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中华危重病急救医学 2016年第4期28卷 319-323页

作者：何川侯凤艳王婷杨霞范霞梁华平龚建平重庆医科大学附属第二医院肝胆外科重庆400010 第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察胍丁胺对肝脏库普弗细胞分泌炎性因子的影响，探讨其对严重创伤所致肝损伤的保护作用及其机制。方法将42只雄性BALB／c小鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、模型组、胍丁胺干预组，每组14只。采用双后肢骨折联合眼眶放血3... 详细信息

目的观察胍丁胺对肝脏库普弗细胞分泌炎性因子的影响，探讨其对严重创伤所致肝损伤的保护作用及其机制。方法将42只雄性BALB／c小鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、模型组、胍丁胺干预组，每组14只。采用双后肢骨折联合眼眶放血35％的方法制备小鼠创伤失血模型；Sham组仅麻醉小鼠不进行其他处理。胍丁胺干预组于制模后1h液体复苏时腹腔注射胍丁胺200mg／kg；模型组给予等量生理盐水。各组于制模后12h、24h分别处死7只小鼠取血和肝脏，并分离肝脏库普弗细胞。用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及乳酸脱氢酶（LDH）水平；苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察肝组织病理学变化；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清、肝组织及肝脏库普弗细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-6（IL-6）的含量；用实时荧光定量反转录一聚合酶链反应（RT-qPCR）检测库普弗细胞中TNF-α和IL-6的mRNA表达。结果①Sham组小鼠肝组织结构正常；模型组小鼠翩模后24h可见中性粒细胞浸润，肝细胞肿胀、充血、坏死，且肝功能指标明显异常；而胍丁胺能明显改善上述病理学变化，改善肝功能。②制模后12h3组血清和肝组织TNF—α、IL-6水平均无明显差异，24h模型组较12h时升高，且均显著高于Sham组[血清TNF-α（ng／L）：80．8±4．7比34．7±4．7，IL-6（ng／L）：104．0±9．0比55．4±3．3；肝组织TNF-α（ng／mg）：405．2±19．6比57．2±10．0，IL-6（ng／mg）：58．4±7．7比14．3±2．1，均P〈0.01]；胍丁胺能有效降低创伤小鼠血清和肝组织TNF—α、IL-6水平[血清TNF-α（ng／L）：58．2±3．1比80．8±4．7，IL-6（ng／L）：74．1±6．6比104．0±9．0；肝组织TNF-α（ng／mg）：248．7±22．5比405．2±19．6，IL-6（ng／mg）：22．5±3．1比58．4±7．7，均P〈0．01]。③模型组体外培养库普弗细胞上清液中TNF-α和IL-6水平均较Sham组明显升高，经脂多糖（LPS）诱导培养24h后，二者水平进一步升高；胍丁胺可显著降低TNF-α和IL-6水平[TNF-α（ng／L）：256．6±5．6比465．5±5．2，IL-6（ng／L）：1185．5±64．4比2018．8±53．2，均P〈0．01]，下调TNF—α和IL-6的mRNA表达[TNF-α mRNA（2^-△△Ct）：7．2±0．4比13．5±0．4，IL-6 mRNA（2^-△△Ct）：13．2±0．7比21．3±1．6，均P〈0.01]。结论胍丁胺可通过降低库普弗细胞炎性因子的分泌和表达，从而缓解严重创伤所致的肝损伤，改善肝功能。

关键词：胍丁胺创伤肝脏库普弗细胞炎性因子

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胍丁胺对酵母多糖诱导急性腹膜炎炎症损伤及中性粒细胞浸润的影响

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中华危重病急救医学 2016年第3期28卷 225-229页

作者：邓佳田李星马晓媛范霞侯凤艳梁华平罗艳重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的：观察胍丁胺（AGM）治疗对酵母多糖（ZYM）诱导的小鼠腹膜炎炎症反应及中性粒细胞（PMN）浸润的影响。方法将36只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、模型组、AGM治疗组。采用腹腔注射1mg/mLZYM溶液（0.5mL... 详细信息

