检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2008年第2期29卷 122-125页

作者：王庆敏孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室

目的:将结核分枝杆菌Ag85A抗原基因克隆并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85A抗原基因,然后将其插入到原核表达载体pGEX5T中,构建成pGEX5T-Ag85A重组质粒。经IPTG诱导使该基因在*** k802菌中表达,亲和层... 详细信息

目的:将结核分枝杆菌Ag85A抗原基因克隆并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85A抗原基因,然后将其插入到原核表达载体pGEX5T中,构建成pGEX5T-Ag85A重组质粒。经IPTG诱导使该基因在*** k802菌中表达,亲和层析法纯化蛋白,Western印迹法验证表达蛋白的抗原性。结果:扩增出了约0.9kb的单一条带,并成功地构建了pGEX5T-Ag85A重组子;经IPTG诱导后,Ag85A蛋白在k802菌中获得了表达,表达的蛋白条带大小约58000,与预期结果相符;纯化后获得了较单一的蛋白条带。蛋白纯化前后均可被结核病患者血清特异地识别。结论:成功地克隆了Ag85A抗原基因,并将其在大肠杆菌中进行了表达、纯化,为将其应用于结核病诊断和防治的研究奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85A抗原分子克隆基因表达

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差别显示mRNA法的改良

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 383-385页

作者：戴建新王易伦刘宇健郭嘉陆德如第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室

差别显示ｍＲＮＡ法的改良戴建新，王易伦，刘宇健，郭嘉，陆德如分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异，是分子生物学研究领域的热点之一。目前，研究方法主要是：递减杂交［１］和差示杂交［２］；但这些方法技术难度大、重... 详细信息

差别显示ｍＲＮＡ法的改良戴建新，王易伦，刘宇健，郭嘉，陆德如分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异，是分子生物学研究领域的热点之一。目前，研究方法主要是：递减杂交［１］和差示杂交［２］；但这些方法技术难度大、重复率低且工作量大。差别显示ｍＲＮＡ...

关键词： mRNA 基因筛选聚合酶链反应

来源：评论

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绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的克隆及高效表达

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第二军医大学学报 1997年第5期18卷 406-408页

作者：陆惠萍周凤娟孙树汉第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的：在大肠杆菌中克隆及高效表达绿色荧光蛋白基因（ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ）。方法：ＰＣＲ法克隆ＧＦＰ－Ｓ６５ＴｃＤＮＡ并改造其两端的限制性内切酶位点，构建重组原核表达载体ｐＲＳＥＴ－ＧＦＰＳ６５Ｔ。结果：在ＩＰＴＧ诱导条件... 详细信息

目的：在大肠杆菌中克隆及高效表达绿色荧光蛋白基因（ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ）。方法：ＰＣＲ法克隆ＧＦＰ－Ｓ６５ＴｃＤＮＡ并改造其两端的限制性内切酶位点，构建重组原核表达载体ｐＲＳＥＴ－ＧＦＰＳ６５Ｔ。结果：在ＩＰＴＧ诱导条件下，ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ的表达量占细菌总蛋白量的１５％以上。细菌培养物及其超声上清在长波紫外线的照射下，发出明亮的绿色荧光。结论：ＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ可以作为原核细胞中的报告基因，用标准的长波紫外线即可检测其表达。

关键词：基因表达大肠杆菌绿色荧光蛋白克隆

来源：评论

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重组人促红细胞生成素cDNA在CHO-dhfr^-细胞中的高效表达

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第二军医大学学报 1998年第6期19卷 530-532页

作者：陈坚刘小萍曹韫旭陆德如第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的：使重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）在ＣＨＯ细胞中获得高效表达。方法：利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素ｃＤＮＡ重组表达质粒ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ，分别用ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，... 详细信息

目的：使重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）在ＣＨＯ细胞中获得高效表达。方法：利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素ｃＤＮＡ重组表达质粒ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ，分别用ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，作瞬时高表达，选ｐＥＦ－ＥＰＯ用磷酸钙共沉淀法转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，加入氨甲喋呤（ＭＴＸ）扩增、选择，作稳定性高表达。结果：ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＯＳ７细胞后７２ｈ表达量分别为１７．８和２１．０ｎｇ／ｍｌ，ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，随着ＭＴＸ浓度的增加，ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＋的克隆数减少，而混合克隆的ＥＰＯ表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达ｒｈＥＰＯ的细胞株，其３ｄ表达量为１６μｇ／ｍｌ。

