检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2003年第1期34卷 49-52页

作者：朱楚洪应大君第三军医大学解剖学教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学室重庆400038

目的　探讨外源性A2 0基因在内皮细胞获得稳定表达的可行性。　方法　将N 末端标记E tag的HA2 0cDNA重组于pCAGGS真核表达载体 ,构建了pCAGGSEHA2 0真核表达重组体。DOTAP脂质体介导的pCAGGSEHA2 0和pMAMneo基因转染 ,经G4 18筛选阳性克... 详细信息

目的　探讨外源性A2 0基因在内皮细胞获得稳定表达的可行性。　方法　将N 末端标记E tag的HA2 0cDNA重组于pCAGGS真核表达载体 ,构建了pCAGGSEHA2 0真核表达重组体。DOTAP脂质体介导的pCAGGSEHA2 0和pMAMneo基因转染 ,经G4 18筛选阳性克隆 ,再用免疫荧光及分子原位杂交检测A2 0基因的表达。　结果　成功构建了pCAGGSEHA2 0真核表达重组体 ,A2 0基因在经G4 18筛选后的内皮细胞中得到有效表达。　结论　在DOTAP脂质体介导下 ,A2

关键词：基因表达转基因 A20基因内皮细胞

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人TRAIL分子胞外区的纯化及活性检测

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中国免疫学杂志 2003年第8期19卷 554-557页

作者：唐蓓何凤田蔡绍皙李蓉芬高会广陈姗周度金重庆大学生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400038 第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的 :利用大肠杆菌表达hTRAIL4 1～ 2 81 蛋白 ,并纯化复性成生物活性形式。方法 :以IPTG诱导表达 ,使用Ni NTA层析柱分离纯化蛋白 ,透析法复性 ,SDS PAGE和Westernblot法进行鉴定 ,DNA断裂实验检测hTRAIL4 1～ 2 81 蛋白的凋亡诱导活... 详细信息

目的 :利用大肠杆菌表达hTRAIL4 1～ 2 81 蛋白 ,并纯化复性成生物活性形式。方法 :以IPTG诱导表达 ,使用Ni NTA层析柱分离纯化蛋白 ,透析法复性 ,SDS PAGE和Westernblot法进行鉴定 ,DNA断裂实验检测hTRAIL4 1～ 2 81 蛋白的凋亡诱导活性。结果 :表达的蛋白以包涵体的形式存在 ,纯化后得到分子量为 30 5kD、纯度在 90 %以上的蛋白 ,Westernblot证实为hTRAIL4 1～ 2 81 分子。经复性 ,DNA断裂实验检测出该蛋白有较好的诱导肿瘤细胞凋亡活性。结论 :成功地利用大肠杆菌表达、Ni NTA层析柱分离纯化、透析法复性hTRAIL4 1～ 2 81 蛋白 ,并证实其具有诱导肿瘤细胞凋亡的生物学活性。

关键词： TRAIL 纯化活性检测大肠杆菌生物学活性

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血液动力学因素对血管重建的影响

引用

重庆大学学报（自然科学版） 2003年第8期26卷 102-105页

作者：王贵学龙天渝应大君重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044 第三军医大学解剖学教研室生物力学与组织工程教育部重点实验室生物力学研究室重庆400038

应力作用下血管的生长与重建是生物力学最具活力的生长点之一。文中旨在评述近年来国内外关于血液动力学因素对血管重建的影响的研究进展,展望未来应力作用与血管重建关系的研究思路和研究重点。最新研究表明,血管系统一生都在进行重建... 详细信息

应力作用下血管的生长与重建是生物力学最具活力的生长点之一。文中旨在评述近年来国内外关于血液动力学因素对血管重建的影响的研究进展,展望未来应力作用与血管重建关系的研究思路和研究重点。最新研究表明,血管系统一生都在进行重建。血管重建正被视为动脉粥样硬化、高血压的发病机理的内在因素。血液动力学因素在血管重建中起着重要的作用,它们通过影响内皮细胞的形态、骨架结构、迁移、增殖和凋亡,影响脂蛋白和其它大分子物质在血管壁的吸收和代谢,调节血管活性物质的合成、分泌及表达等,进而影响血管的结构和功能重建。今后重点在于采用多种离体和在体的实验模型,模拟多种力、复杂流动对血管重建的影响,研究血管在应力作用下结构和功能重建所依据的分子生物学基础和启动血管重建的剪应力反应元件的内在机制。

关键词：血液动力学因素血管重建动脉粥样硬化高血压

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TGFβ_1基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响研究