目的：观察胍丁胺（AGM）治疗对酵母多糖（ZYM）诱导的小鼠腹膜炎炎症反应及中性粒细胞（PMN）浸润的影响。方法将36只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、模型组、AGM治疗组。采用腹腔注射1mg/mLZYM溶液（0.5mL）制备急性腹膜炎小鼠模型，Sham组腹腔注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）；AGM治疗组同时腹腔注射AGM200mg/kg。各组分别于制模后2h和6h各处死6只小鼠，采集眼眶血及腹腔灌洗液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和腹腔灌洗液中角化细胞来源趋化因子（KC）、巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的含量，用血细胞计数板计数腹腔灌洗液中白细胞总数，流式细胞仪分析腹腔灌洗液PMN数量。结果制模后2h，模型组血清和腹腔灌洗液中KC、MIP-2、TNF-α、IL-6含量均明显高于Sham组；AGM治疗后血清和腹腔灌洗液中上述各指标均较模型组显著降低〔血清KC（ng/L）：990.7±137.9比2053.2±262.7，MIP-2（ng/L）：642.2±124.4比1369.7±146.5，TNF-α（ng/L）：608.6±38.1比1044.7±101.0，IL-6（ng/L）：1058.2±129.1比1443.3±190.1；腹腔灌洗液KC（ng/L）：7462.3±839.6比12723.5±1515.7，MIP-2（ng/L）：1570.8±193.4比3471.4±384.7， TNF-α（ng/L）：1115.8±156.7比1499.2±231.2，IL-6（ng/L）：2646.5±223.2比3126.7±291.4；均P＜0.05〕；与2h比较，模型组、AGM治疗组6h时血清和腹腔灌洗液中KC、MIP-2、TNF-α明显下降，IL-6进一步升高，其中模型组和AGM治疗组血清及腹腔灌洗液中KC、MIP-2均已降至Sham组水平。制模后6h，模型组腹腔炎性细胞总数与PMN计数均显著高于Sham组，AGM治疗可显著减少腹腔中炎性细胞总数与PMN计数〔炎性细胞总数（×109/L）：14.7±1.1比2.0±0.4、10.1±1.2比14.7±1.1，PMN计数（×109/L）：11.37±1.22比0.18±0.05、7.69±0.57比11.37±1.22，均P＜0.05〕。结论 AGM可显著抑制ZYM诱导急性腹膜炎小鼠趋化因子与炎性因子的分泌，并减轻腹腔炎性细胞的浸润，进而减轻腹腔炎症损伤。

关键词：胍丁胺酵母多糖腹膜炎,急性炎性因子趋化因子中性粒细胞

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解剖学评分联合生理学评分对严重创伤患者并发多器官功能障碍综合征的预测价值

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中华烧伤杂志 2016年第2期32卷 105-108页

作者：马晓媛肖雅陈涛蒋东坡周健严军梁华平成都医学院基础医学院 610500 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室遵义医学院附属医院重症医学科

目的评价解剖学评分联合生理学评分对严重创伤患者并发MODS的预测价值.方法 2010年1月-2014年12月,成都医学院第一附属医院、第三军医大学大坪医院、遵义医学院附属医院ICU共收治539例符合入选标准的严重创伤患者,对其临床资料进行回... 详细信息

