检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2008年第1期24卷 27-32页

作者：戚华兵宋瑞华杜晓兰赵玲苏楠刘道诚李福兵陈林第三军医大学第三附属医院野战外科研究所全军创伤中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是细胞在缺氧等条件下稳定表达的具有转录活性的蛋白,通过与多种靶基因调控区的缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)结合,调控靶基因表达,使机体对缺氧、缺血等病理生理... 详细信息

缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是细胞在缺氧等条件下稳定表达的具有转录活性的蛋白,通过与多种靶基因调控区的缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)结合,调控靶基因表达,使机体对缺氧、缺血等病理生理过程产生适应性反应。为从整体动物水平研究HIF-1α的作用,需要建立HIF-1α相关遗传修饰小鼠。分别针对HIF-1αmRNA序列的两个靶位点合成两对互补的寡核苷酸链,构建可诱导的RNA干扰真核表达载体HIF-AB和HIF-CD。分别将CRE重组酶真核表达载体CRE-ER^(T2)与HIF-AB或HIF-CD转染入RAW264.7细胞,筛选得到稳定表达CRE-ER^(T2)与HIF-AB,或CRE-ER^(T2)与HIF-CD的稳定细胞系。在用4-HT诱导去除上述细胞系中HIF-AB或HIF-CD所含的Neo基因后,用CoCl_2诱导HIF-1α表达,采用半定量RT-PCR检测HIF-AB或HIF-CD对HIF-1α基因表达的影响。结果发现干扰载体(HIF-AB和HIF-CD)对HIF-1αmRNA序列的沉默效果分别为85%和72%。选择干扰效率较高的表达载体HIF-AB经显微注射获得HIF-1α基因敲低小鼠模型,经PCR以及测序验证获得2个转基因阳性小鼠(Founders,G_0代)。G_0代雄鼠与FVB/N雌鼠交配后获得2只F_1代(first filial generation)转基因阳性小鼠,经与EIIA-Cre转基因小鼠交配,得到EIIA-Cre;HIFRNAi^(flox/+)小鼠,RT-PCR结果显示,EIIA-Cre;HIFRNAi^(flox/+)小鼠肝、肺、肾等组织的HIF-1αmRNA水平明显降低,分别约为正常对照的44%、38.2%和23.5%。该小鼠模型的建立为进一步研究HIF-1α的功能及作用机制提供了新的手段。

关键词：缺氧诱导因子-1α 发夹状小干涉RNA 转基因小鼠

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蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路关键蛋白在糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中的表达研究

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中华烧伤杂志 2016年第10期32卷 588-593页

作者：黄宏邱伟朱明张娅崔文慧邢伟李向云安天琛陈民佳郭韡徐祥第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Akt／mTOR）信号通路关键蛋白的表达变化，并探讨相关机制。方法选取7～8周龄SD大鼠78只，按照随机数字表法分为糖尿病组和非糖尿病组，每组39只。糖尿病组... 详细信息

