检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2015年第5期31卷 380-385页

作者：魏振波蔡昌芝杨赟纪永军牟道华石云曾浩邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的构建鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115胞外区(A1S_0115A)与GST标签融合表达的原核表达载体,在大肠杆菌XL-1 blue中表达、纯化A1S_0115A蛋白后,进行抗原免疫保护性的初步研究。方法利用生物信息学技术分析A1S_0115蛋白结构,确定蛋白的... 详细信息

目的构建鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115胞外区(A1S_0115A)与GST标签融合表达的原核表达载体,在大肠杆菌XL-1 blue中表达、纯化A1S_0115A蛋白后,进行抗原免疫保护性的初步研究。方法利用生物信息学技术分析A1S_0115蛋白结构,确定蛋白的胞外区片段,PCR扩增该基因片段后,构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,将重组载体转化大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达GST-A1S_0115A融合蛋白,采用GST亲和层析填料纯化并酶切获得A1S_0115A蛋白。利用已建立的Balb/c小鼠鲍曼不动杆菌全身感染模型对该蛋白抗原的免疫保护性进行初步评价。结果重组质粒经过Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达及酶切后蛋白的SDS-PAGE分析表明,A1S_0115A蛋白胞外区相对分子质量大小约50 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期设想符合,目的蛋白纯度在95%以上。用A1S_0115A蛋白对小鼠进行2轮次免疫保护性实验及其抗体的被动免疫实验,免疫攻毒后小鼠的保护率分别为50%和55%,被动免疫保护率为45%和50%。结论成功构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,利用大肠杆菌可溶表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得了高纯度的A1S_0115A蛋白。动物免疫攻毒保护实验结果表明A1S_0115A蛋白具有较好的免疫保护性,为研制新型有效的鲍曼不动杆菌疫苗奠定实验基础。

关键词：鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii) A1S_0115A蛋白 GST融合蛋白免疫保护性

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HPLC法测定纳米乳漱口液中醋酸洗必泰的含量

HPLC法测定纳米乳漱口液中醋酸洗必泰的含量

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中国药学会第十三届青年药学科研成果交流会

作者：喻吉孙红武李云飞张华琦中国人民解放军第三军医大学第一附属医院药剂科国家免疫制品工程技术研究中心暨第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室重庆市精神卫生中心药剂科

目的:建立纳米乳漱口液中醋酸洗必泰的含量测定方法。方法:采用HPLC,色谱柱SEPELCO DBS C18柱（250mm×416mm,5μm）;流动相:0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=2.5）-乙腈（50:50）检测波长:275nm。结果:醋酸洗必泰在22.4～198.6μg/m... 详细信息

目的:建立纳米乳漱口液中醋酸洗必泰的含量测定方法。方法:采用HPLC,色谱柱SEPELCO DBS C18柱（250mm×416mm,5μm）;流动相:0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=2.5）-乙腈（50:50）检测波长:275nm。结果:醋酸洗必泰在22.4～198.6μg/ml之间呈良好的线性关系（R=0.9963）,平均回收率为98.72%,RSD为0.74%。结论:该测定方法简便可行、检测结果准确性高,重复性好,成本低廉,可广泛应用于该产品质量检测和质量控制。

关键词：醋酸洗必泰纳米乳漱口液 HPLC 质量控制质量检测

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幽门螺杆菌黏附素HpaA重组蛋白的表达、纯化及晶体生长

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免疫学杂志 2015年第11期31卷 986-990页

作者：郭玲章金勇刘东马博王书峰倪兵李海波刘威吴玉章第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038 第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室重庆400038 北京大学医学部人体解剖与组织胚胎学系 100191 第三军医大学药学系药物化学教研室重庆400038