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生物医学工程学杂志 2003年第4期20卷 597-600页

作者：朱楚洪应大君朱星红糜建红董世武秦健第三军医大学解剖教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学研究室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044

了解 TGFβ1 基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响。用 DOTAP脂质体转染p MAMneo TGFβ1 于原代培养的血管平滑肌细胞 ,经 G4 18筛选 ,TGFβ1 表达经免疫荧光鉴定。原位杂交确定弹性蛋白的表达 ,微管吸吮系统确定平... 详细信息

了解 TGFβ1 基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响。用 DOTAP脂质体转染p MAMneo TGFβ1 于原代培养的血管平滑肌细胞 ,经 G4 18筛选 ,TGFβ1 表达经免疫荧光鉴定。原位杂交确定弹性蛋白的表达 ,微管吸吮系统确定平滑肌细胞与基质的黏附力。结果表明生理情况下的平滑肌细胞能表达少量的TGFβ1 及少量的原弹性蛋白。经 G4 18筛选 ,外源性 TGFβ1 在血管平滑肌细胞中稳定表达 ,能显著提高 2～ 3倍原弹性蛋白的表达及细胞与基质的黏附力。说明 TGFβ1

关键词： TGFβl基因血管平滑肌细胞弹性蛋白表达黏附力影响

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A20基因抑制人平滑肌细胞损伤的实验研究

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中国临床康复 2003年第29期7卷 3936-3937,T002页

作者：朱楚洪应大君糜建红董世武张伟解放军第三军医大学解剖教研室生物力学与组织工程教育部重点实验室生物力学室重庆市400038

目的:探讨外源性锌指蛋白家族中A20基因对氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞同型半胱氨酸蛋白酶Caspase3表达和凋亡的影响,为预防和治疗动脉粥样硬化提供依据。方法:DOTAP脂质体转染pEGFPEHA20-N1于原代培养的平滑肌细胞,经G418筛选,A2... 详细信息

目的:探讨外源性锌指蛋白家族中A20基因对氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞同型半胱氨酸蛋白酶Caspase3表达和凋亡的影响,为预防和治疗动脉粥样硬化提供依据。方法:DOTAP脂质体转染pEGFPEHA20-N1于原代培养的平滑肌细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定。Tunnel原位末端标记法、原位杂交检测转染前后氧化型低密度脂蛋白诱导平滑肌细胞凋亡情况及Caspase3的表达情况。结果:A20基因在平滑肌细胞得到有效表达,正常对照组及转染A20基因组人平滑肌细胞凋亡为(3±1)%,氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlow-densitylipoprotein,OxLDL)作用后对照组与转染A20基因组凋亡分别为(16±2)%,(5±1)%,两者相差显著(P<0.05)。A20基因能显著抑制OXLDL诱导的平滑肌细胞Caspase3的表达。结论:A20基因在动脉粥样硬化后期能阻止平滑肌细胞凋亡,对防止粥样癍块破裂的治疗中可能有一定作用。

关键词： A20基因平滑肌细胞氧化修饰低密度脂蛋白动脉粥样硬化 As 0xLDL 治疗

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小鼠Osf2/Cbfa1基因的重组腺病毒构建及鉴定

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第三军医大学学报 2003年第21期25卷 1947-1950页

作者：董世武应大君刘光久朱楚洪张伟第三军医大学基础医学部解剖学教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学研究室重庆400038

目的构建小鼠Osf2/Cbfa1基因的重组腺病毒载体,并观察其对NIH3T3细胞的感染情况。方法采用基因工程技术,经过2次亚克隆将Osf2/Cbfa1基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组后,脂质体转染293T细胞包装... 详细信息

目的构建小鼠Osf2/Cbfa1基因的重组腺病毒载体,并观察其对NIH3T3细胞的感染情况。方法采用基因工程技术,经过2次亚克隆将Osf2/Cbfa1基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组后,脂质体转染293T细胞包装、扩增,将重组腺病毒对成纤维细胞株NIH3T3进行感染。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测。结果酶切鉴定及PCR结果证明Osf2/Cbfa1基因重组腺病毒载体成功,病毒滴度达(1.6×1012)pfu/ml,并对NIH3T3细胞有很强感染能力。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含小鼠Osf2/Cbfa1基因的重组腺病毒载体。

关键词：腺病毒 Osf2/Cbfal基因同源重组

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机械拉伸下人肺上皮细胞增殖及整联蛋白再分布

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第三军医大学学报 2003年第14期25卷 1254-1257页

