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第三军医大学学报 2018年第2期40卷 97-102页

作者：姚元江吴永慧高继宁王琳杰关东伟米俊伟陈冰肖志峰赵燕南戴建武陆军军医大学(第三军医大学)基础医学部神经生物学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学院全军复合伤研究所重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆生物材料与再生医学工程技术中心重庆400038 中国科学院遗传与发育生物学研究所分子发育生物学国家重点实验室北京100101

目的探讨纳米金颗粒(gold nanoparticles,AuNP)运载神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)透皮的效果及其对皮下神经的作用,以开发具有透皮作用的纳米金载药体系。方法通过共价偶联方式,将His标记的NT3与纳米金共价偶联,应用于动物皮肤组... 详细信息

目的探讨纳米金颗粒(gold nanoparticles,AuNP)运载神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT3)透皮的效果及其对皮下神经的作用,以开发具有透皮作用的纳米金载药体系。方法通过共价偶联方式,将His标记的NT3与纳米金共价偶联,应用于动物皮肤组织。实验分为空白对照组、金纳米颗粒与牛血清蛋白结合(AuNP-CONH-BSA)组、金纳米颗粒与NT3结合(AuNP-CONH-NT3)组和NT3注射组。利用抗His抗体进行免疫组化分析其透皮效果,同时利用免疫组化对神经丝蛋白(neuropeptide,NF200)阳性细胞进行检测,分析载药体系对皮下神经的作用。结果透皮24 h后免疫组化分析结果显示,在实验组AuNP-CONH-NT3组和NT3注射组中均检测到了NT3,而空白对照组和AuNP-CONH-BSA组中则未检测到;在透皮1个月和3个月免疫组化分析结果显示,AuNP-CONH-NT3组NF200阳性细胞数量所占百分比明显高于空白对照组和AuNP-CONH-BSA组(P<0.01),而与NT3注射组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论构建的AuNP-CONH-NT3具有很好的透皮效果,可以促进神经再生。

关键词：载药金纳米粒子神经营养因子-3 透皮

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照前给予去甲肾上腺素增强电离辐射对小鼠血小板生成能力的损伤作用

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 724-730页

作者：李凤菊杜长虹杨可雷鑫汤勇陈石磊许杨王军平第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室、重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的探讨去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对电离辐射(ionizing radiation,IR)损伤小鼠血小板水平的影响作用。方法 80只健康雄性C57BL/6小鼠按完全随机的方法分为未辐射对照组(PBS)、未辐射给药组(NE)、辐射对照组(PBS+IR)和辐射给药组... 详细信息

目的探讨去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对电离辐射(ionizing radiation,IR)损伤小鼠血小板水平的影响作用。方法 80只健康雄性C57BL/6小鼠按完全随机的方法分为未辐射对照组(PBS)、未辐射给药组(NE)、辐射对照组(PBS+IR)和辐射给药组(NE+IR),每组20只小鼠。给药组给予腹腔注射NE(1.5 mg/kg),对照组给予腹腔注射等体积PBS,处理24 h后辐射组进行全身一次性6 Gyγ射线照射。辐射后不同时间点尾静脉采血检测小鼠血常规,并于辐射后第9天使用HE染色观察小鼠骨髓变化,流式细胞术分析小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)比例变化以及巨核细胞凋亡、周期的变化。结果未辐射时,NE组小鼠给药后3~10 d血小板数量显著高于PBS组(P<0.05);HSCs占骨髓Lineage细胞的比例:NE组为(1.44±0.08)%,PBS组为(1.05±0.10)%,两组差异具有统计学意义(P<0.05);同时,NE也具有促进离体培养小鼠HSCs的增殖,并且在药物浓度100 nmol/m L的范围内具有剂量效应依赖关系;HE染色显示,NE组的骨髓有核细胞和巨核细胞数目显著高于PBS组(P<0.05);巨核系祖细胞周期的结果显示,NE组G0/G1期细胞百分比减少约(12.10±3.12)%、S期细胞比例增加约(8.78±1.05)%,与PBS组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。辐射后,NE+IR组小鼠7~25d血小板数量低于PBS+IR组(P<0.05);HSCs占骨髓Lineage细胞的比例:NE+IR组为(0.07±0.01)%,PBS+IR组为(0.27±0.03)%,两组差异具有统计学意义(P<0.05);HE染色结果显示,NE+IR组的骨髓有核细胞和巨核细胞数目显著低于PBS+IR组(P<0.05);巨核祖细胞凋亡结果显示,NE+IR组凋亡率为(84.46±5.09)%,明显高于PBS+IR组[(54.18±3.18)%,(P<0.05)]。结论去甲肾上腺素使造血干细胞、巨核祖细胞过度活化,从而增加了小鼠对电离辐射的敏感性,使血小板生成减少。