目的评价解剖学评分联合生理学评分对严重创伤患者并发MODS的预测价值.方法 2010年1月-2014年12月,成都医学院第一附属医院、第三军医大学大坪医院、遵义医学院附属医院ICU共收治539例符合入选标准的严重创伤患者,对其临床资料进行回顾性分析.根据是否并发MODS将患者分为MODS组361例与非MODS组178例,计算并比较2组患者人住ICU首日的损伤严重程度评分（ISS）、新损伤严重程度评分（NISS）、急性生理与慢性健康评估Ⅱ（APACHEⅡ）评分、ISS＋ APACHEⅡ评分和NISS＋ APACHEⅡ评分.对数据行t检验、x2检验,绘制539例患者各评分系统的受试者工作特征（ROC）曲线,并用DeLong-DeLong非参数法检验,分析其对MODS的预测价值. 结果 MODS组患者的ISS、NISS、APACHEⅡ评分、ISS＋ APACHEⅡ评分、NISS＋ APACHEⅡ评分分值分别为（26±8）、（36±12）、（21±7）、（47±10）、（56±14）分,均明显高于非MODS组的（24±6）、（28±7）、（16±5）、（39±8）、（44±9）分（t值为4.970 ～ 12.120,P值均小于0.01）.ISS、NISS、APACHEⅡ评分、ISS＋ APACHEⅡ评分、NISS＋ APACHEⅡ评分在预测严重创伤患者并发MODS时的ROC曲线下总面积（95％置信区间）分别为0.611（0.569～0.653）、0.693（0.652 ～0.731）、0.719（0.679 ～0.756）、0.727 （0.687 ～0.764）、0.764（0.726 ～0.799）. NISS、APACHEⅡ评分、ISS＋APACHEⅡ评分、NISS＋ APACHEⅡ评分的ROC曲线下总面积均明显大于ISS（Z值为3.505～7.179,P值均小于0.001）.APACHEⅡ评分、ISS＋ APACHEⅡ评分的ROC曲线下总面积大于NISS,但差异均无统计学意义（Z值分别为0.931、1.657,P值均大于0.05）;NISS＋ APACHEⅡ评分的ROC曲线下总面积明显大于NISS（Z =5.478,P＜0.001）.ISS＋ APACHEⅡ评分的ROC曲线下总面积大于APACHEⅡ评分,但差异无统计学意义（Z=0.450,P=0.653）;NISS＋ APACHEⅡ评分的ROC曲线下总面积明显大于APACHEⅡ评分（Z=2.554,P＜0.05）.NISS＋ APACHEⅡ评分的ROC曲线下总面积明显大于ISS＋ APACHEⅡ评分（Z=2.989,P＜0.01）. 结论 NISS＋ APACHEⅡ评分较ISS、NISS、APACHEⅡ评分、ISS＋ APACHEⅡ评分对严重创伤患者并发MODS具有更好的预测价值.

关键词：创伤和损伤多器官功能衰竭损伤严重程度评分新损伤严重程度评分急性生理与慢性健康评估Ⅱ

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复合刺激创伤后应激障碍模型大鼠重要脑区的病理变化

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中国实验动物学报 2016年第1期24卷 87-91页

作者：陈旺李陈成李森冯东亮洪有建南伟江龙黄显凯伍亚民第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤外科重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第三研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 兰州大学第二临床医学院骨科兰州730030

目的研究复合刺激创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠重要脑区的病理变化。方法成年SD雌性大鼠20只,随机分为正常组、模型组,每组10只。模型组按复合刺激方法建立PTSD大鼠模型,4周后对两组大鼠行高架十字迷宫和Morris水迷宫检测;行为检测结... 详细信息

目的研究复合刺激创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠重要脑区的病理变化。方法成年SD雌性大鼠20只,随机分为正常组、模型组,每组10只。模型组按复合刺激方法建立PTSD大鼠模型,4周后对两组大鼠行高架十字迷宫和Morris水迷宫检测;行为检测结束后对大鼠大脑皮层和海马CA1、CA2、CA3区和齿状回进行HE染色和Nissl染色,观察其病理变化特点。结果正常组大脑皮层和海马各区细胞形态规则、分布均匀,核仁及边界清晰,胞质尼氏体丰富,无明显神经元变性坏死;模型组大脑皮层细胞形态较规则、分布均匀,无明显病理改变;海马CA1、CA3区细胞形态不规则,排列紊乱,细胞间隙增大,细胞数量减少,有较多空泡样细胞病变,CA3区更为明显;CA2区细胞排列较规则,分布较均匀;齿状回可见部分细胞排列疏松、细胞间隙增大、尼氏体数量减少。结论PTSD模型大鼠海马CA1、CA3区和齿状回均有不同程度的病理改变,为探讨PTSD患者的病理机制提供了实验依据。

关键词：创伤后应激障碍大脑皮层海马病理学大鼠

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白藜芦醇在创伤及脓毒症中的应用研究进展

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中华实验外科杂志 2016年第8期33卷 2063-2066页

作者：李香琴范霞梁华平成都医学院基础医学院 610500 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

白藜芦醇是一种天然抗毒素，广泛存在于葡萄、花生、坚果等食物中，具有抗炎、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性。近年来大量研究结果显示白藜芦醇对创伤及脓毒症诱发的损伤展现出良好的疗效。本文主要针对白藜芦醇在创... 详细信息

