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第九届全国免疫学学术大会

作者：李滨陈立孙合强赵卓吴超第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室&国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的:精细解析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)免疫小鼠后表位特异性CD4+T淋巴细胞的保护作用与应答机制。方法:重组UreB抗原联合弗氏佐剂皮下免疫Blab/c小鼠,再以Hp菌株感染攻击建立免疫保护模型,流式细胞术分... 详细信息

目的:精细解析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)免疫小鼠后表位特异性CD4+T淋巴细胞的保护作用与应答机制。方法:重组UreB抗原联合弗氏佐剂皮下免疫Blab/c小鼠,再以Hp菌株感染攻击建立免疫保护模型,流式细胞术分析免疫小鼠体内CD4+T淋巴细胞数量和增殖特性,Real-time PCR检测脾脏CD4+T淋巴细胞的IFN-r、IL-4和IL-17等细胞因子的mRNA水平。采用步移合成重叠肽法鉴定UreB抗原中免疫优势的CD4+T细胞表位及其MHC限制性,进而通过表位免疫和细胞过继免疫试验评价其免疫优势表位的免疫保护作用,同时,深入分析表位特异性CD4+T细胞应答特性与表型特征,揭示其细胞免疫保护机制。结果:UreB免疫小鼠后可诱导CD4+T淋巴细胞明显增殖并产生特异性Th1和Th17应答。基于体外扩增的抗原特异性T淋巴细胞系,采用步移合成重叠肽法从UreB抗原中鉴定出两个免疫优势的CD4+T细胞表位UreB317-329和UreB409-401,两个表位均能刺激机体产生Th1和Th17细胞应答,且具有H-2 I-Ad限制性。与特异性Thl7细胞相比,两种表位特异性Th1细胞皆可高表达α4β7和L-selectin归巢受体。两个免疫优势表位单独免疫小鼠均产生显著的免疫保护作用,并有效激发产生针对同一表位的IFN-r和IL-17应答。表位特异性Thl和Thl7细胞的过继免疫保护试验表明:特异性Th1细胞介导了抗Hp感染的免疫保护作用,而特异性Th17细胞非免疫保护却促进炎症损伤。同时,IL-17敲除小鼠试验进一步验证了表位特异性Th1细胞的免疫保护作用。结论:全抗原免疫的保护作用主要来自其中的优势CD4+T细胞表位,同一表位可同时激发产生Th1和Th17细胞应答,但表位特异性Th1而非Th17细胞应答发挥了重要的免疫保护作用,进一步揭示了抗Hp感染的免疫保护机制,为Hp表位疫苗的研究奠定了实验基础。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 CD4+T细胞表位免疫优势

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表位特异性CD4+T细胞介导抗幽门螺杆菌感染的免疫保护作用与应答机制

表位特异性CD4+T细胞介导抗幽门螺杆菌感染的免疫保护作用与应答...

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：李滨陈立孙合强赵卓吴超第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室&国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的:精细解析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)免疫小鼠后表位特异性CD4+T淋巴细胞的保护作用与应答机制. 方法:重组UreB抗原联合弗氏佐剂皮下免疫Blab/c小鼠,再以Hp菌株感染攻击建立免疫保护模型,流式细胞术分... 详细信息

目的:精细解析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)免疫小鼠后表位特异性CD4+T淋巴细胞的保护作用与应答机制. 方法:重组UreB抗原联合弗氏佐剂皮下免疫Blab/c小鼠,再以Hp菌株感染攻击建立免疫保护模型,流式细胞术分析免疫小鼠体内CD4+T淋巴细胞数量和增殖特性,Real-time PCR检测脾脏CD4+T淋巴细胞的IFN-r、IL-4和IL-17等细胞因子的mRNA水平.采用步移合成重叠肽法鉴定UreB抗原中免疫优势的CD4+T细胞表位及其MHC限制性,进而通过表位免疫和细胞过继免疫试验评价其免疫优势表位的免疫保护作用,同时,深入分析表位特异性CD4+T细胞应答特性与表型特征,揭示其细胞免疫保护机制.

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 CD4+T细胞表位免疫优势

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金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位鉴定及其表位疫苗研究

金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位鉴定及其表位疫...

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：赵卓孙合强李滨陈立章金勇曾浩邹全明吴超第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的系统筛选金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)中B细胞免疫优势表位,并基于此构建SEB多表位疫苗,评价与分析该疫苗抗金黄色葡萄球菌感染的保护作用与免疫机制。方法采用合成重叠肽的ELISA法筛选和鉴定SEB中免疫优势应答B细胞表位,并通过生物... 详细信息

目的系统筛选金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)中B细胞免疫优势表位,并基于此构建SEB多表位疫苗,评价与分析该疫苗抗金黄色葡萄球菌感染的保护作用与免疫机制。方法采用合成重叠肽的ELISA法筛选和鉴定SEB中免疫优势应答B细胞表位,并通过生物信息学分析、中和毒素活性试验及临床血清学实验分析B细胞表位的免疫学特性。同时,通过基因工程技