目的构建幽门螺杆菌黏附素Hpa A的原核表达载体,并用纯化的重组Hpa A蛋白进行晶体培养,为其三维结构解析、基于结构的Hpa A抗原表位分析和黏附拮抗剂研究奠定基础。方法用生物信息学方法分析Hpa A蛋白序列二级结构并预测跨膜区,利用PCR... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌黏附素Hpa A的原核表达载体,并用纯化的重组Hpa A蛋白进行晶体培养,为其三维结构解析、基于结构的Hpa A抗原表位分析和黏附拮抗剂研究奠定基础。方法用生物信息学方法分析Hpa A蛋白序列二级结构并预测跨膜区,利用PCR技术扩增幽门螺杆菌标准株NCTC 26695编码Hpa A蛋白的hp0797基因非跨膜区片段,构建重组质粒并p ET22b(+)-r Hpa A,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达重组蛋白,经Ni离子亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白并分析其聚集状态。用Hampton Research结晶试剂盒搜索结晶条件,并系统优化,在上海同步辐射光源进行衍射实验。结果成功构建了重组质粒p ET22b(+)-r Hpa A,并在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达;重组Hpa A蛋白在溶液中以二聚体形式存在,SDS-PAGE分析单体相对分子质量约24 000,HPLC分析纯度达95%;培养出晶形较好的重组Hpa A蛋白单晶,大小约70μm×30μm×20μm,衍射分辨率2.03魡。结论利用经典的蛋白质表达、纯化技术和晶体培养技术,获得了衍射能力较强的重组Hpa A蛋白单晶,为其三维结构解析和基于结构的幽门螺杆菌疫苗研究提供了重要基础。

关键词：幽门螺杆菌 Hpa A 表达纯化晶体生长

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金黄色葡萄球菌肠毒素B在不同动物模型中的应答及治疗策略的研究新进展

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中国生物制品学杂志 2015年第5期28卷 544-546页

作者：赵卓吴超邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室&国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染引起的多种临床症状均与其分泌的金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)密切相关,临床对SEB毒素中毒尚无特效疗法。本文对SEB在... 详细信息

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B 动物模型治疗策略

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microRNAs介导金黄色葡萄球菌感染巨噬细胞后的免疫逃逸

microRNAs介导金黄色葡萄球菌感染巨噬细胞后的免疫逃逸

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第十届全国免疫学学术大会

作者：余婷第三军医大学微生物与生化药学教研室

背景:金黄色葡萄球菌是临床重要的致病菌之一,能引起医院感染以及社区感染。巨噬细胞作为天然免疫细胞,与中性粒细胞、DC细胞等一起被视为机体抵御金黄色葡萄球菌感染的第一道防线。一方面,巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌,其产生的活性氧... 详细信息

背景:金黄色葡萄球菌是临床重要的致病菌之一,能引起医院感染以及社区感染。巨噬细胞作为天然免疫细胞,与中性粒细胞、DC细胞等一起被视为机体抵御金黄色葡萄球菌感染的第一道防线。一方面,巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌,其产生的活性氧有助于杀灭细菌;另一方面,细胞产生的活性氧以及细菌分泌的多种外毒素和酶类又能通过多种途径引起巨噬细胞自身的凋亡,导致不可控的炎症反应及病原体的逃逸。micro RNAs(mi RNAs)通过与靶基因3’UTR区结合,抑制靶基因的翻译或使其降解从而发挥调控基因表达的作用。已经有文献报道,mi RNA能够参与多种细菌感染引起的炎症反应。当遇到不同类型的细菌感染时,细胞中的mi RNA表达谱会发生相应的改变,参与调控炎症反应或细菌的清除。目的 :主要探究金葡菌感染后巨噬细胞mi RNA表达谱的改变。重点研究差异改变的mi RNA。方法 :巨噬细胞中mi RNAs的表达水平主要通过mi RNA芯片(Affymetrix Gene Chip mi RNA 4.0 Array)和荧光定量PCR进行分析检测。通过mi RNA过表达和抑制实验进行功能研究。结果 :我们筛选出感染金葡菌后巨噬细胞中mi RNA表达谱的改变,通过q RT-PCR验证出一系列差异改变的mi RNA,其中,mi R-210在金葡菌感染后上调显著,且与感染时间和感染剂量正相关。这种改变可能是由于细菌感染后导致的细胞缺氧引起的。过表达和抑制mi R-210后,我们证实,mi R-210虽然对巨噬细胞吞噬金葡菌的功能没有影响,但是能抑制巨噬细胞对金葡菌的杀灭能力。这种作用是由于mi R-210能够抑制细胞线粒体呼吸链中关键蛋白铁硫蛋白的支架蛋白ISCU1/2,进而抑制线粒体呼吸引起的。结论 :巨噬细胞受到金葡菌感染后,由于缺氧导致mi R-210表达上调,后者通过抑制ISCU1/2,抑制巨噬细胞对金葡菌的清除,最终导致金葡菌的免疫逃逸。