目的探讨糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Akt／mTOR）信号通路关键蛋白的表达变化，并探讨相关机制。方法选取7～8周龄SD大鼠78只，按照随机数字表法分为糖尿病组和非糖尿病组，每组39只。糖尿病组大鼠一次性快速腹腔注射20mg／mL链脲佐菌素液（65mg／kg，采用柠檬酸缓冲液配制），建立糖尿病模型；非糖尿病组大鼠同法注射等量的柠檬酸缓冲液。于注射后1～8周2组每周各取3只大鼠，于背部切取约1．0cm×1．0cm的全层皮肤，行HE染色观测表皮厚度。注射后1周，2组各取15只大鼠同前取皮造成全层皮肤缺损，于伤后即刻及1、3、5、7d每组各取3只大鼠处死，伤后即刻每只大鼠沿创缘切取1块皮肤组织、伤后1～7d每只大鼠切取创面组织，取一部分组织采用蛋白质印迹法检测皮肤组织及创面组织中的Akt、磷酸化Akt、mTOR、磷酸化mTOR的蛋白表达水平；取剩余组织行免疫荧光染色，观察皮肤组织及创面组织中的磷酸化Akt与波形蛋白表达。对数据行析因设计方差分析、多重t检验。结果（1）注射后1、2周，2组大鼠表皮厚度相似（t值分别为0．25、1．33，P值均大于0．05）；与非糖尿病组比较，注射后3周起糖尿病组大鼠表皮厚度明显变薄（t值为4．44～9．71，P〈0．05或P〈0．01）。（2）与伤后即刻皮肤组织比较，非糖尿病组大鼠伤后1～7d创面组织Akt、磷酸化Akt、roTOR（伤后3d除外）及磷酸化mTOR蛋白表达水平明显升高，t值为3．75～21．44，P〈0．05或P〈0．01。与伤后即刻皮肤组织比较，糖尿病组大鼠伤后1～7d创面组织中Akt、roTOR蛋白表达水平（伤后ldmTOR除外）无明显变化（t值为0．03～2．32，P值均大于0．05）；伤后1～7d创面组织中磷酸化Akt（伤后1d除外）、磷酸化roTOR蛋白表达水平均明显升高（t值为3．79～8．11，P〈0．05或P〈0．01）。伤后即刻，2组大鼠皮肤组织中Akt蛋白表达水平相近（t=0．66，P〉0．05），但糖尿病组大鼠皮肤组织中磷酸化Akt蛋白表达水平（0．310±0．035）明显低于非糖尿病组（0．790±O．032，t=6．20，P〈0．05）。与非糖尿病组大鼠比较，糖尿病组大鼠伤后即刻皮肤组织中roTOR和磷酸化roTOR蛋白表达水平及伤后1～7d创面组织中Akt、磷酸化Akt、roTOR和磷酸化mTOR蛋白表达水平均明显降低（t值为3．52～13．44，P〈0．05或P〈0．01）。（3）与伤后即刻皮肤组织比较，2组大鼠伤后l～7d创面组织中磷酸化Akt、波形蛋白表达呈逐渐增强趋势，其中糖尿病组大鼠皮肤组织和创面组织中各指标的表达均明显弱于非糖尿病组。结论创伤能刺激Akt／mTOR信号通路活化，上调关键蛋白表达；糖尿病皮肤组织和创面组织中该信号通路的活性低下可能是导致创面难愈的关键机制。

关键词：糖尿病伤口愈合皮肤蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路

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Calpain裂解Atg5决定中性粒细胞发生自噬还是凋亡，以及C5a在其中的可能作用

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生物化学与生物物理进展 2008年第12期35卷 1358-1363页

作者：张保全郭振辉房巍吕凤林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 广州军区总医院MICU科广州510010

通过阐明C5a、calpain和Atg5相互作用,为开展新的研究寻找方向.中性粒细胞凋亡控制炎症反应及其强度,多种疾病和中性粒细胞凋亡失调有关,但其发生机制尚未阐明.C5a为补体片段,有多种功能,如诱导中性粒细胞趋化、呼吸爆发、增强吞噬、颗... 详细信息

通过阐明C5a、calpain和Atg5相互作用,为开展新的研究寻找方向.中性粒细胞凋亡控制炎症反应及其强度,多种疾病和中性粒细胞凋亡失调有关,但其发生机制尚未阐明.C5a为补体片段,有多种功能,如诱导中性粒细胞趋化、呼吸爆发、增强吞噬、颗粒酶释放和延迟凋亡.已知calpain涉及中性粒细胞功能及凋亡调节并对该凋亡发生具有特异性.不同刺激因素可通过不同路径调节不同calpain亚型的活性.已有报道C5a可以通过调节calpain亚型活性而调节中性粒细胞的趋化反应.另外,自噬是真核细胞中广泛存在的生物过程,具有细胞保护作用,Atg5对于自噬体形成必不可少.Calpain可裂解Atg5为24kutAtg5,使其失去形成自噬体的功能并介导凋亡.Atg5参与了自噬和凋亡的转换.

关键词：中性粒细胞凋亡自噬 Atg5 calpain C5a

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骨形成蛋白4条件性RNA干扰小鼠的建立

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遗传 2008年第3期30卷 341-346页

作者：李福兵杜晓兰余瑛赵玲何启芬陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军创伤中心创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室重庆400042

