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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：魏超重庆市第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心 400038

佐剂的发展已经有了近80年的时间，但是在目前上市的疫苗佐剂中，其中以铝盐佐剂为代表的载药系统最为常见，但是该类佐剂并不能有效的针对胞内寄生的细菌病毒产生强有力的细胞免疫应答。目前佐剂发展一种重要方向是实现载药系统的新型... 详细信息

佐剂的发展已经有了近80年的时间，但是在目前上市的疫苗佐剂中，其中以铝盐佐剂为代表的载药系统最为常见，但是该类佐剂并不能有效的针对胞内寄生的细菌病毒产生强有力的细胞免疫应答。目前佐剂发展一种重要方向是实现载药系统的新型化，能够有效的被DC细胞吞噬并且增强抗原呈递过程，有文献报道，金黄色葡萄球菌既可以胞外寄生，并且能够胞内寄生，阻碍巨噬细胞的自噬作用，本论文以金黄色葡萄球菌的全身感染模型为实验模型，在自行研制新型佐剂基础上，结合MPLA免疫增强剂，通过包裹等多种形式来探索最有效增强免疫应答的结合方式，同时通过血清学以及细胞学等实验，我们得到如下结果：在结合免疫增强剂MPLA的基础上，采用包裹抗原成分能够更有效的引起机体产生功能性抗体，同时能够诱导CD4+T细胞向Th1/Th17方向分化，并且有效的提高细菌清除率与动物生存率，达到有效清除金黄色葡萄球菌感染的目的。

关键词：金黄色葡萄球菌免疫刺激剂乳剂DC细胞

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MPLA及LTs63k联合辅佐SpaP的免疫保护研究

MPLA及LTs63k联合辅佐SpaP的免疫保护研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：刘开云张卫军付强杜方川徐丽敏中国人民解放军第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室国家免疫制品技术工程研究中心

背景:单磷酸脂质A(MPLA)来自沙门菌Re595脂质A,LTs63k是大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体,它们在保留了强有力的黏膜刺激的同时且降低了毒性。Spa P是变异链球菌的外膜蛋白,对龋齿的免疫保护效果已被广泛研究。目前还未有通过MPLA和LTs63... 详细信息

背景:单磷酸脂质A(MPLA)来自沙门菌Re595脂质A,LTs63k是大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体,它们在保留了强有力的黏膜刺激的同时且降低了毒性。Spa P是变异链球菌的外膜蛋白,对龋齿的免疫保护效果已被广泛研究。目前还未有通过MPLA和LTs63k联合辅助Spa P抗原来增强龋齿免疫保护效果的文献报道。目的 :本研究用MPLA与LTs63k佐剂联合辅佐Spa P抗原来验证唾液Ig A抗体应答水平增高及对变异链球菌感染的免疫保护效果。方法 :选取SPF级SD大鼠为研究对象,共分为5组,每组20只,MPLA 10μg/只、LTs63k 20μg/只、Spa P 50μg/只。按0、7d、14d免疫程序进行滴鼻免疫,末次免疫后第7天检测唾液Ig A及血清Ig G水平,末次免疫后第14天用109cfu变异链球菌菌液进行连续3天的感染攻毒,一天2次。末次感染后10天、20天检测感染定植。使用t检验分析组间抗体应答水平及感染率,使用卡方检验比较组间差异。结果 :唾液Ig A抗体应答水平MPLA+LT+Spa P组显著高于LT+Spa P组、MPLA+Spa P组、Spa P组、对照组(P<0.05),MPLA+Spa P组、LT+Spa P组显著高于Spa P组(P<0.05),而Spa P组与对照组无统计学差异(P>0.05)。保护率:MPLA+LT+Spa P组、LT+Spa P组、MPLA+Spa P组、Spa P组、对照组(70%、40%、30%、0%、0%),且MPLA+LT+Spa P组与其它组间统计学有显著差异(P<0.05)。结论 :MPLA联合LTs63k辅助Spa P抗原不仅能显著促进唾液Ig A抗体应答,同时提高了免疫保护效果。这使MPLA佐剂联合LTs63k佐剂来辅助抗原以增强免疫保护效果成为了可能。

