检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2006年第15期28卷 1575-1577页

作者：谭新杰胡长林蔡文琴杨忠重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的初步探讨脑缺血后神经元前体细胞的发生机制。方法建立一侧大脑中动脉缺血再灌注模型,应用神经元前体细胞的标志物DCX(Doub lecortin)检测缺血再灌注后不同时相点海马齿状回神经元前体细胞的增殖情况。结果再灌注后第7天梗死侧及非... 详细信息

目的初步探讨脑缺血后神经元前体细胞的发生机制。方法建立一侧大脑中动脉缺血再灌注模型,应用神经元前体细胞的标志物DCX(Doub lecortin)检测缺血再灌注后不同时相点海马齿状回神经元前体细胞的增殖情况。结果再灌注后第7天梗死侧及非梗死侧齿状回DCX阳性细胞数达到最高峰,与相应假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);同时各个时相点梗死侧与非梗死侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05);再灌注后第21天双侧齿状回DCX阳性细胞数基本恢复至正常水平。结论局灶性脑缺血可以诱导成年大鼠神经元前体细胞的发生,这对于脑缺血后的神经修复可能起关键性作用;其机制可能是缺血区域产生的一些神经发生调节因子弥散到神经发生区域所致。

关键词：大脑中动脉栓塞再灌注神经元前体细胞:齿状回

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新生大鼠海马神经干细胞的分离、培养、分化和鉴定

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国际脑血管病杂志 2006年第2期14卷 107-109页

作者：谭新杰胡长林蔡文琴重庆医科大学附属第二医院神经内科 400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的:探讨从新生大鼠海马分离神经干细胞并进一步培养、诱导分化和鉴定的可行性。方法:分离出生1d大鼠海马,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果... 详细信息

目的:探讨从新生大鼠海马分离神经干细胞并进一步培养、诱导分化和鉴定的可行性。方法:分离出生1d大鼠海马,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果:从新生大鼠海马分离的细胞呈巢蛋白免疫阳性并能在体外传代培养和连续形成克隆;血清诱导分化后的细胞可分别表达神经元和星形胶质细胞的特异性抗原β-微管蛋白Ⅲ和神经胶质原纤维酸性蛋白。结论:分离和培养的细胞能表达神经干细胞的特异性标志物巢蛋白,并且具有很强的增殖能力和多向分化潜能,说明新生大鼠海马存在神经干细胞,并可用于进一步的实验研究。

关键词：神经干细胞分离培养分化鉴定大鼠

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PC12-Mint2基因工程细胞株的构建

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第二军医大学学报 2005年第2期26卷 214-216页

作者：张骐张勇曹莉刘翾矫力何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的:构建稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达质粒peDNA3.1A-Mint2;采用脂质体Lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选抗性克隆,... 详细信息

目的:构建稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达质粒peDNA3.1A-Mint2;采用脂质体Lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选抗性克隆,有血清培养并传代具有G418抗性的细胞,数代培养后获得工程细胞株;分别提取野生型PC12细胞和PC12-Mint2工程细胞的mRNA及细胞裂解液,RT-PCR方法检测Mint2基因是否整合入PC12细胞基因组,并用West-ern印迹法检测外源基因Mint2在PC12-Mint2工程细胞中是否正常表达。结果:扩增出的基因片段大小为2 253 bp;pcDNA3.1A-Mint2重组质粒酶切结果表明Mint2基因正确地插入到pcDNA3.1A载体中,测序结果正确;将peDNA3.1A-Mint2转染PC12细胞,经G418筛选获得PC12-Mint2工程细胞株;RT-PCR结果表明Mint2基因已整合入PC12细胞,Western印迹结果显示在120 000处有特异条带,大小与Mint2蛋白理论计算值一致,表明在PC12-Mint2基因工程细胞中确实有Mint2蛋白表达。结论:本试验成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Mint2,并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株,为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础。

关键词：基因亚克隆 Mint2 PC12细胞转染 Western印迹法

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新生大鼠大脑皮质神经干细胞的分离培养与胆碱能神经元的鉴定

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第二军医大学学报 2005年第2期26卷 139-142页

作者：毕晓莹丁素菊娄淑杰曹莉徐晓辉陶沂黎佳思第二军医大学长海医院神经内科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的:体外分离和培养新生大鼠大脑皮质神经干细胞并进行鉴定,为用于脑梗死动物模型梗死区移植细胞作准备。方法:分离新生大鼠皮质神经干细胞,进行体外培养,使用免疫细胞荧光染色技术对细胞的特性进行鉴定,并对细胞的胆碱能特征进行鉴定... 详细信息

