检索结果-内蒙古大学图书馆

陆军军医大学学报 2025年第9期47卷 912-921页

作者：徐铭琦史祥睿刘威段浩魏静邓炎江悦高英英李海波佳木斯大学临床医学院黑龙江佳木斯陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆重庆大学药学院重庆陆军军医大学(第三军医大学)全军免疫学研究所重庆重庆医科大学附属巴南医院检验科重庆

目的探究新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白1(penicillinbinding protein 1, PBP1)的相互作用。方法以MRSA252基因组DNA为模板,PBP1F/R为上下游引物,以Nde I/Xho I为酶切位点构建表达质粒pET30a-pbp1-39-608。将质... 详细信息

目的探究新型抗菌化合物HL-J6与金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白1(penicillinbinding protein 1, PBP1)的相互作用。方法以MRSA252基因组DNA为模板,PBP1F/R为上下游引物,以Nde I/Xho I为酶切位点构建表达质粒pET30a-pbp1-39-608。将质粒转入大肠杆菌中进行表达并通过亲和层析纯化获得PBP1-39-608蛋白;利用肽聚糖侧链主干肽的硫酯类似物S2d作为底物,测定HL-J6对PBP1-39-608转肽酶活性的抑制作用;用微量热泳动技术(microscale thermophoresis,MST)检测HL-J6与PBP1-39-608的亲和力,并通过细胞热转移实验(cell thermal shift assay,CETSA)确证结合作用;分别利用AutoDock Vina和Desmond软件进行分子对接和动力学模拟,明确HL-J6与PBP1-39-608蛋白的结合模式和关键氨基酸残基。结果成功构建pET30a-pbp1-39-608重组质粒,诱导表达后,经纯化获得相对分子质量约为65×103的PBP1-39-608蛋白;HL-J6可呈时间依赖性抑制PBP1-39-608的转肽酶活性(P<0.001);HL-J6与PBP1-39-608的结合解离常数Kd约为64.92μmol/L;分子对接结果显示HL-J6通过与ILE-348、ASN-370、THR-516、PHE-423等主要氨基酸残基相互作用结合在PBP1-39-608的活性口袋,结合评分为-8.38 kcal/mol(<-5.00 kcal/mol);动力学模拟结果显示二者结合后50 ns趋于稳定。结论 HL-J6可显著抑制金黄色葡萄球菌PBP1的转肽酶活性,并与其存在稳定的相互作用。

关键词：金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白 HL-J6 重组蛋白:相互作用

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TLR2/TLR9激动剂对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用

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陆军军医大学学报 2024年第8期46卷 829-836页

作者：程浩杨赟孙红武邓炎李郭成曹静文魏静迟宇李海波陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 佳木斯大学临床医学院黑龙江佳木斯154007

目的评价toll-like receptor(TLR)2/TLR9激动剂对肺部感染鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)小鼠的保护作用。方法将6~8周龄雌性C57小鼠分为PBS组、Pam_(2)CSK_(4)(Pam)组、CpG ODN(CpG)组和Pam+CpG组,以不同剂量滴鼻免疫后24 h进行Ab肺部致死性感染,观察小鼠生存率。构建亚致死剂量Ab肺部感染模型,测定感染后小鼠血液、肺脏、肝脏、肾脏和脾脏的细菌定植量,并取小鼠肺脏和肾脏进行HE染色,分析病理损伤程度。探索免疫1、3、7 d后对小鼠Ab感染的保护作用,明确保护时间窗。Pam+CpG体外刺激A549上皮细胞和RAW264.7细胞,考察两种细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。结果与PBS组比较,Pam+CpG组能显著提高Ab致死感染小鼠的生存率(P<0.05,P<0.01),降低亚致死感染后小鼠血液(P<0.01)、肺脏(P<0.01)、肝脏(P<0.05)、肾脏(P<0.01)和脾脏(P<0.01)的细菌定植量,减轻感染导致的病理损伤;在感染之前1 d或3 d免疫均可显著提高小鼠的生存率(P<0.05),其中免疫后3 d保护效果最好。与PBS、Pam、CpG组比较,Pam+CpG组可以显著促进A549上皮细胞和R AW264.7细胞对Ab的杀伤或吞噬作用(P<0.01)。结论TLR2/TLR9激动剂合用对Ab致死和亚致死感染均具有显著的保护作用,可能的机制是其促进了肺上皮细胞和巨噬细胞对Ab的杀伤或吞噬作用。