关键词： SEB 免疫优势疫苗研究金黄色葡萄球菌肠毒素细胞免疫

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幽门螺杆菌感染诱导Th22细胞应答的作用及机制研究

幽门螺杆菌感染诱导Th22细胞应答的作用及机制研究

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：庄园邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心暨全军免疫生物制品重点实验室

研究目的幽门螺杆菌感染与慢性胃炎、胃溃疡的发生发展密切相关,但其感染诱导相关的免疫学机制及其参与胃炎的作用却不很清楚。临床上,慢性胃炎患者所感染的幽门螺杆菌多为毒力因子cagA（cytotoxin-associated gene-A,cagA）阳性菌株。... 详细信息

研究目的幽门螺杆菌感染与慢性胃炎、胃溃疡的发生发展密切相关,但其感染诱导相关的免疫学机制及其参与胃炎的作用却不很清楚。临床上,慢性胃炎患者所感染的幽门螺杆菌多为毒力因子cagA（cytotoxin-associated gene-A,cagA）阳性菌株。目前认为,适应性CD4r淋巴细胞（Th细胞）应答在幽门螺杆菌感染导致的胃炎中发挥了重要作用。Th22作为一群新的Th细胞亚群,其在幽门

关键词：幽门螺杆菌感染细胞应答机制研究

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四种变形链球菌临床菌株的生长特性和粘附率比较研究

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现代口腔医学杂志 2014年第4期28卷 210-213页

作者：陈建康樵星芳孙红武邹全明重庆市中药研究院.重庆市啮齿类实验动物工程技术研究中心国家免疫生物制品技术工程研究中心暨第三军医大学药学院微生物与生物化学药学教研室 400065

目的探索从第三军医大学西南医院分离的四种变形链球菌临床株的生长特征和粘附能力。方法采用传统和经典的玻璃试管粘附试验方法,对四种变形链球菌临床株在玻璃试管中粘附24h、48h后的生长特性和粘附率进行统计分析比较。结果从第三军... 详细信息

目的探索从第三军医大学西南医院分离的四种变形链球菌临床株的生长特征和粘附能力。方法采用传统和经典的玻璃试管粘附试验方法,对四种变形链球菌临床株在玻璃试管中粘附24h、48h后的生长特性和粘附率进行统计分析比较。结果从第三军医大学西南医院分离并鉴定命名为11号临床菌株的生长速度稍快于标准株ATCC700610和1、8、14号临床菌株,但不存在显著性差异;11号临床菌株在玻璃试管上粘附24h和48h的粘附率均高于标准株ATCC700610和1、8、14号三株变形链球菌临床菌株;对四种变形链球菌临床菌株对玻璃试管粘附24h后粘附率比较,11号临床菌株和标准株ATCC700610间存在显著性差异;对四种变形链球菌临床株对玻璃试管粘附48h后粘附率比较发现,标准株ATCC700610和8号、14号临床株间差异显著,1号和8、11、14号临床菌株间差异显著。结论本次研究结果提示从第三军医大学西南医院分离鉴定并命名为11号临床菌株具有较强的粘附能力,可以为后期有关变形链球菌疫苗研发和研究提供一定的理论参考和科学依据。

关键词：变形链球菌分离鉴定粘附临床菌株玻璃试管法

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YAP/TAZ对发育和肿瘤的调控及其功能的研究进展

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现代生物医学进展 2013年第2期13卷 379-381,302页

作者：左钱飞白艳涛李佳乐曾浩第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室国家免疫制品工程技术研究中心重庆400038

Hippo通路是一种在进化中形成的保守的蛋白激酶级联通路,它与发育中器官的大小和肿瘤的形成有关。Hippo通路的中枢是从肿瘤抑制子Hippo到原癌蛋白YAP/TAZ的激酶级联反应。YAP/TAZ是Hippo通路下游的主要的效应分子,它们广泛表达于多种组... 详细信息

Hippo通路是一种在进化中形成的保守的蛋白激酶级联通路,它与发育中器官的大小和肿瘤的形成有关。Hippo通路的中枢是从肿瘤抑制子Hippo到原癌蛋白YAP/TAZ的激酶级联反应。YAP/TAZ是Hippo通路下游的主要的效应分子,它们广泛表达于多种组织器官中。在哺乳动物细胞中,Hippo通路激酶级联反应通过对YAP/TAZ磷酸化作用,促使其从细胞核转入细胞质中,从而抑制了YAP/TAZ的功能作用。TEAD家族转录子被鉴定为YAP/TAZ发挥生物学功能的重要调节因子。YAP/TAZ的失调引起的相关的基因的表达改变,将会影响细胞的增殖,分化,以及凋亡,从而会影响器官的大小以及肿瘤的形成。本文综述Hippo通路的最新进展,重点关注的是该通路中的YAP/TAZ调控的缺失对发育缺陷和肿瘤的影响。这将为我们研究再生医学,组织工程技术,肿瘤的干预防治提供新的思路与策略。

关键词： Hippo通路 YAP TAZ 发育肿瘤

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组亚单位疫苗FnBPA的免疫保护作用研究

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免疫学杂志 2012年第10期28卷 837-841页

作者：左钱飞吴翼董衍东蔡昌芝冯强解庆华曾浩邹全明第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠。末次... 详细信息

