检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2002年第2期29卷 193-196页

作者：龚振明傅继梁第二军医大学医学遗传教研室

p16 INK4a蛋白能抑制CDK4和CDK6的活性 ,使 pRb处于非磷酸化或低磷酸化状态而能与转录因子E2Fs结合 ,从而抑制DNA的合成 ,阻止细胞由G1期进入S期 .p16 INK 4a的表达受Ets1和Ets2的正调控 ,受Bmi 1的负调控 .p16 INK 4a基因缺失、突变、... 详细信息

p16 INK4a蛋白能抑制CDK4和CDK6的活性 ,使 pRb处于非磷酸化或低磷酸化状态而能与转录因子E2Fs结合 ,从而抑制DNA的合成 ,阻止细胞由G1期进入S期 .p16 INK 4a的表达受Ets1和Ets2的正调控 ,受Bmi 1的负调控 .p16 INK 4a基因缺失、突变、甲基化、RNA剪接加工错误可导致细胞周期失控和癌变 .应用p16 INK 4a 对某些肿瘤进行基因治疗的研究正在进行中 .

关键词： p16^INK4a 功能基因调控肿瘤发生

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热休克后表达受抑基因的mRNA差别显示和克隆

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高技术通讯 1996年第7期6卷 46-50页

作者：王易伦戴建新刘宇健徐仁宝陆德如第二军医大学分子遗传教研室第二军医大学病理生理教研室

以人成骨肉瘤细胞株（ＨＯＳ－８６０３）作为热休克模型，用差别显示ｍＲＮＡ法（ｄｄｍＲＮＡ）筛选，发现和克隆了一个热休克后表达受抑的ｃＤＮＡ片段。在４３℃、４０分钟热处理后１小时，ＨＯＳ－８６０３细胞总ｃＤＮＡ图谱未见... 详细信息

以人成骨肉瘤细胞株（ＨＯＳ－８６０３）作为热休克模型，用差别显示ｍＲＮＡ法（ｄｄｍＲＮＡ）筛选，发现和克隆了一个热休克后表达受抑的ｃＤＮＡ片段。在４３℃、４０分钟热处理后１小时，ＨＯＳ－８６０３细胞总ｃＤＮＡ图谱未见明显变化，但以该ｃＤＮＡ片段作为探针，ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，热休克后该基因的ｍＲＮＡ的量明显下降，而ｍＲＮＡ未见明显降解。我们将这个因热休克而选择性的表达受抑的基因命名为ＨＳＳＧ－１。对全长３１２ｂＰ的ｃＤＮＡ片段的序列分析表明，ＨＳＳＧ－１可能是一个未知的新基因。

关键词：热休克表达抑制基因克隆

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非连续多核苷酸定点突变的方法

引用

生物工程学报 1996年第S1期12卷 151-156页

作者：王易伦张平武戴建新郭瀛军陆德如第二军医大学分子遗传教研室

以人粒巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭＣＳＦ）、人α８干扰素（ｈＩＦＮα８）和分裂细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的ｃＤＮＡ定点突变为例，建立了一种新的大区域非连续多核苷酸同步定点突变的方法。经碱变性后的质粒ＤＮＡ，先用突... 详细信息

以人粒巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭＣＳＦ）、人α８干扰素（ｈＩＦＮα８）和分裂细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的ｃＤＮＡ定点突变为例，建立了一种新的大区域非连续多核苷酸同步定点突变的方法。经碱变性后的质粒ＤＮＡ，先用突变引物延伸单链，然后通过ＰＣＲ扩增得到突变双链ＤＮＡ。用该方法成功地改造了ｈＧＭＣＳＦ基因５′端３６个核苷酸中的９个位点、ＩＦＮα８基因５′端３９个核苷酸中的９个位点和ＰＣＮＡ基因ＳＤ顺序两侧６个和７个核苷酸。与经典的含Ｕ单链寡核苷酸定点突变方法相比，本方法突变效率高。

关键词：基因定点突变 PCR

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一种简单、快速、经济的mRNA分离方法

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生物化学与生物物理进展 1995年第2期22卷 188-190页

作者：王易伦戴建新郭瀛军陆德如第二军医大学分子遗传教研室

对ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素纯化ｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡ的方法进行了改良。缩小了层析柱床的体积，使填料用量仅为常规量的１／５０—１／１００，即在移液器尖嘴中进行层析。与常规方法相比，它具有实验时间短、洗脱的ｍＲＮＡ可直接合... 详细信息

对ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素纯化ｐｏｌｙ（Ａ）ＲＮＡ的方法进行了改良。缩小了层析柱床的体积，使填料用量仅为常规量的１／５０—１／１００，即在移液器尖嘴中进行层析。与常规方法相比，它具有实验时间短、洗脱的ｍＲＮＡ可直接合成ｃＤＮＡ和得率较高等优点。

关键词： mRNA 分离 RNA

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重组人粒巨噬细胞集落刺激因子的实验室培养、复性和分离纯化

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生物工程学报 1996年第S1期12卷 106-110页

作者：王易伦郭瀛军张平武陆德如第二军医大学分子遗传教研室

建立了一个实验室制备重组ｈＧＭＣＳＦ的培养、复性和分离纯化的技术工艺。通过对ＰＥＧＭ工程菌的生长和诱导表达等条件的初步调整，使ｈＧＭＣＳＦ的表达量从１６９％提高到３２３％，获得０７４９ｇ／Ｌ的包含体，纯度为... 详细信息

建立了一个实验室制备重组ｈＧＭＣＳＦ的培养、复性和分离纯化的技术工艺。通过对ＰＥＧＭ工程菌的生长和诱导表达等条件的初步调整，使ｈＧＭＣＳＦ的表达量从１６９％提高到３２３％，获得０７４９ｇ／Ｌ的包含体，纯度为６５％；包含体用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解和稀释复性后，经ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ．ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００ＨＲ层析分离，制得纯度达９７％以上、比活性为３０×１０７ｕ／ｍｇ的ｈＧＭＣＳＦ，纯化总回收率约为５％

关键词： hGMCSF 包含体纯化复性培养

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一种新型的双功能体内突变检测系统的建立

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第2期34卷 199-203页

作者：姚真真黎怀星车文良贺艳傅继梁第二军医大学医学遗传教研室上海200433 第二军医大学医学遗传教研室

将含有两个LacI靶基因的穿梭质粒pMCLacI/neo整合入小鼠的基因组中 ,建立一种能同时分析体内表达基因和沉默基因的双功能的新型体内突变检测系统 ,使在体内比较分析不同组织、器官中表达基因和沉默基因的突变谱和突变率成为可能。486个... 详细信息

将含有两个LacI靶基因的穿梭质粒pMCLacI/neo整合入小鼠的基因组中 ,建立一种能同时分析体内表达基因和沉默基因的双功能的新型体内突变检测系统 ,使在体内比较分析不同组织、器官中表达基因和沉默基因的突变谱和突变率成为可能。486个经显微注射过 pMCLacI/neo质粒的C5 7BL/ 6小鼠的受精卵 ,分别移植入 18只假孕母鼠的输卵管中 ,产下 32只存活小鼠 ,进一步检测证实 :(1)有 5只小鼠在基因组中整合有 pMCLacI/neo基因 ;(2 )该质粒中的两个LacI靶基因 ,只有一个表达 ;(3)能有效地从小鼠基因组中回收 pMCLacI/neo基因。因此 ,成功建立了pMCLacI/neo的转基因小鼠品系 ;可以将该小鼠用于整体动物水平研究表达基因和沉默基因突变机制的模型 ;该模型为一种具有双功能的新型体内突变检测系统

关键词：转基因小鼠突变检测 LacI 质粒

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小鼠p16^(INK4a)基因位点的结构和功能研究

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Acta Genetica Sinica 2001年第10期28卷 921-925页

作者：龚振明杨桦傅继梁第二军医大学医学遗传教研室

p1 6INK4a基因的失活与多种肿瘤的发生和发展有联系。通过筛选小鼠基因组文库 ,获得长度为 1 4.5kb的p1 6INK4a基因组DNA片段。对上述 1 4.5kbDNA测序后进行生物信息学分析表明 :该片段包含 3个外显子 ,编码 1个由 1 68个氨基酸残基组... 详细信息

p1 6INK4a基因的失活与多种肿瘤的发生和发展有联系。通过筛选小鼠基因组文库 ,获得长度为 1 4.5kb的p1 6INK4a基因组DNA片段。对上述 1 4.5kbDNA测序后进行生物信息学分析表明 :该片段包含 3个外显子 ,编码 1个由 1 68个氨基酸残基组成的多肽 ,其相对分子质量的理论计算值为 1 7941 ,有 7个可能的磷酸化位点 ,说明p1 6INK4a蛋白的功能可能受到磷酸化的调控。该DNA片段的非编码区分布着大量短散布元件、长散布元件和简单重复序列 ,这样的结构为转座和同源重组提供了结构基础 ,提示了部分肿瘤细胞中p1 6INK4a基因缺失的可能原因。