关键词： MPLA LTs63k SpaP 变异链球菌

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MPLA及LTs63k联合辅佐SpaP的免疫保护研究

MPLA及LTs63k联合辅佐SpaP的免疫保护研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：刘开云张卫军付强杜方川徐丽敏中国人民解放军第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室国家免疫制品技术工程研究中心

背景：单磷酸脂质A (MPLA)来自沙门菌Re595脂质A,LTs63k是大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体,它们在保留了强有力的黏膜刺激的同时且降低了毒性.SpaP是变异链球菌的外膜蛋白,对龋齿的免疫保护效果已被广泛研究.目前还未有通过MPLA和LTs63... 详细信息

背景：单磷酸脂质A (MPLA)来自沙门菌Re595脂质A,LTs63k是大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体,它们在保留了强有力的黏膜刺激的同时且降低了毒性.SpaP是变异链球菌的外膜蛋白,对龋齿的免疫保护效果已被广泛研究.目前还未有通过MPLA和LTs63k联合辅助SpaP抗原来增强龋齿免疫保护效果的文献报道.

关键词： MPLA LTs63k SpaP 变异链球菌

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以科研优势带动研究型教学的《生物技术制药》教学改革

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西南师范大学学报（自然科学版） 2014年第8期39卷 155-157页

作者：赵卓郭刚吴超曾浩邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室重庆400038

当前,我国的生物技术制药领域具有自主创新能力的复合型专业人才紧缺,高等教育要以市场需求为导向培养研究型学生.传统教学形式已不能满足研究型人才的培养需求,笔者所在单位借助国家免疫生物制品工程技术研究中心的科研平台,在《生物... 详细信息

当前,我国的生物技术制药领域具有自主创新能力的复合型专业人才紧缺,高等教育要以市场需求为导向培养研究型学生.传统教学形式已不能满足研究型人才的培养需求,笔者所在单位借助国家免疫生物制品工程技术研究中心的科研平台,在《生物技术制药》课程实施教学及考核两大环节的教学改革,获得了一些教学心得,力争能开辟出一条适合现代生物技术制药课程的研究型教学改革之路.

关键词：生物技术制药研究型教学

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幽门螺杆菌黏附素A的原核表达、纯化及其结晶条件搜索

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 325-329页

作者：赵祥徐欢张欣熊昌辉马贤纵安家昆章金勇第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室重庆400038 第三军医大学学员旅15队重庆400038

目的原核表达、纯化幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，***）黏附素A（麒pyloriadhesinA，HpaA），并初步搜索其结晶条件。方法采用TMHMM和SignalP．4．1软件预测HpaA蛋白中的跨膜序列和信号肽序列，根据GenBank中登录的编码HpaA的基因序... 详细信息

目的原核表达、纯化幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，***）黏附素A（麒pyloriadhesinA，HpaA），并初步搜索其结晶条件。方法采用TMHMM和SignalP．4．1软件预测HpaA蛋白中的跨膜序列和信号肽序列，根据GenBank中登录的编码HpaA的基因序列hp0797去掉预测出的信号肽序列后设计引物，以***标准株26695基因组为模板，PCR扩增编码HpaA的基因序列，插入原核表达载体pET-22b，构建重组表达质粒pET-22b-HpaA，转化大肠埃希菌（Ecoil）BL21（DE3），IPTG25℃诱导表达，表达的重组蛋白经亲和层析、阴离子交换层析和分子筛层析进行纯化。将纯化产物浓缩至10mg／ml，采用结晶搜索试剂盒，通过悬滴汽相扩散法搜索HpaA的结晶条件，并在此基础上配制条件进行优化。结果去掉序列中编码信号肽区域或跨膜结构域的密码子，选择HpaA的36-260位氨基酸进行克隆，构建的重组原核表达质粒pET．22b-HpaA经双酶切及测序鉴定，证明构建正确；表达的重组蛋白HpaA相对分子质量约27000，表达量约占菌体总蛋白的10％以上，主要以可溶形式表达，纯化后的纯度可达99％以上。在多种条件下，均有结晶生长，晶体多为薄片状、针状或簇状，在20％PEG3350，0．1mol／LHEPES（pH7．0）条件下，晶体形状类似长方体，外形有所改善。结论成功表达了HpaA蛋白，初步掌握其结晶条件，为下一步晶体结构学的研究及其在***感染与致病中的作用机制奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌黏附素原核细胞基因表达晶体