为研究骨形成蛋白4(Bone morphogenetic protein 4,BMP4)在骨骼发育中的作用,我们以含有LoxPneo的pBSK/U6载体为骨架,构建小鼠BMP4条件性RNAi(conditional RNA interference),CRNA;载体(BMP4CRNAi),经KpnⅠ和AflⅢ双酶切获取针对bmp4并含neo基因的目的干扰片段,纯化后的目的片段显微注射入0.5d的FVB/NJ小鼠受精卵,并植入同期发情的假孕母鼠中,获取G0代转基因小鼠;利用PCR对G0代转基因小鼠基因型进行鉴定,PCR阳性的小鼠与FVB/NJ小鼠交配,最终获取稳定传代的BMP4CRNAi小鼠。稳定传代的BMP4CRNAi小鼠与成骨和软骨前体细胞表达Cre的转基因小鼠(Col2a1-Cre)交配,获取BMP4Col2a1-CRNAi小鼠。分离BMP4Col2a1-CRNAi小鼠原代软骨细胞,提取总RNA,利用半定量RT-PCR检测RNA干扰效率。小鼠基因型鉴定结果表明:成功获得条件性RNAi转基因小鼠;BMP4干扰效率检测结果表明:在软骨细胞中BMP4的干扰效率为81%。以上结果表明,我们成功制备了BMP4CRNAi小鼠和BMP4Col2a1-CRNAi小鼠,BMP4CRNAi小鼠与不同Cre转基因小鼠交配,可以研究BMP4在不同细胞、组织和器官的功能,BMP4Col2a1-CRNAi小鼠的获得为研究BMP4在软骨发育中的作用提供了合适的动物模型。

关键词：骨形成蛋白4 条件性RNA干扰条件性敲低转基因

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γ-干扰素对过氧化氢诱导血管内皮氧化应激损伤的作用研究

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中国危重病急救医学 2009年第9期21卷 540-543页

作者：周荣刘良明胡德耀程凤李强第三军医大学第三附属医院野战外科研究所第二研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察γ-干扰素（IFN-γ）对血管内皮氧化应激损伤的保护作用，并评价26S蛋白酶体在其中的作用。方法建立由过氧化氢（H2O2）诱导的血管内皮氧化应激损伤细胞及离体器官模型，以细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及丙二醛（MDA）浓... 详细信息

目的观察γ-干扰素（IFN-γ）对血管内皮氧化应激损伤的保护作用，并评价26S蛋白酶体在其中的作用。方法建立由过氧化氢（H2O2）诱导的血管内皮氧化应激损伤细胞及离体器官模型，以细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及丙二醛（MDA）浓度评价血管内皮细胞（VEC）的损伤程度，以内皮依赖性血管松弛反应评价离体器官水平VEC的损伤程度。结果H2O2。可呈剂量依赖性和时间依赖性引起VEC损伤，表现为细胞培养上清液中LDH及MDA浓度增加（P〈0．05或P〈0．01），由乙酰胆碱（Ach）诱导的血管内皮依赖性松弛反应明显降低，表现为10^-5mol／LAch引起血管最大舒张反应由（95．82±9．25）％降至（12．61±2．96）％（P〈0．01）；采用20ug／LIFN-γ预孵育VEC48h后可明显降低由H2O2引起的LDH及MDA生成（P均〈0．05），改善内皮依赖性血管松弛反应，由Ach诱导的血管最大舒张反应增至（72．68±18．82）％（P〈0．01）；26S蛋白酶体抑制剂lactacystin可取消由IFN-γ诱导的内皮抗氧化保护作用。结论IFN-γ可诱导血管内皮对氧化应激的保护，其机制与26S蛋白酶体有关。

关键词：血管内皮氧化应激 γ-干扰素

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西罗莫司对创伤小鼠脾脏树突状细胞诱导T淋巴细胞应答能力的影响

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中华烧伤杂志 2010年第2期26卷 90-94页

作者：涂永久范霞杨雪王希魏强梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的了解西罗莫司对创伤小鼠脾脏树突状细胞（DC）诱导异源性T淋巴细胞应答能力的体外调节作用.方法将24只BALB/c小鼠按随机数字表法分为对照组与创伤组,每组12只.将创伤组麻醉后造成失血合并闭合性骨折,对照组仅麻醉不致伤,24 h后分... 详细信息