关键词：去甲肾上腺素血小板辐射损伤

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机械创伤诱导皮肤成纤维细胞去分化的实验研究

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感染．炎症．修复 2017年第2期18卷 84-89,129,130页

作者：陈泽林史春梦第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的:研究机械创伤是否能诱导皮肤成纤维细胞发生去分化。方法:建立体外培养细胞划痕损伤模型和体内全层皮肤损伤模型,应用免疫荧光染色、免疫组织化学、蛋白质印迹、转录组测序、si RNA等方法,检测机械创伤后成纤维细胞的形态、增殖情... 详细信息

目的:研究机械创伤是否能诱导皮肤成纤维细胞发生去分化。方法:建立体外培养细胞划痕损伤模型和体内全层皮肤损伤模型,应用免疫荧光染色、免疫组织化学、蛋白质印迹、转录组测序、si RNA等方法,检测机械创伤后成纤维细胞的形态、增殖情况、干细胞相关标志物的表达、集落形成能力、表达谱等的变化。结果:机械创伤后成纤维细胞逐渐变小变圆,发生类干细胞形态转变,并于创伤后36 h被激活而发生明显增殖,且创伤后成纤维细胞的激活不受创伤严重程度的影响。机械创伤后成纤维细胞中的干细胞标志物Sox2、波形蛋白的表达明显增强,集落形成能力也明显提高。体内实验也发现创面肉芽组织中出现大量Sox2阳性细胞。表达谱分析发现成纤维细胞的多能干细胞通路及相关调控分子表达明显增强。机械划痕后2 h创缘成纤维细胞中的总β-catenin和ser 675磷酸化的β-catenin的表达较对照组明显增强;应用β-catenin si RNA抑制成纤维细胞内的β-catenin表达后,机械创伤后创缘成纤维细胞中的Sox2阳性细胞几乎消失。结论:机械创伤可诱导皮肤成纤维细胞的去分化;β-catenin介导了机械创伤后成纤维细胞的去分化过程。

关键词：成纤维细胞去分化机械创伤

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单宁酸对电离辐射所致巨核细胞损伤的保护作用

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第三军医大学学报 2015年第7期37卷 638-642页

作者：吴苏南许杨陈石磊申明强陈芳陈默张舟王崧粟永萍程天民王军平第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的研究单宁酸(tannic acid,TA)对电离辐射所致巨核细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法体外培养巨核细胞株M07e,经0、0.5、1、2.5、5、10μg/m L单宁酸预处理后给予10 Gy60Coγ射线照射,继续培养不同时间,采用MTT法、荧光酶标... 详细信息

目的研究单宁酸(tannic acid,TA)对电离辐射所致巨核细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法体外培养巨核细胞株M07e,经0、0.5、1、2.5、5、10μg/m L单宁酸预处理后给予10 Gy60Coγ射线照射,继续培养不同时间,采用MTT法、荧光酶标仪检测法和流式细胞术检测技术分别检测细胞存活率、活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和凋亡率变化。给予BALB/c小鼠5 Gy60Coγ射线全身一次性照射,复制急性放射损伤实验动物模型,设置生理盐水对照组和TA灌胃预处理组,通过尾静脉外周血常规检测和骨髓病理切片观察,分析血小板水平和骨髓巨核细胞数目变化情况。结果 TA能够剂量依赖性地提高受照巨核细胞的存活率;与单纯辐照组相比,TA预处理可以显著降低细胞内总ROS水平(P<0.01)、提高细胞线粒体膜电位(P<0.05)和降低细胞凋亡率(P<0.05)。动物实验结果显示,TA预处理能够显著抑制辐射损伤引起的骨髓巨核细胞数量减少,照后第7、12、15、19天时TA处理组血小板水平显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论 TA对电离辐射所致巨核细胞损伤具有显著保护作用,其作用机制可能与其突出的抗氧化应激活性有关。

关键词：单宁酸巨核细胞血小板辐射损伤

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电离辐射对小鼠肠道隐窝素4表达的影响及意义

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第三军医大学学报 2015年第4期37卷 330-334页

作者：曹乐王成申明强王艾平陈芳耿放陈默张乃心粟永萍程天民王军平第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所防原医学教研室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的检测小鼠受电离辐射后隐窝素4(cryptdin 4,Crp4)的表达变化,探讨其在电离辐射肠损伤中的生物学意义。方法 8周龄BALB/c小鼠采用随机数字表法分为两组,未辐照组(n=5)和辐照组(n=15),辐照组给予8 Gy X射线全身一次性照射,分别于照后9... 详细信息