目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠。末次免疫后的第7天,分离免疫小鼠的血清ELISA检测IgG及其亚型抗体水平,同时测定体外抗体介导的调理吞噬作用。末次免疫后的第14天,经尾静脉感染ATCC国际标准株MRSA-252,统计分析感染后各组的小鼠的生存率以及检测脾脏,肾脏的细菌定植量。结果成功构建、表达及纯化了FnBPA活性片段,重组蛋白纯度可达90%;免疫后诱导小鼠机体产生了高效价的IgG抗体,并在体外能发挥抗体介导的调理吞噬作用;在感染保护评价实验中,与对照组相比,实验组的生存率显著提高(P<0.01),并显著降低了脾脏与肾脏的细菌定植量(P<0.05)。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗FnBPA具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可以作为MRSA疫苗研究的重要候选抗原。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 FnBPA 调理吞噬作用免疫保护性

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IsdB活性片段的克隆、表达及抗原免疫保护性初步研究

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免疫学杂志 2012年第9期28卷 759-763页

作者：蔡昌芝左钱飞冯强周维英吴翼董衍东解庆华邹全明曾浩第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入... 详细信息

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入大肠杆菌XL-1 blue,通过IPTG诱导表达IsdB2/GST融合蛋白,利用GST亲和层析初步纯化获取IsdB2蛋白。用IsdB2蛋白抗原辅以氢氧化铝佐剂对小鼠进行免疫实验,统计小鼠存活率对IsdB2抗原的免疫性进行初步研究。结果重组质粒经过BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达IsdB2/GST及酶切获取IsdB2蛋白的SDS-PAGE分析表明,IsdB2蛋白相对分子质量大小约72 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期相符合。用IsdB2蛋白对小鼠进行3次疫苗免疫实验,IsdB2对小鼠的保护率分别为84.6%、50%和60%。结论成功构建重组表达载体pGEX-6P-2-IsdB2,利用大肠杆菌表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得IsdB2蛋白抗原,通过3次动物疫苗免疫实验结果表明IsdB2具有免疫保护性,为研制新型有效的MRSA疫苗奠定实验基础。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 IsdB活性片段 GST融合蛋白免疫保护性

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绵羊痘病毒山东流行株的分离鉴定与T4肽基因序列分析

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畜牧与兽医 2012年第4期44卷 1-5页

作者：王文秀莫玲唐娜孙红武李峰宋锋王小萌沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 国家免疫制品工程技术研究中心/第三军医大学药学院微生物及生化药学教研室重庆400038

从山东东营疑似绵羊痘病羊的肺脏组织中分离到1株病毒。取疑似绵羊痘病羊组织病料研磨、冻融、离心后分别接种11日龄SPF鸡胚绒毛尿囊膜和牛睾丸继代细胞,鸡胚接种部位出现明显的痘斑;牛睾丸细胞出现聚集、变圆等明显的细胞病变。利用1... 详细信息

从山东东营疑似绵羊痘病羊的肺脏组织中分离到1株病毒。取疑似绵羊痘病羊组织病料研磨、冻融、离心后分别接种11日龄SPF鸡胚绒毛尿囊膜和牛睾丸继代细胞,鸡胚接种部位出现明显的痘斑;牛睾丸细胞出现聚集、变圆等明显的细胞病变。利用1对绵羊痘病毒T4肽基因特异性引物进行了PCR扩增,获得与预期大小一致的约300 bp的片段。将所得序列与GenBank收录的绵羊痘病毒、山羊痘病毒等毒株相关序列进行比较分析。结果表明,该分离株与国外其他绵羊痘病毒株具有较高的同源性,达97.4%～99.3%;与山羊痘病毒株同源性为96.4%。通过试验初步证明所分离的病毒为绵羊痘病毒,并将该毒株命名为绵羊痘病毒DY株。

关键词：绵羊痘病毒分离鉴定 T4肽基因序列分析

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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组亚单位疫苗FnBPA的免疫保护作用研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组亚单位疫苗FnBPA的免疫保护...

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：左钱飞曾浩邹全明第三军医大学医学检验系(药学院)临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠。末次... 详细信息

目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠。末次免疫后的第7天,分离免疫小鼠的血清ELISA检测IgG及其亚型抗体水平,同时测定体外抗体介导的调理吞噬作用。末次免疫后的第14天,经尾静脉感染ATCC国际标准株MRSA-252,统计分析感染后各组的小鼠的生存率以及检测脾脏,肾脏的细菌定植量。结果成功构建、表达及纯化了FnBPA活性片段,重组蛋白纯度可达90%;免疫后诱导小鼠机体产生了高效价的Ig6抗体,并在体外能发挥抗体介导的调理吞噬作用;在感染保护评价实验中,与对照组相比,实验组的生存率显著提高(P<0.01),并显著降低了脾脏与肾脏的细菌定植量(P<0.05)。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗FnBPA具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可以作为MRSA疫苗研究的重要候选抗原。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 FnBPA 调理吞噬作用免疫保护性

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