关键词：金黄色葡萄球菌 microRNA 巨噬细胞免疫逃逸

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microRNAs介导金黄色葡萄球菌感染巨噬细胞后的免疫逃逸

microRNAs介导金黄色葡萄球菌感染巨噬细胞后的免疫逃逸

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：余婷第三军医大学微生物与生化药学教研室 400038

背景：金黄色葡萄球菌是临床重要的致病菌之一，能引起医院感染以及社区感染。巨噬细胞作为天然免疫细胞，与中性粒细胞、DC细胞等一起被视为机体抵御金黄色葡萄球菌感染的第一道防线。一方面，巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌，其产生的活... 详细信息

背景：金黄色葡萄球菌是临床重要的致病菌之一，能引起医院感染以及社区感染。巨噬细胞作为天然免疫细胞，与中性粒细胞、DC细胞等一起被视为机体抵御金黄色葡萄球菌感染的第一道防线。一方面，巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌，其产生的活性氧有助于杀灭细菌;另一方面，细胞产生的活性氧以及细菌分泌的多种外毒素和酶类又能通过多种途径引起巨噬细胞自身的凋亡，导致不可控的炎症反应及病原体的逃逸。

关键词：金黄色葡萄球菌 microRNA 巨噬细胞免疫逃逸

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GM-CSF上调肿瘤相关中性粒细胞表面PD-L1的表达从而抑制T细胞免疫

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第十届全国免疫学学术大会

作者：王婷婷庄园邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室

目的 :分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织(胃癌、癌旁及正常胃组织)中的中性粒细胞分布情况;胃癌中肿瘤相关中性粒细胞(TAN)的表型分析;TAN对T细胞功能的抑制作用研究;TAN抑制T细胞免疫的机制研究。方法 :1.收集胃癌患者外周血及不... 详细信息

目的 :分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织(胃癌、癌旁及正常胃组织)中的中性粒细胞分布情况;胃癌中肿瘤相关中性粒细胞(TAN)的表型分析;TAN对T细胞功能的抑制作用研究;TAN抑制T细胞免疫的机制研究。方法 :1.收集胃癌患者外周血及不同类型胃组织标本进行流式染色,以健康成人外周血做对照,分析不同标本中中性粒细胞占白细胞的比例;2.收集胃癌患者外周血及不同类型胃组织标本,运用流式细胞术分析中性粒细胞表面CXCR1、CXCR2、CD54、CD62L及PD-L1的表达情况;3.分选胃癌患者外周血、胃癌组织及正常胃组织中的中性粒细胞,加入或不加入anti-PD-L1抗体,与CD3+T细胞共培养,检测T细胞的增殖及IFNγ的产生;4.用胃癌组织培养上清或重组人GM-CSF刺激健康成人外周血中性粒细胞以诱导条件性中性粒细胞,以正常胃组织培养上清或1640做对照,检测条件性中性粒细胞表面PD-L1的表达;将条件性中性粒细胞与CD3+T细胞共培养,加入或不加入anti-PD-L1抗体,检测T细胞的增殖及IFNγ的产生。结果 :1.胃癌患者外周血中性粒细胞比例明显高于健康成人;胃癌组织中的TAN的频率显著高于癌旁组织和正常胃组织;***的表型为CXCR1lowCXCR2lowCD62LlowCD54high,且高表达免疫抑制性分子PD-L1;***可以抑制T细胞功能且此抑制作用与PD-L1相关;4.胃癌组织培养上清及GM-CSF可刺激中性粒细胞上调PD-L1的表达;条件性中性粒细胞可以抑制T细胞功能且此抑制作用与PD-L1相关。结论 :1.中性粒细胞在胃癌患者外周血中比例增高,在胃癌组织中浸润增加;***是一群处于激活状态的中性粒细胞;***通过PD-L1抑制T细胞功能;***-CSF上调中性粒细胞表面PD-L1的表达从而发挥抑制T细胞免疫的作用。