关键词：鲍曼不动杆菌 TLR2 TLR9 滴鼻免疫肺部感染

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幽门螺杆菌感染对胃黏膜上皮细胞REDD1表达的影响及调控机制

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陆军军医大学学报 2022年第5期44卷 413-420页

作者：闫宗宝毛方圆单治国赵永亮庄园陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院普通外科重庆2400038 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400038

目的探讨DNA损伤应答蛋白1(regulated in development and DNA damage responses-1,REDD1)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)感染中的表达及调控机制。方法建立***感染C57小鼠及胃上皮细胞模型,运用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和Western blot检测REDD1 mRNA和蛋白的表达;并在细胞模型中采用信号通路抑制剂的方法探讨***感染诱导REDD1上调的机制。结果相对于未感染组,***感染小鼠胃黏膜中的REDD1水平显著增高;而相对于野生型(Wild Type,WT)全毒株,敲除cagA基因后,***感染诱导REDD1上调的能力则显著下降(P<0.05);***感染可诱导胃上皮细胞AGS REDD1表达上调,并具有时间、感染菌量以及cagA依赖性(P<0.05);P38/MAPK信号通路阻断可显著抑制***感染诱导的REDD1上调表达(P<0.05)。结论***依赖磷酸化的cagA蛋白激活MAPKp38通路诱导REDD1表达增高。

关键词：幽门螺杆菌 DNA损伤应答蛋白1 MAPK P38

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细菌蛋白糖基化修饰的生物学功能及应用研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第4期42卷 323-329页

作者：李骁闫晶敏毛旭虎陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系临床微生物与免疫学教研室重庆400038

细菌在维持人体健康和诱导疾病的发展中扮演着重要角色,其生物学功能常与蛋白质表面附着的聚糖有关。近年来,细菌蛋白的糖基化修饰受到越来越广泛的关注。随着合成生物学的不断发展,以及人们对蛋白糖基化修饰系统的深入研究,部分蛋白糖... 详细信息

细菌在维持人体健康和诱导疾病的发展中扮演着重要角色,其生物学功能常与蛋白质表面附着的聚糖有关。近年来,细菌蛋白的糖基化修饰受到越来越广泛的关注。随着合成生物学的不断发展,以及人们对蛋白糖基化修饰系统的深入研究,部分蛋白糖基化修饰系统已经应用于工程菌中,独立发挥蛋白质修饰作用,使得"定制糖蛋白"成为可能。本文就细菌蛋白糖基化修饰过程中的基本组成要素、糖基化修饰类型、途径及其糖基化修饰的生物学功能和应用等方面的研究进展进行了综述。

关键词：细菌蛋白糖基化修饰生物学功能结合疫苗

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荧光标记类鼻疽菌的构建及其与宿主细胞相互作用的应用研究

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陆军军医大学学报 2022年第20期44卷 2105-2112页

作者：陈建高饶承龙刘文正吴潘王旭冉南栋琪杨文波毛旭虎陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系临床微生物与免疫学教研室重庆400038

目的构建类鼻疽菌(Burkholderia pseudomallei,***)的荧光示踪载体,获得自发荧光的类鼻疽菌株,并对其与宿主相互作用的感染过程进行初步应用研究。方法采用基因重组技术,将绿色、红色和蓝色荧光蛋白(green/red/blue fluorescent protein... 详细信息

