌起病急骤,毒血症状严重,病情凶险,进展快,预后差,死亡率高。猪链球菌的致病机理还不甚清楚。了解该菌感染的免疫,对阐明其致病机理、建立诊断方法和研制开发有效的预防及治疗性疫苗具有重要的指导意义。本文就猪链球菌感染的免疫研究从非特异性免疫、特异性免疫和免疫预防三方面进行了综述。

关键词：猪链球菌感染致病机理特异性免疫免疫预防

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