关键词： p16^INK4a 磷酸化调控基因缺失 DNA 多肽多态性小鼠基因结构肿瘤性

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小鼠胚胎干细胞p16^(INK4a)基因外显子1α打靶研究

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Acta Genetica Sinica 2002年第1期29卷 21-25页

作者：龚振明李坚傅继梁第二军医大学医学遗传教研室

在活体水平上 ,小鼠p16 INK4a基因是否具有抑制肿瘤发生和发展的功能是一个悬而未决的问题。利用筛选基因组文库得到的小鼠p16 INK4a基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠p16 INK4a 基因外显子 1α的基因打靶载体 ,其短臂为1.5kbEco81Ⅰ Acc... 详细信息

在活体水平上 ,小鼠p16 INK4a基因是否具有抑制肿瘤发生和发展的功能是一个悬而未决的问题。利用筛选基因组文库得到的小鼠p16 INK4a基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠p16 INK4a 基因外显子 1α的基因打靶载体 ,其短臂为1.5kbEco81Ⅰ AccⅡ片段 ,长臂为 5 .9kbXbaⅠ XhoⅠ片段。打靶载体经线性化和纯化后通过电穿孔转导小鼠R1ES细胞 ,获得 37个G418和Gancyclovir双药抗性克隆。用Southern杂交法对双药抗性克隆进行鉴定 ,获得一个敲除了p16 INK4a基因外显子 1α的阳性ES细胞克隆。

关键词： p16^INK4a 基因打靶小鼠胚胎干细胞外显子1a

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雪旺细胞源神经营养因子对脊髓损伤的保护作用

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第二军医大学学报 1997年第6期18卷 549-551页

作者：叶晓健李家顺周静石志才余科炜谢宁何海龙第二军医大学长征医院骨科第二军医大学分子遗传教研室

目的：观察雪旺细胞源神经营养因子（Ｓｃ－ＮＴＦｓ）对损伤脊髓组织的作用。方法：以７．５ｇ物体从１０ｃｍ高处落下致伤大鼠Ｔ１０脊髓，伤后５，３０，６０ｍｉｎ在损伤局部分别注入Ｓｃ－ＮＴＦｓ５０μｌ，对照组给予等量生理盐... 详细信息

目的：观察雪旺细胞源神经营养因子（Ｓｃ－ＮＴＦｓ）对损伤脊髓组织的作用。方法：以７．５ｇ物体从１０ｃｍ高处落下致伤大鼠Ｔ１０脊髓，伤后５，３０，６０ｍｉｎ在损伤局部分别注入Ｓｃ－ＮＴＦｓ５０μｌ，对照组给予等量生理盐水。２４ｈ后一半动物取伤段脊髓标本测水及离子含量。另一半动物３周后行神经功能检查。结果：脊髓损伤后组织水肿，Ｎａ＋、Ｃａ２＋离子浓度升高，Ｋ＋、Ｍｇ２＋离子浓度降低，Ｓｃ－ＮＴＦｓ可显著改善这些变化。Ｓｃ－ＮＴＦｓ使脊髓损伤后神经功能有显著改善。结论：Ｓｃ－ＮＴＦｓ对脊髓损伤具有保护作用，其机制可能与其减少神经细胞离子失衡、改善细胞内环境有关。

关键词：神经营养因子雪旺细胞脊髓损伤

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热休克后表达受抑基因的分子克隆及其表达特性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第6期32卷 657-660页

作者：戴建新王易伦周凤娟陆德如刘宇建徐仁宝第二军医大学病理生理学教研室!上海200433 第二军医大学分子遗传学教研室!上海200433

以人成骨肉瘤细胞株HOS 860 3为热休克模型 ,在利用DDmRNA方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的cDNA片段的基础上 ,以该片段为探针 ,筛选HOS 860 3细胞的cDNA文库 ,获得该基因的全长cDNA克隆(HSSG 1) ;DNA序列测定表明该cDNA全长... 详细信息

以人成骨肉瘤细胞株HOS 860 3为热休克模型 ,在利用DDmRNA方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的cDNA片段的基础上 ,以该片段为探针 ,筛选HOS 860 3细胞的cDNA文库 ,获得该基因的全长cDNA克隆(HSSG 1) ;DNA序列测定表明该cDNA全长 14 5 6bp ,编码 2 76个氨基酸 ,经计算机辅助分析 ,该cDNA序列尚未被报道。经RNA斑点杂交证实 ,该基因的表达于多种组织细胞之中 ,并且热休克反应对其表达水平的抑制具有普遍性

关键词：热休克基因表达表达调控差别显示基因克隆

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