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奥马珠单抗治疗慢性特发性荨麻疹荟萃分析

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现代医药卫生 2015年第17期31卷 2578-2582页

作者：孙康悦李建陈晓红中南大学湘雅医学院中南大学湘雅医学院检验系临床微生物学免疫学教研室湖南长沙410013 第三军医大学药学系药理学教研室重庆400038

目的系统荟萃分析奥马珠单克隆抗体(单抗)治疗慢性特发性荨麻疹的疗效与安全性。方法采用Pub Med数据库、Cochrane图书馆临床对照试验数据库、中国生物医学文献数据库、中国知网全文数据库及万方科技期刊全文数据库等收集文献,研究文献... 详细信息

目的系统荟萃分析奥马珠单克隆抗体(单抗)治疗慢性特发性荨麻疹的疗效与安全性。方法采用Pub Med数据库、Cochrane图书馆临床对照试验数据库、中国生物医学文献数据库、中国知网全文数据库及万方科技期刊全文数据库等收集文献,研究文献为奥马珠单抗治疗慢性特发性荨麻疹的随机双盲对照试验,观察对象为年龄大于12岁,经抗H1受体拮抗剂治疗未达到满意效果的慢性特发性荨麻疹患者。应用Rev Man5.0.24软件对数据进行meta分析,评价奥马珠单抗的疗效及安全性。结果共纳入4项随机双盲对照试验,1 128例患者。各组7 d荨麻疹活动性评分(UAS7)<6分的病例数比较:75 mg奥马珠单抗治疗组优于安慰剂对照组,差异有统计学意义[相对危险度(RR)=1.73,95%可信区间(95%CI):1.10~2.71,P=0.020],300 mg奥马珠单抗治疗组优于75 mg奥马珠单抗治疗组,差异有统计学意义(RR=0.45,95%CI:0.33~0.60,P=0.001);各组治疗后UAS7降低值比较:75 mg奥马珠单抗治疗组优于安慰剂对照组,差异有统计学意义[均方差(MD)=5.03,95%CI:1.72~8.34,P=0.003],300 mg奥马珠单抗治疗组优于75 mg奥马珠单抗治疗组,差异有统计学意义(MD=-7.73,95%CI:-11.15^-4.30,P=0.001);各组1周瘙痒严重程度评分比较:75 mg奥马珠单抗治疗组优于安慰剂对照组,差异有统计学意义(MD=1.75,95%CI:0.55~2.95,P=0.004),300 mg奥马珠单抗治疗组优于75 mg奥马珠单抗治疗组,差异有统计学意义(MD=-3.35,95%CI:-4.97^-1.73,P=0.001)。300 mg奥马珠单抗治疗组总的不良反应和严重不良反应发生情况与安慰剂对照组比较,差异均无统计学意义(RR=1.07、0.39,95%CI:0.97~1.18、0.39~1.38,P=0.200、0.340)。75 mg奥马珠单抗治疗组总的不良反应发生情况与300 mg奥马珠单抗治疗组比较,差异也无统计学意义[RR=0.91,95%CI:0.78~1.06,P=0.240]。结论慢性特发性荨麻疹患者在常规治疗未奏效时加用奥马珠单抗治疗可改善疗效,且安全性高。

关键词：抗体,单克隆/治疗应用荨麻疹/药物疗法治疗结果 Meta分析奥马珠单抗

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幽门螺杆菌分泌与重组表达的VacA蛋白的分离纯化及其致细胞空泡效应与凋亡的对比研究