目的构建类鼻疽菌(Burkholderia pseudomallei,***)的荧光示踪载体,获得自发荧光的类鼻疽菌株,并对其与宿主相互作用的感染过程进行初步应用研究。方法采用基因重组技术,将绿色、红色和蓝色荧光蛋白(green/red/blue fluorescent protein,GFP/RFP/BFP)基因分别重组到原核表达载体pUCP28T上,构建类鼻疽菌组成型荧光表达载体,并通过体外细菌培养观察外源性荧光蛋白的表达对细菌生长能力的影响,以及荧光标记细菌遗传稳定性的检测。通过炎症因子IL-8的检测评价荧光标记细菌对宿主细胞感染能力的变化。利用活细胞工作站观察类鼻疽菌被宿主细胞自噬体包裹的动态过程。结果构建了三种荧光标记的类鼻疽菌示踪载体,并且能在体外传代20代内稳定表达,且外源性荧光蛋白的表达不影响类鼻疽菌的生长和对宿主细胞的感染。同时,利用高分辨率活细胞成像系统观察到红色荧光标记的类鼻疽菌与宿主细胞GFP-LC3共定位的动态变化过程。结论本文成功构建了三种荧光标记的类鼻疽菌,以期为类鼻疽菌致病机制的研究、抗菌药物的筛选提供重要实用工具。

关键词：类鼻疽菌基因重组荧光标记自噬

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不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果研究

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陆军军医大学学报 2023年第9期45卷 957-963页

作者：张珊珊李郭成冯壤薛若怡段浩曹宇刘婧怡李海波高英英佳木斯大学临床医学院黑龙江佳木斯154007 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的比较不同免疫方式、不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果。方法构建重组质粒,经诱导表达纯化获得重组PKF,分别联合氢氧化铝、AS03肌注(intramuscular,im)免疫以及LTK63、LP1-34滴鼻(intranasally,in)免疫小鼠,共分为7组:PBS组... 详细信息

目的比较不同免疫方式、不同佐剂对重组鲍曼不动杆菌PKF的免疫效果。方法构建重组质粒,经诱导表达纯化获得重组PKF,分别联合氢氧化铝、AS03肌注(intramuscular,im)免疫以及LTK63、LP1-34滴鼻(intranasally,in)免疫小鼠,共分为7组:PBS组;肌注免疫组:PKF(im)组、PKF+Al(im)组、PKF+AS03(im)组;滴鼻免疫组:PKF(in)组、PKF+LTK63(in)组、PKF+LP1-34(in)组。ELISA检测免疫后小鼠血清中特异性IgG以及黏膜部位sIgA的水平;构建鲍曼不动杆菌肺部感染亚致死模型,测定攻毒后小鼠血液和肺部细菌定植量,评价疫苗保护作用。结果肌注免疫组中,AS03辅助PKF诱导最高的特异性IgG抗体水平(P<0.01);滴鼻免疫组中,LTK63显著提升肺泡灌洗液中特异性sIgA水平(P<0.01);攻毒后细菌定植量检测结果显示,PKF+AS03肌注组细菌定植量与单用PKF组相当,而滴鼻组中LTK63可以显著降低细菌定植量(P<0.01)。结论LTK63可以辅助PKF更好地发挥对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用,表明疫苗介导的黏膜免疫应答对保护感染可能更加重要。

关键词：鲍曼不动杆菌佐剂 PKF 免疫效果

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新型冠状病毒疫苗佐剂的研究现状与展望

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陆军军医大学学报 2022年第23期44卷 2353-2359页

作者：李海波程浩陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

疫苗是预防新冠病毒感染最经济和最有效的手段。佐剂能增强抗原特异性免疫应答,减少抗原剂量和接种次数,重塑适应性免疫反应,对提高新冠病毒疫苗的保护效果至关重要。本文评述了已经授权紧急使用或正在开展临床试验的新冠病毒疫苗所用... 详细信息

