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第八届中国眼科学和视觉科学研究大会

作者：孟晓红李世迎刘勇徐海伟阴正勤第三军医大学西南眼科医院重庆市视觉损伤和再生修复重庆市重点实验室

目的分析视网膜变性疾病的遗传方式，筛查其致病基因。方法从2013 年1 月至2016 年2 月到第三军医大学第一附属医院眼科就诊的358 例视网膜色素变性病例进行二代测序，通过生物信息学分析、突变数据库比对、家系验证及其遗传方式确立... 详细信息

目的分析视网膜变性疾病的遗传方式，筛查其致病基因。方法从2013 年1 月至2016 年2 月到第三军医大学第一附属医院眼科就诊的358 例视网膜色素变性病例进行二代测序，通过生物信息学分析、突变数据库比对、家系验证及其遗传方式确立致病基因。

关键词：遗传性视网膜变性疾病致病基因异质性遗传方式二代测序

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两种不同晶体摘除术联合一期人工晶体悬吊术治疗马凡氏综合征晶体半脱位的疗效观察与分析

两种不同晶体摘除术联合一期人工晶体悬吊术治疗马凡氏综合征晶体...

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第八届中国眼科学和视觉科学研究大会

作者：屈娅李嘉文李付亮余涛第三军医大学西南医院全军眼科中心重庆市视觉损伤与再生修复实验室

目的探讨晶体超声乳化术与晶体切除及前部玻璃体切除联合一期人工晶体悬吊术分别治疗马凡氏综合征患者晶体半脱位的疗效并进行分析。设计回顾性比较性病例系列研究对象马凡氏综合症先天性晶体半脱体患者10 例,18 只眼方法 12 岁以... 详细信息

目的探讨晶体超声乳化术与晶体切除及前部玻璃体切除联合一期人工晶体悬吊术分别治疗马凡氏综合征患者晶体半脱位的疗效并进行分析。设计回顾性比较性病例系列研究对象马凡氏综合症先天性晶体半脱体患者10 例,18 只眼方法 12 岁以上3 例(5 只眼)采用晶体超声乳化术摘除晶体同时行一期人工晶体悬吊术;12 岁以下7 例(13只眼)采用晶体切除联合一期人工晶体悬吊术,同时行前段玻璃体切除术。

关键词：马凡氏综合征超声乳化术人工晶体悬吊术玻璃体切除术晶体切除术晶状体异位

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低视力视网膜变性患者的视功能精准评估的初步临床研究

低视力视网膜变性患者的视功能精准评估的初步临床研究

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第一届北京视觉科学会议(Beijing Vision Science Conference(BVSC)2016)

作者：李世迎王刚王敏王青刘波孟晓红刘勇赵从建阴正勤第三军医大学附属西南医院眼科重庆 400038 视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室重庆 400038

目的：目前对低视力的视功能评定标准中主要依靠视力和视野,而视力表检查在低视力患者中不够精确、视野受患者主观配合度影响,这些都妨碍了对低视力患者视功能的精准评估和可能疗效的客观检测。本研究旨在探讨视觉电生理检查、黄斑微视... 详细信息

目的：目前对低视力的视功能评定标准中主要依靠视力和视野,而视力表检查在低视力患者中不够精确、视野受患者主观配合度影响,这些都妨碍了对低视力患者视功能的精准评估和可能疗效的客观检测。本研究旨在探讨视觉电生理检查、黄斑微视野仪(microperimeter,MP)和瞳孔对光反射测量仪(pupillometer,PLR)在低视力视网膜变性患者的视功能精准评估中的价值。

关键词：低视力视网膜变性视觉电生理检查黄斑微视野仪瞳孔光反射

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神经干细胞与RPE细胞的线粒体交换及其对RPE细胞增生和能量代谢的影响

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中华实验眼科杂志 2015年第5期33卷 424-429页

作者：孙荣莎徐海伟阴正勤第三军医大学西南医院全军眼科中心重庆市视觉损伤与再生修复重点实验室重庆400038

背景研究表明,干细胞可通过与损害靶细胞进行线粒体交换的方式修复受损细胞.视网膜色素变性疾病是以视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡为病理基础的眼病,干细胞是否能够通过上述机制进行治疗尚不清楚. 目的研究神经干细胞（NSCs）能否通... 详细信息