作者：张惠静杨力蔡绍皙卢晓王远亮第三军医大学医学检验系分析化学教研室重庆400038 Department of Bioengineering and Orthopedics University of CaliforniaSan DiegoCA 92093-0656USA 重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044

目的　探讨机械拉伸应变对人肺上皮细胞增殖及其膜受体———整联蛋白α5、β1 再分布的调控作用。方法　建立体外周期性拉伸装置 ,应用流式细胞术测定细胞的增殖活性 ,激光共聚焦显微镜分析整联蛋白α5、β1 再分布。结果　在应变为 15... 详细信息

目的　探讨机械拉伸应变对人肺上皮细胞增殖及其膜受体———整联蛋白α5、β1 再分布的调控作用。方法　建立体外周期性拉伸装置 ,应用流式细胞术测定细胞的增殖活性 ,激光共聚焦显微镜分析整联蛋白α5、β1 再分布。结果　在应变为 15 % ,频率为 2 0次 min、40次 min的拉伸刺激下 ,2 4h后 ,细胞的增殖活性指数明显降低 ,H72 7细胞的DNA合成受到显著抑制。在 40次 min的拉伸频率下 ,整联蛋白α5、β1 的分布发生重组并向基底层转移 ,形成局部粘附连接。结论　整联蛋白α5、β1

关键词：机械应力人肺上皮细胞整联蛋白粘着斑

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c-myc、bcl-2在原发性肝癌中表达的观察与分析

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第三军医大学学报 2003年第9期25卷 769-769,773页

作者：余昌中应大君林晨郑树国马宽生第三军医大学基础医学部解剖学教研室国家教育部生物力学与组织工程学重点实验室力学研究室重庆400038 中国医学科学院肿瘤研究所第三军医大学附属西南医院全军肝胆外科研究所西南肝胆外科医院

肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）的发生发展与原癌基因的异常激活密切相关。原癌基因c-myc、bcl-2在肝癌发生中起重要作用。本研究采用免疫组化法检测两种癌基因在肝癌组织中表达，探讨二者在肝癌发生发展中的应用。

关键词：原发性肝癌 c-myc bcl-2 免疫组化法原癌基因

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TRAIL的研究进展

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生命的化学 2003年第3期23卷 174-177页

作者：唐蓓蔡绍皙何凤田重庆大学生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044 第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

TRAIL(TNF relatedapoptosis inducingligand)是TNF家族新成员 ,它在细胞凋亡中介导一个非常复杂的信号调控与转导过程 ,在这一过程中 ,NF κB和p5 3发挥了很重要的调节作用。TRAIL亦能诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞没有显著细胞毒... 详细信息

TRAIL(TNF relatedapoptosis inducingligand)是TNF家族新成员 ,它在细胞凋亡中介导一个非常复杂的信号调控与转导过程 ,在这一过程中 ,NF κB和p5 3发挥了很重要的调节作用。TRAIL亦能诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞没有显著细胞毒性 ,可能成为一新的抗肿瘤药物。本文介绍了其在结构、生理功能。

关键词： TRAIL 功能表达调控凋亡机制

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人TRAIL分子胞外区的克隆及新型表达载体的构建

引用

重庆医学 2003年第3期32卷 327-329页

作者：唐蓓何凤田蔡绍皙李蓉芬高会广陈姗陈敏第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 重庆大学生物力学与组织工程教育部重点实验室 400044

目的　利用基因工程技术克隆人TRAIL分子胞外区 4 1～ 2 81片断的cDNA ,构建其原核表达载体 ,从而建立原核表达体系。方法　采用RT PCR方法从人早幼粒白血病细胞系HL 6 0的总RNA中扩增TRAIL分子 4 1～ 2 81片断的cDNA ,以限制性酶切和DN... 详细信息

目的　利用基因工程技术克隆人TRAIL分子胞外区 4 1～ 2 81片断的cDNA ,构建其原核表达载体 ,从而建立原核表达体系。方法　采用RT PCR方法从人早幼粒白血病细胞系HL 6 0的总RNA中扩增TRAIL分子 4 1～ 2 81片断的cDNA ,以限制性酶切和DNA测序进行鉴定 ,并将目的片断克隆至原核表达载体pQE 80L。结果　克隆到人TRAIL分子 4 1～ 2 81片断的cDNA ,DNA测序结果与报道的完全一致 ;构建了该片断的原核表达载体 ,为后续基因工程研究打下了基础。结论　成功克隆人TRALL分子4 1～ 2 81片断的cDNA并构建了其原核表达载体。

关键词： TRAIL 克隆原核表达

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