目的:体外分离和培养新生大鼠大脑皮质神经干细胞并进行鉴定,为用于脑梗死动物模型梗死区移植细胞作准备。方法:分离新生大鼠皮质神经干细胞,进行体外培养,使用免疫细胞荧光染色技术对细胞的特性进行鉴定,并对细胞的胆碱能特征进行鉴定。结果:获得了Nestin阳性的神经干细胞,其分化后可获得MAP 2、GFAP和CNPase阳性的神经元、星形胶质细胞和寡突胶质细胞;通过胆碱能鉴定发现大脑皮质干细胞可分化为胆碱能神经元。结论:体外分离和培养的大脑皮质神经干细胞具有增殖分化的能力,并可以分化为胆碱能神经元,有望应用于皮质损伤后认知障碍及运动障碍的细胞移植治疗。

关键词：神经干细胞皮质胆碱能神经元分离培养

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成年大鼠局灶性脑梗死后神经元前体细胞的迁移研究

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2242-2244页

作者：谭新杰胡长林蔡文琴杨忠重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400010 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

目的探讨成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注后梗死灶周神经元前体细胞的迁移特征。方法建立一侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型,应用免疫组化及细胞记数检测缺血再灌注后1、7、14、21 d梗死灶周神经元前体细胞的变化。结果各个时相点的... 详细信息

目的探讨成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注后梗死灶周神经元前体细胞的迁移特征。方法建立一侧大脑中动脉栓塞缺血再灌注模型,应用免疫组化及细胞记数检测缺血再灌注后1、7、14、21 d梗死灶周神经元前体细胞的变化。结果各个时相点的梗死灶周均可见神经元前体细胞;在缺血再灌注后第7天阳性细胞的数量达到高峰,随后逐渐下降;但在梗死区域的镜像区域未见到阳性细胞的表达。结论成年大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注可激活神经元前体细胞的发生,并诱导神经元前体细胞朝着梗死区域迁移。

关键词：神经元前体细胞大脑中动脉栓塞缺血再灌注迁移

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睫状神经营养因子对毒胡萝卜素所致大鼠海马神经元[Ca^(2+)]_i升高的抑制作用

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 1057-1060页

作者：王宗文严进李萍路长林蒋春雷倪鑫第二军医大学护理系心理学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 第二军医大学海军医学系航海医学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部生理学教研室上海200433

目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对内质网钙泵特异性抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)引起海马神经元内胞质游离Ca2+浓度([Ca2+]i)升高的抑制作用。方法:出生24 h以内SD大鼠海马神经元原代培养10~14 d备用,以活细胞内荧光探针Frua2/A... 详细信息

目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对内质网钙泵特异性抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)引起海马神经元内胞质游离Ca2+浓度([Ca2+]i)升高的抑制作用。方法:出生24 h以内SD大鼠海马神经元原代培养10~14 d备用,以活细胞内荧光探针Frua2/AM实时检测[Ca2+]i。实验分3组:A组(n=20),EGTA(3 mmol/L);B组(n=40),EGTA(3 mmol/L)+Tg(10μmol/L);C组(n=12),EGTA(3 mmol/L)+Tg(10μmol/L)+CNTF(500 U/μl)。结果:用足量EGTA螯合细胞外Ca2+后,测得[Ca2+]i≤(30.73±7.25)nmol/L;加入EGTA+Tg后,[Ca2+]i显著升高([Ca2+]i≥[91.55±12.24]nmol/L);加入EGTA+Tg+CNTF后,升高的[Ca2+]i明显降低([Ca2+]i≤[26.09±7.16]nmol/L,P<0.01)。结论:CNTF可明显减弱Tg的钙库质膜钙泵抑制作用,使胞质[Ca2+]i降低。提示CNTF通过增加胞内钙库对细胞内游离Ca2+的吸收作用来降低海马神经元的Ca2+负荷。

关键词：海马神经元睫状神经营养因子毒胡萝卜素钙离子

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国家自然科学基金委员会-加拿大魁北克医学研究基金会神经科学双边研讨会在上海召开

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第二军医大学学报 2005年第12期26卷 1346-1346页

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胶质细胞源性神经营养因子受体α1定点突变体制备及其稳定转染细胞株的构建及鉴定

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1082-1085页

作者：朱伟张勇陈哲宇王丽梅路长林何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :制备胶质细胞源性神经营养因子受体 α1(GFRα1)的突变体质粒 ,并建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定 RCE细胞株。方法 :通过 Fugene6脂质体转染试剂 ,将 PCR法快速制备的 pc DNA3- r GFRα1突变体质粒分别与带潮霉素 ... 详细信息