疫苗是预防新冠病毒感染最经济和最有效的手段。佐剂能增强抗原特异性免疫应答,减少抗原剂量和接种次数,重塑适应性免疫反应,对提高新冠病毒疫苗的保护效果至关重要。本文评述了已经授权紧急使用或正在开展临床试验的新冠病毒疫苗所用佐剂及其作用机制和优缺点,分析了新冠病毒疫苗研发中应用佐剂须考虑的问题,并对新冠病毒疫苗佐剂的未来研究方向进行了展望:(1)针对免疫功能不全人群的佐剂;(2)增强T细胞应答的佐剂;(3)新型黏膜免疫佐剂;(4)复合佐剂的合理设计。

关键词：新冠病毒疫苗佐剂研究现状展望

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牛磺熊去氧胆酸通过抑制内质网应激诱导的凋亡促进类鼻疽菌的清除

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陆军军医大学学报 2024年第3期46卷 225-231页

作者：赵光强南栋琪袁思琪饶承龙邢贞泉王彬方瑶毛旭虎李倩三亚市人民医院(四川大学华西三亚医院)呼吸内科海南三亚572022 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系临床微生物与免疫学教研室重庆400038 解放军中部战区总医院呼吸与危重症医学科武汉430070 陆军军医大学(第三军医大学)创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400038

目的拟通过类鼻疽菌感染RAW264.7巨噬细胞模型,探讨牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)促进类鼻疽菌胞内清除的作用机制。方法类鼻疽菌感染RAW264.7细胞后8 h,设置未感染组和类鼻疽菌感染组,在不同浓度TUDCA处理条件下... 详细信息

目的拟通过类鼻疽菌感染RAW264.7巨噬细胞模型,探讨牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)促进类鼻疽菌胞内清除的作用机制。方法类鼻疽菌感染RAW264.7细胞后8 h,设置未感染组和类鼻疽菌感染组,在不同浓度TUDCA处理条件下,采用流式细胞仪检测类鼻疽菌诱导细胞凋亡的情况;同时使用另外一种内质网应激抑制剂4-PBA,通过Annexin-V/PI双染法和MTT细胞增殖实验分别检测类鼻疽菌感染对宿主细胞凋亡和增殖的影响;进一步使用siRNA干扰内质网应激关键基因CHOP,设置siC对照组和siCHOP干扰组,通过Western blot和流式细胞仪检测类鼻疽菌感染后Caspase-3、Caspase-12等细胞凋亡相关蛋白的表达水平及细胞凋亡情况;通过细菌胞内生存实验分析TUDCA通过抑制内质网应激减少其诱导的细胞凋亡、增强巨噬细胞对类鼻疽菌胞内清除作用的机制。结果在不同浓度TUDCA处理下,100μmol/L或200μmol/L TUDCA可明显减少类鼻疽菌感染诱导的RAW264.7细胞凋亡数量(P<0.05)。分别使用两种内质网应激抑制剂TUDCA和4-PBA均可降低类鼻疽菌感染诱导的细胞凋亡(P<0.05)。在siC对照组,相较于未感染时类鼻疽菌感染后Caspase-3和Caspase-12表达明显增加。在siCHOP干扰组,细胞凋亡相关蛋白的表达显著低于siC对照组,TUDCA处理后细胞凋亡相关蛋白表达水平与未加TUDCA药物相比无明显差异。流式细胞仪检测结果也显示,TUDCA能够减少类鼻疽菌感染后诱导的细胞凋亡(P<0.05),但在siCHOP干扰组中,TUDCA对类鼻疽菌感染诱导的凋亡无明显改变。细菌胞内生存计数结果显示,在siC对照组加入TUDCA能够增加宿主细胞对类鼻疽菌的清除(P<0.05),而在siCHOP干扰组中TUDCA的处理对类鼻疽菌胞内增殖无明显影响。结论在类鼻疽菌感染RAW264.7细胞模型中,TUDCA能够通过抑制巨噬细胞内质网应激诱导的凋亡,促进巨噬细胞对类鼻疽菌的胞内清除。