关键词：红细胞生成素基因重组真核表达

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人促红细胞生成素在大肠杆菌中融合高表达：稀有密码子对外源蛋白翻译速率的影响

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第二军医大学学报 1995年第4期16卷 323-325页

作者：郭瀛军王易伦陆惠萍陆德如第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室

本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，... 详细信息

本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，但实验中却取得了较高的蛋白表达量。ｐＧＥＸ－２Ｔ和ｐＤＳ－６Ｈ中表达的融合蛋白（分子量：４４４００和２３８００）分别占细菌总蛋白的２９．７％和１７．５％。从而提示，一个基因中的密码子使用频率与翻译延长速率之间可能不是一种简单的对应关系。表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中５＇融合基因长度达１３００ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ中仅为３６ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ但两者表达水平却无显著差异，因此作为翻译起始限制因素的翻译起始区的ＡＴＧ下游顺序仅需长约３６个核苷酸。

关键词：促红细胞生成素密码子翻译基因表达大肠杆菌

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一种简单、快速、经济的mRNA分离方法

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生物化学与生物物理进展 1995年第2期22卷 188-190页

作者：王易伦戴建新郭瀛军陆德如第二军医大学分子遗传教研室

对ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素纯化ｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡ的方法进行了改良。缩小了层析柱床的体积，使填料用量仅为常规量的１／５０—１／１００，即在移液器尖嘴中进行层析。与常规方法相比，它具有实验时间短、洗脱的ｍＲＮＡ可直接合... 详细信息

对ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素纯化ｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡ的方法进行了改良。缩小了层析柱床的体积，使填料用量仅为常规量的１／５０—１／１００，即在移液器尖嘴中进行层析。与常规方法相比，它具有实验时间短、洗脱的ｍＲＮＡ可直接合成ｃＤＮＡ和得率较高等优点。

关键词： mRNA 分离 RNA

来源：评论

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重组人粒巨噬细胞集落刺激因子的实验室培养、复性和分离纯化

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生物工程学报 1996年第S1期12卷 106-110页

作者：王易伦郭瀛军张平武陆德如第二军医大学分子遗传教研室

建立了一个实验室制备重组ｈＧＭＣＳＦ的培养、复性和分离纯化的技术工艺。通过对ＰＥＧＭ工程菌的生长和诱导表达等条件的初步调整，使ｈＧＭＣＳＦ的表达量从１６９％提高到３２３％，获得０７４９ｇ／Ｌ的包含体，纯度为... 详细信息

建立了一个实验室制备重组ｈＧＭＣＳＦ的培养、复性和分离纯化的技术工艺。通过对ＰＥＧＭ工程菌的生长和诱导表达等条件的初步调整，使ｈＧＭＣＳＦ的表达量从１６９％提高到３２３％，获得０７４９ｇ／Ｌ的包含体，纯度为６５％；包含体用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解和稀释复性后，经ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ．ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００ＨＲ层析分离，制得纯度达９７％以上、比活性为３０×１０７ｕ／ｍｇ的ｈＧＭＣＳＦ，纯化总回收率约为５％

关键词： hGMCSF 包含体纯化复性培养

来源：评论

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沉默信息调节因子1在急性肺损伤中作用的研究进展

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癌变.畸变.突变 2025年第1期37卷 72-74,80页

作者：邓紫丰师敏婕詹天豪马耀刘建豪马丞飞赵昱舜李嘉刘江正孔德钦空军军医大学军事预防医学系军事毒理学与防化医学教研室陕西省自由基生物学与医学重点实验室教育部特殊作业环境危害评估与防治重点实验室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院学员大队陕西西安710032 空军军医大学航空航天医学系飞行人员康复与疗养教研室陕西西安710032

急性肺损伤(ALI)是一种常见的危重症,具有高发病率和高死亡率,其发病机制复杂,治疗手段有限。沉默信息调节因子1(SIRT1)是一种高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性去乙酰化酶,具有调控基因转录、能量代谢和细胞衰老等多种生物... 详细信息