目的 :制备胶质细胞源性神经营养因子受体 α1(GFRα1)的突变体质粒 ,并建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定 RCE细胞株。方法 :通过 Fugene6脂质体转染试剂 ,将 PCR法快速制备的 pc DNA3- r GFRα1突变体质粒分别与带潮霉素 B抗性筛选标记的 pc DNA3.1- RET质粒共转染野生型 PC12细胞 ,建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定PC12细胞株。经 Western印迹和细胞免疫荧光化学方法对转染入 PC12细胞中的各 r GFRα1突变体基因和 RET基因的表达进行鉴定。结果 :Western印迹和细胞免疫荧光化学方法检测均证实了所构建的细胞株中有转入基因的正确表达。结论 :成功构建了 r GFRα1各突变体基因和 RET基因同时转入表达的稳定细胞株 ,为研究 r GFRα1中关键氨基酸的位点参与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)信号转导的作用奠定基础。

关键词：胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1) RET PC12细胞

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Dok1与表皮生长因子受体之间相互作用的酵母双杂交研究

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第二军医大学学报 2004年第7期25卷 755-758页

作者：张勇刘秀杰张骐阎志勇矫力刘翾路长林何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :研究 downstream of kinases(dok1 )与表皮生长因子受体 (EGFR)之间的相互作用 ,寻找 EGFR的可能底物或调控蛋白 ,以深入认识 EGFR下游信号转导机制。方法 :将 EGFR胞内域与 L ex A蛋白融合作为 DNA结合蛋白 ,分别将dok1、dok1 ... 详细信息

目的 :研究 downstream of kinases(dok1 )与表皮生长因子受体 (EGFR)之间的相互作用 ,寻找 EGFR的可能底物或调控蛋白 ,以深入认识 EGFR下游信号转导机制。方法 :将 EGFR胞内域与 L ex A蛋白融合作为 DNA结合蛋白 ,分别将dok1、dok1 PTB及 dok1 ΔPTB与 B4 2 AD蛋白融合作为激活域蛋白 ,共转化酵母菌后 ,通过 β-半乳糖苷酶活性检测、生长实验以及免疫共沉淀实验分析它们之间的相互作用。结果 :dok1及 dok1 PTB与 EGFR之间在酵母中存在结合 ,而 dok1Δ PTB不与 EGFR结合。结论 :首次证实 EGFR与 dok1之间具有相互作用 ,dok 1的

关键词：表皮生长因子受体 dok1 PTB 酵母双杂交

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皮质激素受体在抑郁大鼠海马GIRK_(1-4) mRNA调控中的作用

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1058-1061页

作者：刘世建马国昭王雪琦高霄飞徐荷何成路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 卫生勤务学系流行病学教研室上海200433

目的 :侧脑室给予螺内酯和 (或 )米非司酮 ,观察大鼠海马 G蛋白偶联内向整流钾通道 1- 4 (GIRK1 - 4) m RNA的表达 ,初步探讨皮质激素受体在调控 GIRK m RNA中的作用。方法 :雄性 SD大鼠 ,随机分为 9组 (每组 5只 ) :对照组 (CON) ,生... 详细信息

目的 :侧脑室给予螺内酯和 (或 )米非司酮 ,观察大鼠海马 G蛋白偶联内向整流钾通道 1- 4 (GIRK1 - 4) m RNA的表达 ,初步探讨皮质激素受体在调控 GIRK m RNA中的作用。方法 :雄性 SD大鼠 ,随机分为 9组 (每组 5只 ) :对照组 (CON) ,生理盐水组 (NS) ,螺内酯组 (SPI) ,米非司酮组 (MIF) ,SPI+MIF组 ,抑郁 (DEP) +NS组 ,DEP+SPI组 ,DEP+MIF组 ,DEP+SPI+MIF组。用地高辛 (DIG)标记的 GIRK1 - 4c RNA探针进行原位杂交 ;切片贴于涂有铬矾明胶的载玻片上 ,37℃烘箱中过夜。常规脱水 ,透明 ,中性树胶封片。利用 L eica图像分析系统测定海马各区 GIRK1 - 4m RNA杂交阳性信号的平均灰度。使用SPSS进行统计学分析。结果 :与 CON组相比 ,DEP+NS组海马 CA1- 3区和齿状回 GIRK1 - 4m RNA表达均明显下降 ;与DEP+NS组相比 ,DEP+SPI组和 DEP+SPI+MIF组海马各区 GIRK1 - 4m RNA表达均明显升高 ,DEP+MIF组变化不显著 ,SPI组、MIF组和 SPI+MIF组与 NS组相比 ,GIRK1 - 4m RNA表达无明显差异 ,表明 SPI和 MIF本身对正常大鼠 GIRK表达的影响不明显。结论 :糖皮质激素受体通过与 GIRK1 中的糖皮质激素受体反应元件结合 ,使 GIRKs m RNA在海马的表达增加 ,皮质酮通过海马的 5 - HT1 A受体增加 GIRKs通道的通透性。

关键词：糖皮质激素受体 G蛋白偶联内向整流型钾通道海马应激型抑郁症

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