白藜芦醇是一种天然抗毒素，广泛存在于葡萄、花生、坚果等食物中，具有抗炎、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性。近年来大量研究结果显示白藜芦醇对创伤及脓毒症诱发的损伤展现出良好的疗效。本文主要针对白藜芦醇在创伤一失血性休克、创伤性脑损伤、脊髓损伤、缺血再灌注损伤及脓毒症损伤中的保护作用及其作用机制进行概述。

关键词：白藜芦醇创伤脓毒症保护作用机制

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常见危重病患者人群并发创伤后应激障碍研究进展

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现代预防医学 2016年第21期43卷 3928-3931+3939页

作者：王永堂位景香鲁秀敏第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆理工大学药学与生物工程学院

既往对创伤后应激障碍(Posttraumatic Stress Disorder,PTSD)的研究主要集中于战争、自然灾害和人为灾害相关的创伤事件。近年来,人们逐渐开始认识到危及生命的疾病同样可视为导致PTSD的应激源。一些危重病并发PTSD不仅不利于患者危重... 详细信息

既往对创伤后应激障碍(Posttraumatic Stress Disorder,PTSD)的研究主要集中于战争、自然灾害和人为灾害相关的创伤事件。近年来,人们逐渐开始认识到危及生命的疾病同样可视为导致PTSD的应激源。一些危重病并发PTSD不仅不利于患者危重病自身的治疗,还严重影响其生存质量。为尽可能降低危重病并发PTSD的可能性,提高危重病患者的生存质量,本文就一些常见危重病诱发PTSD进行初步探讨,以期对危重病患者并发PTSD进行早期预警及早期干预。

关键词：创伤后应激障碍危重疾病创伤性事件研究进展

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Wnt／β-连环蛋白信号通路在皮质骨和松质骨表达的差异

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中华实验外科杂志 2016年第7期33卷 1707-1710页

作者：李俊峰陈思旭鲍全伟刘华渝李昂秦昊赵玉峰沈岳钟孝政宗兆文第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤科创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 解放军第180医院(泉州海峡医院)骨科泉州362008

目的探讨皮质骨和松质骨Wnt／β-连环蛋白（B—catenin）信号通路及相关分子表达的差异。方法通过小鼠在体和离体实验，观察皮质骨和松质骨Wnt／β-catenin通路及相关因子B—catenin、核心结合蛋白因子2（Runx2）、成骨相关转录因子抗体... 详细信息

目的探讨皮质骨和松质骨Wnt／β-连环蛋白（B—catenin）信号通路及相关分子表达的差异。方法通过小鼠在体和离体实验，观察皮质骨和松质骨Wnt／β-catenin通路及相关因子B—catenin、核心结合蛋白因子2（Runx2）、成骨相关转录因子抗体（Osterix）等表达水平的差异。结果免疫组织化学结果显示小鼠皮质骨B—catenin、Runx2、Osterix阳性表达量均明显低于松质骨l（20．30±1．21）％比（25．80±1．10）％、（10．20±3．05）％比（19．51±2．03）％、（13．90±2．06）％比（23．74±3．33）％，P〈0．05]。细胞免疫荧光和实时定量聚合酶链反应（Real—time PCR）的结果与免疫组织化学结果一致。结论皮质骨的Wnt／β-catenin信号通路及相关分子表达明显低于松质骨。

关键词：皮质骨松质骨 Wnt/β-连环蛋白信号通路

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改良盲肠结扎穿孔术模型对生存率的影响

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中华实验外科杂志 2016年第11期33卷 2597-2598页

作者：唐玉彬井丽君苏楠杜晓兰陈林兰州军区兰州总医院急诊科 730050 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢修复中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的对原有盲肠结扎穿孔术（CLP）模型进行改良,使其操作更简便,重复性和一致性更好.方法用小鼠盲肠分支血管位置作为盲肠结扎位置的标准,将CLP模型分为轻、中、重3组,对比观察不同严重程度组别小鼠生存率.增加液体复苏和广谱抗生素... 详细信息

目的对原有盲肠结扎穿孔术（CLP）模型进行改良,使其操作更简便,重复性和一致性更好.方法用小鼠盲肠分支血管位置作为盲肠结扎位置的标准,将CLP模型分为轻、中、重3组,对比观察不同严重程度组别小鼠生存率.增加液体复苏和广谱抗生素处理因素,观察对重度CLP模型生存率影响.结果对照组和轻度组72 h生存率为100％,中度组72 h生存率为70％,重度组40h生存率为0.复苏组和抗生素组的全部死亡时间分别为44h和46h,与重度CLP组比较差异无统计学意义（P＜0.05）.结论该方法改良CLP模型,可获得不同严重程度表现,操作简便,可重复性和一致性好.液体复苏和广谱抗生素不能明显改变重度CLP模型小鼠生存率.