关键词：类鼻疽菌牛磺熊去氧胆酸内质网应激细胞凋亡

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以新型脂肽为佐剂的LP-LNP构建及其对mRNA疫苗的增效作用

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陆军军医大学学报 2024年第17期46卷 1925-1933页

作者：曹静文迟宇李郭成程浩邓炎魏静朱吉高英英李海波佳木斯大学临床医学院黑龙江佳木斯154007 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 重庆医科大学附属巴南医院检验科重庆401320

目的构建以新型脂肽为佐剂的递送系统脂肽-脂质纳米颗粒(lipopeptide-lipid nanoparticle,LP-LNP),初步探究其对mRNA疫苗的增效作用。方法设计并合成2种新型脂肽SS-10和SQ18,微流控技术将编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluores... 详细信息

目的构建以新型脂肽为佐剂的递送系统脂肽-脂质纳米颗粒(lipopeptide-lipid nanoparticle,LP-LNP),初步探究其对mRNA疫苗的增效作用。方法设计并合成2种新型脂肽SS-10和SQ18,微流控技术将编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)、萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,F-luc)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)的mRNA包载到LP-LNP中,构建以新型脂肽为佐剂的mRNA递送系统;利用动态光散射法表征LP-LNP的粒径、多分散系数;利用HEK-Blue TM mTLR2报告细胞检测其Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)的激活作用,筛选最优脂肽掺入比;将优选的LP-LNP-eGFP-mRNA转染至HEK293T细胞,荧光显微镜观察eGFP的表达;利用活体成像技术考察LP-LNP-F-luc-mRNA在小鼠体内的表达水平;流式细胞术评价LP-LNP-OVA-mRNA免疫小鼠后诱导引流淋巴结中树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟水平以及交叉递呈抗原的能力。结果脂肽SQ18和SS-10分别以0.50%、0.75%的摩尔比掺入后,得到的LP-LNP平均粒径分别为127和121 nm,平均多分散系数分别为0.11和0.08,包封率均在90%以上,且体外安全性好;该配方条件下激活TLR2的能力显著强于阳性对照Pam 2 CSK 4(P<0.01);优选的LP-LNP均可以实现有效的体外转染,其中SQ18以0.50%掺入制备的LP-LNP体内转染效果显著优于传统LNP(P<0.01),且可以显著促进引流淋巴结DCs的成熟以及抗原的交叉递呈(P<0.05)。结论以新型脂肽为佐剂的LP-LNP可以增强mRNA的递送能力,进一步提高mRNA疫苗的免疫效果。

关键词：脂质纳米颗粒 mRNA疫苗佐剂脂肽

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大黄素抑制MRSA生物膜活性及其作用机制研究

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陆军军医大学学报 2022年第7期44卷 684-690页

作者：刘婧怡蔡仑段浩刘畅李海波刘明陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系分析化学教研室重庆400038 佳木斯大学临床医学院黑龙江佳木斯154007

目的探究大黄素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜作用及其机制。方法微量肉汤稀释法测定大黄素对MRSA标准株及5种不同地区临床分离株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentrat... 详细信息

目的探究大黄素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜作用及其机制。方法微量肉汤稀释法测定大黄素对MRSA标准株及5种不同地区临床分离株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),绘制抑菌曲线评估其动态抑菌效果;结晶紫染色测定大黄素抑制MRSA生物膜的作用,扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察其对MRSA生物膜形态的影响;荧光定量PCR检测ica操纵子基因的表达。结果大黄素对不同MRSA菌株的MIC为2~8μg/mL,MBC为4~16μg/mL;大黄素可显著抑制MRSA生物膜的形成,并呈剂量依赖关系;大黄素对生物膜结构具有破坏作用,且显著增加了生物膜内死细菌的比例;荧光定量PCR结果提示大黄素显著下调了ica操纵子基因的表达。结论大黄素具有抑制MRSA生物膜的作用,并可能通过下调ica操纵子基因的表达抑制细菌生物膜的形成。

关键词：大黄素耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜 ica

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