背景研究表明,干细胞可通过与损害靶细胞进行线粒体交换的方式修复受损细胞.视网膜色素变性疾病是以视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡为病理基础的眼病,干细胞是否能够通过上述机制进行治疗尚不清楚. 目的研究神经干细胞（NSCs）能否通过线粒体交换机制改善RPE细胞的增生和能量代谢功能.方法分离Long-Evans大鼠的视网膜进行RPE细胞的培养和传代,取第3代细胞用于实验,采用荧光显微镜检测RPE细胞中RPE65和Bestrophin蛋白的表达.小鼠NSCs C17.2细胞系和带绿色荧光蛋白（GFP）的C17.2细胞（GFP-C17.2细胞）进行培养和传代.分别采用线粒体特异性染色剂Mitotracker-green和Mitotracker-red标记RPE细胞和NSCs线粒体.将RPE细胞与小鼠NSCs进行共培养,用麦胚凝集素（WGA）标记隧道纳米管（TNT）,于激光扫描共焦显微镜下观察共培养的RPE细胞与小鼠NSCs间TNT中线粒体交换方式;采用流式细胞术检测RPE细胞与NSCs共培养前后的细胞周期改变;采用高效液相色谱（HPLC）技术检测共培养前后RPE细胞中ATP、ADP和AMP的质量分数. 结果培养的第3代RPE细胞生长良好,RPE65和Bestrophin表达阳性细胞均＞85％.NSCs和RPE细胞中线粒体对Mitotracker-red标记的阳性率均＞95％.2种细胞共培养后24 h可见RPE细胞与NSCs间形成的膜性TNT结构,WGA染色呈蓝色荧光.随着时间的推移,NSCs中呈红色荧光的线粒体通过TNT进入呈绿色荧光的RPE细胞中.接受TNT线粒体后,处于G1期的RPE细胞比例较未进行线粒体交换的RPE细胞明显下降,差异有统计学意义（P=0.016）,S期细胞和G2/M期细胞比例分别增加了5％和2％,差异均无统计学意义（P=0.114、0.189）.HPLC检测结果显示,与NSCs共培养后,RPE细胞中ATP、ADP和AMP质量分数分别为（8.77 ±3.68）、（2.76±0.92）和（1.07±0.65） μg/mg,较共培养前的（11.29±2.29）、（3.12±0.95）和（1.59±1.22） μg/mg均有所下降,但差异均无统计学意义（P=0.370、0.668、0.553）.结论 NSCs通过建立的TNT能将线粒体单向传递给共培养的RPE细胞,线粒体交换可能是NSCs改善RPE细胞增生和代谢能力的机制之一.

关键词：干细胞眼色素上皮/细胞学视网膜变性/治疗细胞培养共培养技术线粒体/代谢隧道纳米管动物

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眼科干细胞研究的现状及进一步研究的问题

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中华实验眼科杂志 2015年第9期33卷 769-773页

作者：阴正勤李世迎蹇骞第三军医大学西南医院眼科、重庆市视觉损伤与修复重点实验室重庆400038

干细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,能通过非对称分裂的方式产生功能和类型更为局限的前体细胞及多种细胞系,进而再生新的细胞,参与损伤组织的修复和重建,是细胞移植研究和再生医学研究的主要对象.眼是一种由多种组织细胞和神经细... 详细信息

干细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,能通过非对称分裂的方式产生功能和类型更为局限的前体细胞及多种细胞系,进而再生新的细胞,参与损伤组织的修复和重建,是细胞移植研究和再生医学研究的主要对象.眼是一种由多种组织细胞和神经细胞组成的感觉器官,干细胞移植治疗眼科变性性疾病具有易操作、可视性好、所需种子细胞量少和排斥反应轻的优点,在干细胞基础研究和临床研究中受到广泛关注.国内外研究团队正在进行干细胞移植治疗眼部不可逆疾病的Ⅰ、Ⅱ期临床试验,我国经WHO注册的Ⅰ期临床试验也正处于病例招募阶段,以评估干细胞移植治疗眼部疾病的疗效和安全性.目前,关于干细胞移植治疗眼部疾病的研究仍存在很多尚需解决的问题.本文中评述眼科干细胞移植研究的进展以及进一步的研究方向。