目的了解西罗莫司对创伤小鼠脾脏树突状细胞（DC）诱导异源性T淋巴细胞应答能力的体外调节作用.方法将24只BALB/c小鼠按随机数字表法分为对照组与创伤组,每组12只.将创伤组麻醉后造成失血合并闭合性骨折,对照组仅麻醉不致伤,24 h后分离2组小鼠脾脏DC.将2组DC分为西罗莫司阴性对照组和创伤组（不用西罗莫司处理）,以及西罗莫司阳性对照组和创伤组（用10μg/L西罗莫司处理6 h）.检测各组DC自噬活性（用荧光强度值表示）及DC介导的混合淋巴细胞反应（MLR）变化（用吸光度值表示）.流式细胞仪检测细胞表面主要组织相容性复合物（MHC）Ⅱ与共刺激分子CD40、CD80、CD86表达.用ELISA法检测LPS刺激后DC中IL-12p40、IL-12p70和IL-10的水平.对数据进行单因素方差分析.结果（1）西罗莫司阴性创伤组小鼠脾脏DC自噬活性（荧光强度值为13±2）及其介导的MLR强度均较西罗莫司阴性对照组（荧光强度值为22±6）明显减弱（F=212.836,P〈0.05）.与西罗莫司阴性对照组和创伤组比较,西罗莫司阳性对照组和创伤组自噬活性（45±8、44±8）均明显增强（F=212.836,P〈0.05或P〈0.01）.西罗莫司阳性创伤组MLR强度较西罗莫司阴性创伤组明显增强（F值分别为101.426、86.533,P值均小于0.05）.（2）西罗莫司阴性创伤组小鼠脾脏DC表面的MHCⅡ[（60±9）%]及CD40[（4±1）%]表达较西罗莫司阴性对照组[（85±6）%、（8±1）%]明显降低（F值分别为37.918、40.426,P值均小于0.05）,西罗莫司阳性创伤组MHCⅡ表达[（78±7）%]较西罗莫司阴性创伤组明显提高（F=37.918,P〈0.05）.（3）两罗莫司阴性创伤组小鼠脾脏DC的IL-12p40、IL-12p70表达水平[（120±13）、（10±3）pg/mL]较西罗莫司阴性对照组[（200±25）、（20±6）pg/mL]明显降低（F值分别为218.646、310.253,P值均小于0.05）;与西罗莫司阴性对照组和创伤组比较,西罗莫司阳性对照组和创伤组IL-12p40[（560±34）、（540±29）pg/mL]、IL-12p70[（55±8）、（60±11）pg/mL]表达水平均明显提高（F值分别为218.646、310.253,P值均小于0.01）,IL-10表达水平降低（F=246.108,P〈0.01）.结论西罗莫司在体外可部分改善创伤小鼠DC功能,并提高其诱导T淋巴细胞的应答能力.

关键词：西罗莫司创伤与损伤树突细胞 T淋巴细胞应答

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模式识别受体Dectin-1与天然免疫反应

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生理科学进展 2005年第2期36卷 133-136页

作者：杨策王正国蒋建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

在免疫反应早期,抗原递呈细胞表达的模式识别受体通过识别内、外源配体在清除衰老宿主细胞、分子以及防御感染中发挥重要作用。新近发现的树突状细胞相关性C型植物血凝素-1(den driticcell associatedC typelectin- 1, Dectin -1)作为... 详细信息

在免疫反应早期,抗原递呈细胞表达的模式识别受体通过识别内、外源配体在清除衰老宿主细胞、分子以及防御感染中发挥重要作用。新近发现的树突状细胞相关性C型植物血凝素-1(den driticcell associatedC typelectin- 1, Dectin -1)作为β- 葡聚糖的主要受体,广泛分布于单核巨噬细胞系统、树突状细胞(dendriticcell,DC)及中性粒细胞等。本文对Dectin- 1分子结构、细胞组织分布及其在诱导、调控局部和全身免疫、炎症反应中的作用进行概述。

关键词： Dectin-1 巨噬细胞树突状细胞葡聚糖信号转导

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烧冲复合伤

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中华烧伤杂志 2008年第5期24卷 384-386页

作者：朱佩芳王正国第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

凡有2种或2种以上不同性质的致伤因素，同时或先后作用于机体而造成的损伤称之为复合伤。烧伤复合冲击波损伤简称为烧冲复合伤，可在不同环境和条件下发生。

关键词：烧冲复合伤机制特点治疗

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三版国际脓毒症诊断标准诊断效能分析

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解放军医学杂志 2016年第4期41卷 295-300页