关键词：盲肠结扎穿孔术改良生存率

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吴茱萸碱对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用

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第三军医大学学报 2016年第21期38卷 2309-2314页

作者：张莹范霞杨雪梁华平罗艳重庆医科大学附属第一医院检验科重庆400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探究吴茱萸碱（evodiamine,EVO）对酵母多糖（zymosan）诱导的急性肺损伤的保护效应及其作用机制。方法 24只6-8周龄雄性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为正常对照组、EVO对照组、模型组、EVO治疗组,每组6只。各组分别于处理作用12 ... 详细信息

目的探究吴茱萸碱（evodiamine,EVO）对酵母多糖（zymosan）诱导的急性肺损伤的保护效应及其作用机制。方法 24只6-8周龄雄性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为正常对照组、EVO对照组、模型组、EVO治疗组,每组6只。各组分别于处理作用12 h后处死小鼠,收集眼眶血及肺组织。酶联免疫吸附法（ELISA）检测血液及肺组织中白介素-6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平及肺组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性及核转录因子NF-κB p65的DNA结合活性,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况,HE染色观察肺组织病理改变并测量肺湿干质量比。结果酵母多糖作用12 h后,小鼠出现精神萎靡、活动减少等症状。EVO治疗组小鼠状态有所好转。EVO可明显改善酵母多糖所致的肺泡壁毛细血管扩张充血及炎性细胞浸润,降低肺湿干质量比,并显著下调酵母多糖刺激下血清和肺脏中IL-6和TNF-α的含量（P〈0.01）,同时抑制肺组织中MPO含量以及NF-κB p65的DNA结合活性（P〈0.01）。结论 EVO可缓解酵母多糖诱导的急性肺损伤。该作用可能是通过抑制NF-κB的活性以减少炎症介质释放实现。

关键词：吴茱萸碱脓毒症急性肺损伤酵母多糖

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活性氧与细胞核共染影响因素的实验研究

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第三军医大学学报 2016年第6期38卷 539-544页

作者：罗莉侯凤艳严军梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 温州医科大学附属第一医院急诊科浙江温州325035

目的利用二氯荧光黄二乙酸酯(2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针和4',6'-二脒基-2-苯基吲哚(4',6'-diamidino-2-phenylindole,DAPI)探讨影响活性氧(reactive oxidative species,ROS)和细胞核共染的因素,以优化最佳的研究方案。方法以RAW 264.7细胞株为研究对象,首先采用不同浓度的多聚甲醛分别固定10、30 min,1、2、4 h,进行ROS和DAPI检测;再用不同的固定试剂分别在ROS检测前和后固定,检测ROS荧光强弱;将DAPI在DCFH-DA探针加入前12、4、2、1 h,20 min加入和两者同时加入,检测DAPI染色情况;最后,DAPI在ROS检测前12 h加入,以不加DAPI组为对照,分别用LPS和H_2O_2刺激产生ROS并检测,计算其荧光数和平均荧光强度,利用SPSS18.0软件进行t检验分析。结果不同固定浓度、固定试剂、固定顺序的结果均表明,固定虽然会增强DAPI的染色,但同时会减弱ROS的荧光强度;活细胞DAPI染色时,随着染色时间的延长,核着色强度和均匀度都更好;DAPI染色12 h后检测ROS,对ROS的荧光数和平均荧光强度都没有统计学影响(P>0.05)。结论 DCFH-DA探针法检测ROS荧光时不能与细胞固定连用;DAPI在DCFH-DA探针孵育前12 h加入,并不影响ROS荧光的产生和检测,该研究方案可有效实现ROS与DAPI的共染。

关键词：活性氧细胞核共染影响因素

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