急性肺损伤(ALI)是一种常见的危重症,具有高发病率和高死亡率,其发病机制复杂,治疗手段有限。沉默信息调节因子1(SIRT1)是一种高度保守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性去乙酰化酶,具有调控基因转录、能量代谢和细胞衰老等多种生物学功能,广泛参与多种生理病理过程。近年来,SIRT1在ALI中的作用逐渐受到关注。本文从调节基因转录、抗衰老和调控氧化应激等三个方面重点介绍了SIRT1的生物学功能,阐述了其在ALI中的表达变化,并从抑制炎症反应、减轻细胞凋亡和焦亡、调控氧化应激等方面解析SIRT1在ALI中发挥保护作用的机制。本文还总结了miRNA、小分子激动剂等通过靶向SIRT1发挥救治作用的研究进展,因此,靶向SIRT1的救治具有巨大临床转化潜力,其深入研究将为ALI提供新的治疗策略和思路。

关键词：急性肺损伤沉默信息调节因子1 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化应激细胞凋亡

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转基因的分子生物学特性

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生物化学与生物物理进展 1996年第2期23卷 137-141页

作者：戴旭明潘星华傅继梁第二军医大学生物学教研室

现代分子生物学研究中，转基因概念的出现越来越频繁，它渐渐被用来表示所有的用基因工程手段构建、导入高等真核生物细胞，并稳定地整合入受体基因组的外源ＤＮＡ．文章较系统地总结了已见报道的转基因的结构类型、它在受体细胞内的遗... 详细信息

现代分子生物学研究中，转基因概念的出现越来越频繁，它渐渐被用来表示所有的用基因工程手段构建、导入高等真核生物细胞，并稳定地整合入受体基因组的外源ＤＮＡ．文章较系统地总结了已见报道的转基因的结构类型、它在受体细胞内的遗传学行为、表达特性和影响因素及其相应的生物学效应；分析了转基因研究中尚待研究的问题。

关键词：转基因分子生物学转基因生物

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高海拔吸纯氧对大鼠肺脏转录组学差异分析

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空军军医大学学报 2025年第1期46卷 32-38页

作者：涂磊刘曼玲马恒刘晓鹏空军特色医学中心北京100142 空军军医大学基础医学院生理与病理生理学教研室陕西西安710032

目的探讨海拔10000 m吸纯氧对大鼠肺组织转录组学的影响。方法选取60只SD大鼠随机分成正常对照组、海拔10000 m吸空气组、海拔10000 m吸纯氧组。正常对照组大鼠在常压状态下吸空气4周。其余大鼠被放入特制的低压高氧舱内(海拔高度10000 ... 详细信息

目的探讨海拔10000 m吸纯氧对大鼠肺组织转录组学的影响。方法选取60只SD大鼠随机分成正常对照组、海拔10000 m吸空气组、海拔10000 m吸纯氧组。正常对照组大鼠在常压状态下吸空气4周。其余大鼠被放入特制的低压高氧舱内(海拔高度10000 m)8 h/d,连续4周。海拔10000 m吸纯氧组大鼠在进入高氧舱内的同时吸入纯氧。海拔10000 m吸空气组大鼠仅吸入空气。检测大鼠的生存率、氧分压[p(O_(2))]、二氧化碳分压[p(CO_(2))]、左肺湿干质量比值、肺体质量比值,制作肺组织切片并进行病理形态学分析,并且取大鼠肺组织进行转录组学测序,筛选差异表达基因(DEGs)进行GO和KEGG富集分析,构建PPI互作网络。结果海拔10000 m吸空气大鼠全部死亡,肺组织出现严重损伤,炎症评分显著增加(P<0.01);而海拔10000 m吸纯氧的大鼠全部存活,并且海拔10000 m吸纯氧的大鼠p(CO_(2))、p(O_(2))、肺湿干质量比、肺体质量比与正常对照组相比均无明显差异,肺组织结构出现轻度损伤,炎症评分显著降低(P<0.01)。此外,与正常对照组比较,转录组分析筛选出205个DEGs(上调基因149个,下调基因56个),主要分布在细胞、细胞器和细胞膜结构上;生物学过程主要聚类在细胞过程、对刺激的反应、生物过程的调节等;而分子功能主要富集在结合、催化活性、信号转导活性、分子转导活性、核酸结合转录因子活性等。KEGG富集分析表明上述DEGs分布于免疫调节、炎症反应、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等信号通路。结论海拔10000 m吸纯氧(8 h/d,连续4周)既能有效避免出现高空缺氧,也不会造成氧中毒导致严重的肺损伤。本研究为航空航天条件下的高空作业防护评价提供参数、依据和指南。

关键词：高空飞行吸纯氧肺组织转录组学差异表达基因

来源：评论

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