目的初步探讨TC2N基因对皮肤黑色素瘤(skin cutaneous melanoma,SKCM)发生的影响及其作用机制。方法使用人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas,HPA)和肿瘤基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析TC2N在SKCM中的表达及与...
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目的初步探讨TC2N基因对皮肤黑色素瘤(skin cutaneous melanoma,SKCM)发生的影响及其作用机制。方法使用人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas,HPA)和肿瘤基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析TC2N在SKCM中的表达及与临床病理特征的关系。利用人黑色素瘤A375构建TC2N基因的过表达细胞模型,采用CCK-8法检测TC2N在细胞增殖中的作用。利用TC2N基因敲除小鼠构建皮肤黑色素移植瘤模型,观察并测量移植瘤的生长,通过免疫组化测定Ki67在移植瘤组织中的表达,分析肿瘤细胞的增殖。此外,进行基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)探索TC2N表达与ERK/MAPK信号通路的相关性,并利用RT-qPCR和Western blot法检测相关基因CyclinD1、c-Myc、CDK2和CyclinE1在体内外的mRNA及蛋白表达水平。结果与正常皮肤组织比较,SKCM组织中TC2N的表达水平更高,且TC2N基因的高表达与SKCM患者的临床病理分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。体外细胞实验发现,过表达TC2N基因后,A375细胞的增殖能力显著增加(P<0.05)。敲除小鼠皮下移植瘤模型结果显示,与TC2N^(+/+)小鼠比较,TC2N-/-小鼠肿瘤质量和体积明显降低(P<0.05),提示TC2N基因敲除后显著抑制SKCM的生长。GSEA富集分析提示TC2N与MAPK信号通路显著相关(P<0.01),且TC2N基因与ERK/MAPK下游基因表达呈正相关(P<0.01)。体内外实验均发现,TC2N表达显著促进ERK与p-ERK表达,且影响ERK相关分子CyclinD1、c-Myc、CDK2和CyclinE1的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01)。结论TC2N基因可能通过激活ERK/MAPK信号通路促进皮肤黑色素瘤的生长。
目的比较天然矿物质水平不同的5种饮水对发育期大鼠骨骼生长的影响。方法 50只3周龄断乳SD大鼠适应性喂养1周后,按随机数字表法分为5组,分别饮用自来水(tap water,TP)、天然水(natural water,NW)、纯净水(purified water,PW)、天然矿泉水1(natural mineral water 1,NMW1)、天然矿泉水2(natural mineral water 2,NMW2),自由饮水及进食,喂养13周。每周测定大鼠体质量。实验结束后,取腹主动脉血分离血清,酶联免疫吸附法(ELISA)测定骨代谢生化指标;取左侧股骨,进行Micro-CT扫描及三维重建,观察松质骨骨微结构及检测相关参数,并采用三点弯曲法进行生物力学测定。指标各组间比较采用单因素方差分析,相关性采用Spearman相关性分析。结果与PW组相比,TP和NMW1、NMW2组的骨转换指标骨钙素(osteocalcin,OC)显著升高(P<0.05)。与NW和PW组比较,NMW1和NMW2组的骨小梁强度增加,表现为骨表面积密度(bone surface/volume ratio,BS/BV)显著降低(P<0.05),其余各指标组间差异无统计学意义。OC与水中溶解性总固体(total dissolved solids,TDS)、钙(Ca;)、镁(Mg;)、钾(K;)呈正相关(r>0.5,P<0.05);BS/BV与TDS、Ca;、Mg;、K;呈负相关(r<-0.5,P<0.05)。结论发育期大鼠长期饮用自来水和天然水后骨生长的差别不明显;饮用纯净水后骨生长水平较低,而饮用富含矿物质的天然矿泉水后对骨骼生长较有利。骨钙素和骨小梁强度的变化对水质较为敏感。
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