目的检测小鼠受电离辐射后隐窝素4(cryptdin 4,Crp4)的表达变化,探讨其在电离辐射肠损伤中的生物学意义。方法 8周龄BALB/c小鼠采用随机数字表法分为两组,未辐照组(n=5)和辐照组(n=15),辐照组给予8 Gy X射线全身一次性照射,分别于照后9、24、72 h取小鼠小肠组织和眼球血。免疫组织化学染色和Western blot分析小鼠小肠Paneth细胞隐窝素Crp4的表达变化,鲎试剂法检测小鼠血清LPS水平。化学合成Crp4多肽,采用涂布克隆计数法分析Crp4对肠道条件致病菌(大肠杆菌、粪肠球菌)和益生菌(乳酸杆菌、双歧杆菌)的抗菌活性;同时,观察Crp4对LPS诱导促炎因子IL-1β生成的影响。结果与对照组相比,小鼠电离辐射后小肠Crp4表达水平升高,72 h升高尤为显著(P<0.01);辐照小鼠血清LPS含量在9 h后显著增加(P<0.05),72 h后升高最为明显(P<0.01);Crp4对条件致病菌(大肠杆菌、粪肠球菌)的抗菌活性显著强于益生菌(乳酸杆菌、双歧杆菌),并能抑制LPS诱导单核巨噬细胞IL-1β的生成(P<0.01)。结论电离辐射可以诱导小鼠肠道隐窝素Crp4的表达上调,Crp4表达上调可发挥调节肠道菌群、减轻机体炎症反应的作用。

关键词：电离辐射隐窝素4 抗菌 LPS IL-1β

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便携式γ能谱仪快速鉴定低放射性活度贫铀

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中华放射医学与防护杂志 2015年第3期35卷 217-221页

作者：俞涛刘晶任泂郝玉徽李蓉第三军医大学军事预防医学院复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的探索便携式γ能谱仪快速鉴定低放射性活度贫铀可行性和所需的基本条件.方法取5 g贫铀样品,使用高纯锗γ能谱仪进行分析,鉴定核素种类,计算核素百分含量.运用便携式γ能谱仪,对同一批次样品鉴定,样品质量为1 g,模拟战、现场条件,... 详细信息

目的探索便携式γ能谱仪快速鉴定低放射性活度贫铀可行性和所需的基本条件.方法取5 g贫铀样品,使用高纯锗γ能谱仪进行分析,鉴定核素种类,计算核素百分含量.运用便携式γ能谱仪,对同一批次样品鉴定,样品质量为1 g,模拟战、现场条件,按不同比例加入0～5g普通泥土,密封,测量距离为1 ～5 cm,能谱采集时间为1～ 10 min,结果以样品中238U、235U核素活度表示,将其换算成比活度,计算235U在铀同位素中的百分含量,若小于0.718％,则确定为贫铀.结果便携式γ能谱仪检测出238U的条件是样品质量≥0.5g,测量距离0.5 ～5 cm;但检测出235U的条件必须是质量≥1 g,测量距离≤1 cm.在可同时检测出238U与235U时,经计算235U百分含量均小于0.718％,判定为贫铀样品.结论便携式γ能谱仪可快速对低放射性活度贫铀获得能谱,鉴定核素种类,结论与高纯锗能谱仪、α谱仪和ICP-MS一致.

关键词：便携式γ能谱贫铀鉴定

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Ghrelin对放烧复合伤大鼠的救治作用

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 213-216页

作者：刘聪李宏李蓉粟永萍第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的探索Ghrelin对放烧复合伤大鼠是否具有救治作用,并对其产生救治作用的可能机制做初步研究。方法 120只清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组:正常组(Con)、单纯Ghrelin处理组(GHR,即对正常大鼠腹腔注射Ghrelin)、放烧复合伤组(CRB... 详细信息