作者：唐昊刘冬张画羽李阳常明涛张岫竹蒋东坡张连阳第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨中国单个创伤重症医学科(ICU)中创伤后脓毒症患病率和相关危险因素,并评估1992、2001和2012国际脓毒症定义诊断创伤后脓毒症的效力。方法对大坪医院创伤ICU中符合入选标准的所有患者进行为期1d的横断面调查。调查数据包括人口... 详细信息

目的探讨中国单个创伤重症医学科(ICU)中创伤后脓毒症患病率和相关危险因素,并评估1992、2001和2012国际脓毒症定义诊断创伤后脓毒症的效力。方法对大坪医院创伤ICU中符合入选标准的所有患者进行为期1d的横断面调查。调查数据包括人口学资料,临床特征,相关评分(APACHEⅡ、SOFA、GCS、ISS)和致伤机制。按照1992、2001和2012国际脓毒症指南脓毒症诊断标准中所有指标诊断脓毒症,分为A组、B组和C组,同时记录感染部位,感染病原菌,关键医学处置措施,明确感染证据,并追踪28d死亡发生率。选择痰、血液、伤口引流液(腹部、头颅和四肢)病原菌培养阳性作为诊断感染的确定性指标,计算3个版本的诊断灵敏度和特异度,并评估其诊断效能。结果共入选30例创伤患者,符合脓毒症诊断的A组23例,B组22例,C组20例,患病率分别为76.7%、73.3%、66.7%,3个诊断标准之间差异无统计学意义。28d死亡4例,均符合3个版本诊断标准,各组28d死亡发生率分别为17.4%、18.2%、25.0%,差异无统计学意义。A组诊断灵敏度为77.8%,特异度为25.0%;B组诊断灵敏度为82.2%,特异度为41.7%;C组诊断灵敏度为72.2%,特异度为41.7%。3个版本诊断效能之间差异无统计学意义。结论 3个版本的诊断标准对于创伤后脓毒症的诊断效能没有差异,1992年标准相对简单,可能更有利于创伤后脓毒症的诊断。

关键词：创伤和损伤脓毒症患病率诊断

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多层螺旋CT对严重多发伤患者低血容量性休克的预测价值

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解放军医学杂志 2013年第1期38卷 48-53页

作者：李阳张连阳王毅张伟国第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学大坪医院放射科

目的探讨多层螺旋CT(MSCT)对严重多发伤患者低血容量性休克的预测价值。方法回顾分析2008年1月-2011年12月收治的63例严重多发伤患者的临床及CT资料,根据增强CT检查后24h内是否发生休克,将患者分为休克组(34例)和稳定组(29例)。统计两... 详细信息

目的探讨多层螺旋CT(MSCT)对严重多发伤患者低血容量性休克的预测价值。方法回顾分析2008年1月-2011年12月收治的63例严重多发伤患者的临床及CT资料,根据增强CT检查后24h内是否发生休克,将患者分为休克组(34例)和稳定组(29例)。统计两组患者入院时血压、心率、休克指数、损伤严重程度评分(ISS)等,并测量下腔静脉横径(T)与前后径(AP)、腹主动脉直径(D)、腹部脏器增强扫描早期及延迟期CT值,对两组间存在统计学差异的指标进行受试者工作特征(ROC)曲线和logistic回归分析。结果休克组休克指数、ISS评分及4个腹部平面的下腔静脉塌陷指数(T/AP)均显著大于稳定组(P<0.05,P<0.01)。休克组增强早期脾CT值(93±16HU)显著低于稳定组(112±24HU),肾上腺CT值(153±35HU)显著高于稳定组(131±24HU),休克组延迟期肾脏髓质CT值(193±57HU)显著低于稳定组(228±53HU),差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。休克指数,ISS评分,下腔静脉塌陷指数(T/AP),增强早期脾脏CT值、肾上腺CT值及延迟期肾髓质CT值的ROC曲线最佳诊断切点分别为1.19、19.5、3.02、115HU、150HU、184HU。Logistic回归分析显示,ISS评分、下腔静脉塌陷指数(T/AP)、增强早期肾上腺CT值、增强延迟期肾髓质CT值对低血容量性休克的发生具有预测价值(P<0.05)。结论下腔静脉塌陷、增强扫描早期肾上腺增强强化、延迟期肾脏髓质强化减弱等CT征象对预测严重多发伤患者低血容量性休克的发生具有一定价值。

关键词：体层摄影术,螺旋计算机创伤和损伤休克,失血性

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