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军事医学 2014年第9期38卷 714-718,744页

作者：常辉左钱飞敬海明邹全明兰春慧陈东风第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科重庆400042 第三军医大学药学院微生物与生化药学教研室重庆400038

目的分离纯化幽门螺杆菌分泌和重组表达的细胞空泡毒素抗原(VacA)蛋白,并评价其致细胞空泡效应及致细胞凋亡效应。方法分别从幽门螺杆菌ATCC26695菌株培养上清和重组表达VacA蛋白的***15基因工程菌中分离纯化VacA蛋白,经酸化后,以不同... 详细信息

目的分离纯化幽门螺杆菌分泌和重组表达的细胞空泡毒素抗原(VacA)蛋白,并评价其致细胞空泡效应及致细胞凋亡效应。方法分别从幽门螺杆菌ATCC26695菌株培养上清和重组表达VacA蛋白的***15基因工程菌中分离纯化VacA蛋白,经酸化后,以不同终浓度(5,10 ng/ml)分别与人胃腺癌AGS细胞共孵24 h,观察致空泡效应,并通过流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功分离纯化出幽门螺杆菌分泌和重组表达的VacA蛋白;幽门螺杆菌分泌的VacA蛋白能显著引起AGS细胞的空泡样改变及凋亡(P<0.01),而重组表达的VacA蛋白致细胞空泡样改变及凋亡不显著(P>0.05)。结论幽门螺杆菌分泌的VacA蛋白有良好的空泡毒性及致凋亡效应,而重组表达的VacA蛋白无致空泡及凋亡效应,幽门螺杆菌分泌的VacA蛋白可用于VacA作用机制的研究。

关键词：螺杆菌,幽门细胞空泡毒素蛋白纯化细胞凋亡胃肿瘤

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幽门螺杆菌感染的慢性胃炎与凋亡基因的相关性研究

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重庆医学 2014年第29期43卷 3858-3860页

作者：兰春慧黎博胜常辉左钱飞廖盛涛邹全明陈东风第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科重庆400042 第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室重庆400038 第三军医大学学员旅五营重庆400038

目的探讨幽门螺杆菌(HP)感染相关胃炎程度与胃黏膜细胞凋亡基因表达的相关性。方法将2013年11～12月大坪医院消化内镜中心45例慢性胃炎患者纳入研究,快速尿素酶实验和13 C-呼气实验检测HP感染情况,病理分析HP感染部位胃炎严重程度,实时... 详细信息

目的探讨幽门螺杆菌(HP)感染相关胃炎程度与胃黏膜细胞凋亡基因表达的相关性。方法将2013年11～12月大坪医院消化内镜中心45例慢性胃炎患者纳入研究,快速尿素酶实验和13 C-呼气实验检测HP感染情况,病理分析HP感染部位胃炎严重程度,实时定量PCR(qRT-PCR)法检测HP感染部位胃黏膜组织和无HP感染的胃黏膜组织中凋亡相关基因Bax、Bak、Bcl-2的表达,Person相关分析HP感染的慢性胃炎程度与凋亡基因表达的相关性。结果 45例患者13 C-呼气实验和胃窦黏膜快速尿素酶实验均阳性,提示HP感染。病理结果显示45例(100%)患者均为慢性胃窦胃炎,其中28例(62.2%)为轻度,16例(35.6%)为中度,1例(2.0%)为重度;9例(20.0%)肠化生,5例(11.1%)低级别上皮内瘤变。45例患者胃体黏膜尿素酶实验阴性,提示无HP感染,其中6例胃体组织显示轻度慢性炎症(13.3%),39例无炎症(86.7%);无肠化生及上皮内瘤变。qRT-PCR结果显示HP感染胃黏膜中Bax mRNA的表达明显高于HP未感染胃黏膜患者(P<0.01)且与胃炎程度呈明显正相关(P<0.01),而Bak和Bcl-2的表达在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HP感染的慢性胃炎程度与胃黏膜细胞凋亡呈正相关,提示HP感染可能导致胃上皮细胞中Bax基因的表达从而促进细胞凋亡。