关键词：肿瘤相关中性粒细胞 T细胞PD-L1 GM-CSF

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鲍曼不动杆菌假定外膜蛋白A1S1969的克隆表达及免疫保护机制研究

鲍曼不动杆菌假定外膜蛋白A1S1969的克隆表达及免疫保护机制研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：蔡昌芝杨赟石云曾浩邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室

研究背景:目前鲍曼不动杆菌在院内革兰氏阴性菌中检出率高,由于其耐药性强、致病率高、能在环境中长期存活,并且能抵抗紫外线的杀伤作用,因此院内的ICU病房和神经外科成为鲍曼不动杆菌感染的高发区。随着泛耐药鲍曼不动杆菌（PDR-AB）... 详细信息

研究背景:目前鲍曼不动杆菌在院内革兰氏阴性菌中检出率高,由于其耐药性强、致病率高、能在环境中长期存活,并且能抵抗紫外线的杀伤作用,因此院内的ICU病房和神经外科成为鲍曼不动杆菌感染的高发区。随着泛耐药鲍曼不动杆菌（PDR-AB）的出现使得临床用药日趋困难,因此研发一种安全有效的新型疫苗供PDR-AB的防治已成为医学界的共同目标。目的 :为鲍曼不动杆菌疫苗筛选出保护性抗原,用于鲍曼不动杆菌重组蛋白疫苗的研发。方法 :基于反向疫苗学筛选出假定外膜蛋白（A1S969）,构建可融性表达载体;通过全身感染模型评价蛋白的免疫保护性;通过酶联免疫技术检测抗体及分型,以及血清中前炎症细胞因子水平;并利用被动免疫实验和体外实验分析抗体的功能。结果 :成功构建表达A1S969融合蛋白。应用鲍曼不动杆菌ATCC-17978标准菌株建立BALB/C小鼠全身感染模型;在动物模型中证实A1S969具有免疫保护作用。在抗体方面证实A1S969蛋白刺激机体产生的抗体以Ig G1亚型为主,以及抗体可以介导中性粒细胞吞噬AB;同时证实了A1S969蛋白可降低小鼠急性感染时血清中的IL-1β、TNFα和IL-6前炎症细胞因子水平;因此减少了小鼠脓毒血症的产生,从而提高小鼠的存活率。结论 :基因工程融合蛋白A1S969可以作为鲍曼不动杆菌重组蛋白疫苗的一个候选抗原。

关键词：鲍曼不动杆菌 A1S1969 克隆表达

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鲍曼不动杆菌假定外膜蛋白A1S_1969的克隆表达及免疫保护机制研究

鲍曼不动杆菌假定外膜蛋白A1S_1969的克隆表达及免疫保护机制研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：蔡昌芝杨赟石云曾浩邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室 400038

研究背景：目前鲍曼不动杆菌在院内革兰氏阴性菌中检出率高，由于其耐药性强、致病率高、能在环境中长期存活，并且能抵抗紫外线的杀伤作用，因此院内的ICU病房和神经外科成为鲍曼不动杆菌感染的高发区。随着泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-AB... 详细信息

研究背景：目前鲍曼不动杆菌在院内革兰氏阴性菌中检出率高，由于其耐药性强、致病率高、能在环境中长期存活，并且能抵抗紫外线的杀伤作用，因此院内的ICU病房和神经外科成为鲍曼不动杆菌感染的高发区。随着泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-AB)的出现使得临床用药日趋困难，因此研发一种安全有效的新型疫苗供PDR-AB的防治已成为医学界的共同目标。

关键词：鲍曼不动杆菌 A1S_1969 克隆表达

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GM-CSF上调肿瘤相关中性粒细胞表面PD-L1的表达从而抑制T细胞免疫

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：王婷婷庄园邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室 400038

目的：分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织(胃癌、癌旁及正常胃组织)中的中性粒细胞分布情况;胃癌中肿瘤相关中性粒细胞(TAN)的表型分析;TAN对T细胞功能的抑制作用研究;TAN抑制T细胞免疫的机制研究。

关键词：肿瘤相关中性粒细胞 T细胞PD-L1 GM-CSF

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