目的探索Ghrelin对放烧复合伤大鼠是否具有救治作用,并对其产生救治作用的可能机制做初步研究。方法 120只清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组:正常组(Con)、单纯Ghrelin处理组(GHR,即对正常大鼠腹腔注射Ghrelin)、放烧复合伤组(CRBI,5 Gy全身均匀照射+15%全身体表面积皮肤Ⅲ度烧伤)、Ghrelin治疗组(CRBI+GHR),GHR每天1次,连续5 d腹腔注射,剂量3.37×10-2mg/kg,每组30只。观察项目包括:①大鼠30 d存活率;②造血功能:7、14、21 d外周血象和第10天脾结节形成实验、脾脏指数、骨髓有核细胞计数;③最后1次给药后2、4、6 h血清中炎性介质TNF-α、IL-6,神经递质乙酰胆碱(ACH),肾上腺素(E)及皮质醇(Cor)的含量。结果 Ghrelin可显著提高CRBI动物存活率(约25%);与CRBI组相比可显著提高第7天外周血中WBC计数(P<0.05),第10天骨髓有核细胞计数亦明显高于CRBI组,但在脾结节及脾脏指数方面尚未观察到显著差异(P>0.05);与CRBI组相比,还可使伤后第4天血清中TNF-α及IL-6含量降低(P<0.05),乙酰胆碱总体含量降低(P<0.05),肾上腺素及皮质醇水平下降(P<0.05)。结论 Ghrelin对放烧复合伤大鼠具有一定的救治作用,其作用的发挥可能与其减轻造血功能抑制,下调促炎介质水平并调节植物神经系统的兴奋性有关。

关键词：放烧复合伤 Ghrelin 救治作用

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Ghrelin与炎症性疾病的研究进展

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重庆医学 2014年第4期43卷 489-492页

作者：刘聪李蓉第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所/创伤烧伤与复合伤国家重点实验室/重庆市纳米医药工程技术研究中心 400030

自Ghrelin在1999年最终被日本科学家Kojima等用免疫组织化学的方法从大鼠胃组织中提取出来以来，各国科学家对Ghrelin已进行了深入而广泛的研究，其结构和生理功能得到了更多阐释并在临床某些疾病的治疗中发挥了一定作用。如肥胖症、厌... 详细信息

自Ghrelin在1999年最终被日本科学家Kojima等用免疫组织化学的方法从大鼠胃组织中提取出来以来，各国科学家对Ghrelin已进行了深入而广泛的研究，其结构和生理功能得到了更多阐释并在临床某些疾病的治疗中发挥了一定作用。如肥胖症、厌食症、糖尿病、消化系统及心血管系统疾病等，其中与炎症性疾病的关系最为密切，故本文拟从该角度作一综述。

关键词：炎症性疾病研究进展

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类固醇受体辅激活因子3的促瘤作用研究

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医学综述 2014年第5期20卷 819-822页

作者：金婕(综述) 粟永萍(审校) 第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

类固醇受体辅激活因子3(SRC-3)是一类与转录激活有关的蛋白辅助因子,通过与激素激活的核受体和其他一些特定的转录因子结合,参与调控机体的生长发育、能量代谢、细胞增殖、存活以及迁徙等过程。近年来,SRC-3广泛的促瘤作用更成为研究热... 详细信息

类固醇受体辅激活因子3(SRC-3)是一类与转录激活有关的蛋白辅助因子,通过与激素激活的核受体和其他一些特定的转录因子结合,参与调控机体的生长发育、能量代谢、细胞增殖、存活以及迁徙等过程。近年来,SRC-3广泛的促瘤作用更成为研究热点。SRC-3蛋白不仅与核受体相互作用,还与多种转录因子结合,通过多条信号通路促进靶基因的转录,进而调控细胞生长、促进细胞增殖,在一些激素相关和非激素相关的癌症中发挥促瘤作用。该文就SRC-3作为促癌因子与肿瘤的相关性及其促增殖途径予以综述。

关键词：类固醇受体辅激活因子3 转录激活促瘤增殖

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^(125)I标记重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内分布的实验研究

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局解手术学杂志 2014年第3期23卷 221-224页

作者：申明强陈默王崧粟永萍王军平第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的研究重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内的分布情况,明确其是否具有靶向分布特点。方法实验室制备dTMP-GH重组融合蛋白;用放射性125I标记融合蛋白dTMP-GH后,按100μg/kg的标准小鼠尾静脉注射125I-dTMP-GH,分别于给药后5 min、15 min、30... 详细信息

目的研究重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内的分布情况,明确其是否具有靶向分布特点。方法实验室制备dTMP-GH重组融合蛋白;用放射性125I标记融合蛋白dTMP-GH后,按100μg/kg的标准小鼠尾静脉注射125I-dTMP-GH,分别于给药后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取心、肝、脾、肾、股骨、甲状腺等进行放射性计数。结果制备得到纯度大于98%的重组融合蛋白dTMP-GH;125I标记率为71.53%,放化纯度为96.53%,比活度为0.22 MBq/μl;尾静脉注射125I标记的dTMPGH后30 min股骨的放射性计数占到注射总量的10%,并随时间推移经肝脏和肾脏代谢。结论融合蛋白dTMP-GH经尾静脉注射后在小鼠体内主要分布于骨髓,具有骨髓组织偏向分布特点。

关键词： 125I标记 dTMP-GH 血小板小鼠

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