关键词：螺杆菌 ,幽门胃炎细胞凋亡基因

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肿瘤相关中性粒细胞在胃癌中的分布、表型及其免疫抑制功能研究

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第三军医大学学报 2014年第6期36卷 587-591页

作者：王婷婷庄园陈娜彭六生程平李文华赵永亮余佩武邹全明第三军医大学:药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 西南医院普通外科重庆400038

目的分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织中的中性粒细胞的分布情况,并研究其表型,探讨胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞对CD3+T细胞功能的影响。方法采用流式细胞术检测并分析42例胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织... 详细信息

目的分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织中的中性粒细胞的分布情况,并研究其表型,探讨胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞对CD3+T细胞功能的影响。方法采用流式细胞术检测并分析42例胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织及外周血中CD66b+中性粒细胞的比例及表型,同时采用免疫组织化学染色技术针对中性粒细胞表面标志CD15原位分析不同类型胃组织石蜡切片中中性粒细胞的浸润情况,最后用胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞与CD3+T细胞共培养,检测其对T细胞增殖能力的影响。结果胃癌患者外周血中性粒细胞比例明显高于健康成人(P<0.01),胃癌组织中的中性粒细胞的频率也高于癌旁组织(P<0.05)和正常胃组织(P<0.05);在胃癌患者外周血及不同类型胃组织浸润的中性粒细胞可能主要为成熟的分叶核粒细胞;相较于正常胃组织,胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞能显著抑制CD3+T细胞增殖(P<0.01)。结论中性粒细胞在胃癌微环境中浸润增高,其可能通过抑制CD3+T细胞增殖而促进胃癌进展。

关键词：胃癌中性粒细胞 CD3+T细胞

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B淋巴细胞在胃癌中的分布、表型及与胃癌进展相关性初步研究

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免疫学杂志 2014年第12期30卷 1077-1081页

作者：李文华庄园彭六生程平吕一品毛方圆王婷婷陈娜赵永亮余佩武邹全明第三军医大学药学院微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程研究中心重庆400038 西南医院普外科

目的分析胃癌患者与健康人外周血、胃癌组织及正常组织中的B淋巴细胞(B细胞)的分布情况以及胃癌微环境中B细胞的表型特征;探讨胃癌组织中浸润B细胞与胃癌患者临床分期的相关性。方法采用流式细胞术检测并分析胃癌患者外周血中以及胃癌... 详细信息

目的分析胃癌患者与健康人外周血、胃癌组织及正常组织中的B淋巴细胞(B细胞)的分布情况以及胃癌微环境中B细胞的表型特征;探讨胃癌组织中浸润B细胞与胃癌患者临床分期的相关性。方法采用流式细胞术检测并分析胃癌患者外周血中以及胃癌组织中CD20+B细胞的频率以及B细胞在胃癌微环境中的表型;同时采用免疫组化染色技术检测B细胞在组织中的浸润情况并分析胃癌组织中B细胞的数量与胃癌患者临床分期的相关性。结果在胃癌患者、健康人外周血以及胃癌组织与正常组织中,CD20+B细胞的频率均无显著差异(P>0.05);与胃癌患者正常组织相比,胃癌组织中CD20+B细胞数量显著增加,具有显著统计学差异(P<0.01)。表型分析显示胃癌组织中B细胞表达Ig D、Ig M、Ig G,高表达CD40、HLA-DR、HLA-ABC,低表达CD80、CD86。此外,与晚期胃癌相比,早期胃癌肿瘤组织中浸润的CD20+B细胞数显著增加(P<0.01)。结论 B细胞在胃癌微环境中浸润显著增加,其在早期胃癌患者肿瘤组织中的浸润数目显著多于晚期胃癌患者,提示B细胞在胃癌进展中可能发挥一定的免疫调控作用。

关键词：胃癌 B淋巴细胞肿瘤进展

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