关键词：干细胞/移植黄斑变性视网膜变性角膜疾病晶状体/再生临床试验人

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飞秒激光板层切削的角膜层面质量与角膜材料的相关性研究

飞秒激光板层切削的角膜层面质量与角膜材料的相关性研究

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第八届中国眼科学和视觉科学研究大会

作者：张辰星唐茂龙李燕 David Huang 第三军医大学附属西南医院眼科视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室重庆 Casey eye institute Oregon Health & Science UniversityPortlandOR

目的量化对比分析飞秒激光在新鲜尸眼角膜和Gamma 射线预处理角膜材料(VisionGraft Sterile Cornea;Tissue Bank International,Baltimore,MD,USA)上进行不同深度板层切削所产生的基质层面质量状况。方法对19 只新鲜尸眼和14 只Vision... 详细信息

目的量化对比分析飞秒激光在新鲜尸眼角膜和Gamma 射线预处理角膜材料(VisionGraft Sterile Cornea;Tissue Bank International,Baltimore,MD,USA)上进行不同深度板层切削所产生的基质层面质量状况。方法对19 只新鲜尸眼和14 只VisionGraft 角膜材料进行飞秒激光板层切削。

关键词：飞秒激光板层角膜移植 VisionGraft 角膜

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GCaMP基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像研究

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第三军医大学学报 2015年第11期37卷 1064-1069页

作者：宋蔚林赵从健阴正勤王一第三军医大学西南医院全军眼科中心视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室重庆400038

目的研究GCa MP(属于基因编码钙指示剂/蛋白钙指示剂)基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像。方法用慢病毒转染C17.2细胞,获得稳定表达GCa MP基因的C17.2-GCa MP细胞。Real-time PCR定量检测C17.2细胞及C17.2-GCa MP细胞中神经干细... 详细信息

目的研究GCa MP(属于基因编码钙指示剂/蛋白钙指示剂)基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像。方法用慢病毒转染C17.2细胞,获得稳定表达GCa MP基因的C17.2-GCa MP细胞。Real-time PCR定量检测C17.2细胞及C17.2-GCa MP细胞中神经干细胞标志物巢蛋白(nestin)的表达情况。将C17.2细胞(Fluo-4 AM染色后)和C17.2-GCa MP细胞置于定制数字荧光显微镜下进行钙离子荧光检测。结果 Real-time PCR检测结果提示C17.2细胞及C17.2-GCa MP细胞中nestin表达差异无统计学意义(P>0.05)。C17.2-GCa MP细胞较Fluo-4 AM染色C17.2细胞钙离子荧光锐波(spike)波形持续时间长且相对荧光强度强(P<0.05),在Fluo-4 AM染色C17.2细胞中能观察到钙离子荧光慢波(wave)波形,而C17.2-GCa MP wave波形不典型。结论 C17.2-GCa MP细胞在保持神经干细胞干性的同时能够监测细胞内钙离子变化,能够运用于神经干细胞移植治疗视网膜色素变性功能整合的研究。

关键词： C17.2神经干细胞 GCaMP GECI Fluo-4 AM

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3T3-fGFP细胞摄取神经干细胞胞外泌囊泡的途径

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第三军医大学学报 2015年第12期37卷 1193-1199页

作者：陈曦赵从健阴正勤第三军医大学西南医院全军眼科中心视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室重庆400038

目的以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路。方法分别用超速离心法获得胞外囊泡（EV）和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体（EX... 详细信息

目的以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路。方法分别用超速离心法获得胞外囊泡（EV）和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体（EXO）;用透射电镜和原子力显微镜分别对两种样品进行形态学比较;用SDS-PAGE和Western blot分别对两种样品进行生物化学比较;用染料标记超速离心法获得胞外囊泡;将标记的胞外囊泡与3T3-fGFP细胞共孵育,对3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡进行研究;通过药理实验筛选3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡的主要通路。结果 C17.2细胞生长良好,形态规则未出现明显分化现象。在透射电镜下两种样品均观察到圆形双层膜结构和＂杯状＂外形的囊泡,直径分布多集中在300 nm以内,并且发现胞外囊泡的平均直径大于外泌体。原子力显微镜的结果显示,两种样品的高度分布多集中在2~20 nm以内,直径分布多集中在300 nm以内,并且外泌体的平均高度和平均直径均大于胞外囊泡。SDS-PAGE结果显示两种样品所含蛋白种类、表达丰度接近。在相同上样量下HSP70的表达强度两者接近,但CD63、CD9和CD81 3种蛋白在胞外囊泡中表达更强。摄取实验表明C17.2细胞胞外囊泡可以被3T3-fGFP细胞内化,被包裹在囊泡内,转运到细胞核周围的区域,并且摄取数量随着时间延长而增加（P〈0.05）。通过药理实验确定网格蛋白（Clathrin）介导的内吞通路为3T3-f GFP细胞摄取C17.2细胞胞外囊泡的主要通路。结论小鼠神经干细胞外泌体可能主要经网格蛋白介导的通路参与了神经干细胞与3T3-fGFP细胞的通讯。

关键词：小鼠神经干细胞胞外囊泡 3T3-fGFP细胞网格蛋白介导通路

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重视临床视觉电生理检查的规范应用

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第三军医大学学报 2015年第12期37卷 1174-1177页

作者：李世迎王刚第三军医大学西南医院全军眼科中心视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室

人眼的视网膜受光或图形刺激后,在视觉感受器内引起光化学和光电反应,产生电位改变,形成神经冲动,传给双极细胞,神经节细胞,经视神经、视交叉、视束、外侧膝状体、视放射终止于大脑皮质的距状裂视中枢。

关键词：电生理视网膜视皮层

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非动脉炎性前部缺血性视神经病变的电生理及临床特征分析

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第三军医大学学报 2015年第12期37卷 1208-1212页

作者：王敏王刚李世迎刘勇孟晓红阴正勤第三军医大学西南医院全军眼科中心视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室重庆400038

目的研究非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)的电生理及临床特征。方法收集2013年3月至2014年3月我院确诊为NAION的17例患者28眼,分析其图形视觉诱发电位(PVEP)、荧光素眼底血管造影(FFA)、视野(VF)等临床检查特征。结果 28眼均行P... 详细信息

目的研究非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)的电生理及临床特征。方法收集2013年3月至2014年3月我院确诊为NAION的17例患者28眼,分析其图形视觉诱发电位(PVEP)、荧光素眼底血管造影(FFA)、视野(VF)等临床检查特征。结果 28眼均行PVEP检查,其中21眼P100波幅值在1°或15'空间频率均出现不同程度降低。P100波峰时在1°空间频率5眼中度延迟(>15 ms),其余23眼未见明显延迟或者轻度延迟;15'空间频率时6眼中度延迟(>15 ms),其余22眼峰时未见明显延迟或者轻度延迟(<15 ms)。15患者23眼行FFA检查,其中6患者(40%)患者臂-视网膜循环时间(ART)大于15 s。7眼后期出现高荧光,其余后期呈低荧光。28眼均行视野检查,其中10眼正常,7眼视敏度降低或暗点(4眼集中在生理盲点附近),7眼呈现与生理盲点相连的缺损,4眼残存部分视野。对比分析PVEP和FFA,发现FFA后期高荧光的患眼P100波峰时呈中度以上延迟,后期低荧光患眼的峰时未见明显延迟或轻度延迟。对比分析PVEP和视野,发现14眼VF和PVEP均异常,7眼视野正常时PVEP异常,4眼PVEP正常时而VF异常。结论 NAION的PVEP的P100波峰时大多为正常或轻度延迟,当视乳头水肿、FFA后期视盘高荧光时P100波峰时明显延迟。FFA的ART延长不是NAION的敏感指标。PVEP对于视野正常的患眼有辅助诊断的价值。

关键词：非动脉炎性前部缺血性视神经病变图形视觉诱发电位视野荧光素眼底血管造影

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