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课题组采用基因工程技术构建了一株高表达伤寒杆菌保护性抗原—Ｖｉ多糖的减毒鼠伤寒杆菌Ｖｉ４０７２菌株，实验资料证明，该菌株稳定地高表达Ｖｉ抗原，表达量达到野生型伤寒杆菌的５０～１００倍。动物试验证明Ｖｉ４０７２非常安全... 详细信息

标准号: 94210657

课题组采用基因工程技术构建了一株高表达伤寒杆菌保护性抗原—Ｖｉ多糖的减毒鼠伤寒杆菌Ｖｉ４０７２菌株，实验资料证明，该菌株稳定地高表达Ｖｉ抗原，表达量达到野生型伤寒杆菌的５０～１００倍。动物试验证明Ｖｉ４０７２非常安全，ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠静注１×１０＜＇７＞ＣＦＵ后，全部存活。另Ｖｉ４０７２株通过口服途径能对小鼠作有限感染，并使小鼠产生抗伤寒杆菌和鼠伤寒杆菌的全面保护性免疫反应，免疫小鼠能耐受５５个ＬＤ＜，５０＞以上野生型伤寒杆菌及致死剂量的鼠伤寒杆菌攻击。该解毒株可望用作预防伤寒－－鼠伤寒的双价口服疫苗株。又Ｖｉ４０７２能稳定高效表达Ｖｉ抗原，可用作生产Ｖｉ抗原的工程菌株，制备预防伤寒的Ｖｉ疫菌。

关键词：鼠伤寒双价重组疫苗菌株疫苗

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P16^(ink4)cDNA的克隆及序列分析

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生物工程学报 1997年第1期13卷 105-107页

作者：黄长晖邓炜傅继梁第二军医大学生物教研室医学分子遗传学开放实验室复旦大学遗传学研究所

Ｐ１６ｉｎｋ４ｃＤＮＡ的克隆及序列分析黄长晖邓炜傅继梁（第二军医大学生物教研室，医学分子遗传学开放实验室上海２００４３３）（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）Ｐ１６ｉｎｋ４是ＣＤＫ（ＣｙｃｌｉｎＤｅｐｅｎｄｅ... 详细信息

Ｐ１６ｉｎｋ４ｃＤＮＡ的克隆及序列分析黄长晖邓炜傅继梁（第二军医大学生物教研室，医学分子遗传学开放实验室上海２００４３３）（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）Ｐ１６ｉｎｋ４是ＣＤＫ（ＣｙｃｌｉｎＤｅｐｅｎｄｅｎｔＫｉｎａｓｅ）抑制蛋白家族中的...

关键词：基因克隆 P16^ink4基因 cDNA 序列分析

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组蛋白乙酰化/脱乙酰化与DNA甲基化的关系

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生理科学进展 2001年第4期32卷 362-364页

作者：陈坚张晓琴傅继梁第二军医大学军队卫生教研室上海200433 第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所上海200433

组蛋白乙酰化和脱乙酰化与DNA甲基化有密切的关系。本文介绍了DNA甲基化对组蛋白乙酰化 /脱乙酰化影响 ,组蛋白乙酰化 /脱乙酰化对DNA甲基化的影响 ,以及组蛋白乙酰化

关键词：组蛋白脱乙酰化组蛋白乙酰化 DNA甲基化

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广泛肝切除联合肝固有动脉切除对正常大鼠及梗阻性黄疸大鼠的影响

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中华普通外科杂志 2008年第11期23卷 872-876页

作者：李斌张友磊李东章意亮高春芳许强芝倪灿荣侯元凯王义第二军医大学附属东方肝胆外科医院肝外二科上海200438 第二军医大学生理学教研室第二军医大学遗传学教研室第二军医大学附属东方肝胆外科医院医学检验中心上海200438 第二军医大学生化与分子生物学教研室第二军医大学附属长海医院病理科

目的探索在正常及高胆红素血症情况下，大鼠70％肝切除联合肝固有动脉切除对肝功能、肝细胞能量代谢以及肝再生和细胞凋亡的影响。方法雄性成年SD大鼠133只，将其中40只分为2组，每组20只，均行胆总管-十二指肠插管桥接，同时行70％肝... 详细信息

目的探索在正常及高胆红素血症情况下，大鼠70％肝切除联合肝固有动脉切除对肝功能、肝细胞能量代谢以及肝再生和细胞凋亡的影响。方法雄性成年SD大鼠133只，将其中40只分为2组，每组20只，均行胆总管-十二指肠插管桥接，同时行70％肝切除或70％肝切除联合肝固有动脉切除。另87只行胆总管结扎制备梗阻性黄疸模型。5d后手术分为70％联合肝切除胆肠再通内引流组，及70％肝切除联合肝固有动脉切除、胆肠再通内引流2组。动态观察术后24h、72h、7d肝功能和肝细胞能量代谢、肝组织HGF和bcl-2 mRNA含量及其蛋白表达、肝细胞增殖指数和凋亡指数的变化，并统计各组死亡率。另取6只作为假手术组，测定术后0h肝功能和肝细胞能量指标。结果正常大鼠能够耐受70％肝切除联合肝动脉切除，术后肝细胞能量代谢和肝功能迅速恢复正常，肝再生良好。高胆红素血症时，大鼠术后肝再生受抑制，细胞凋亡增多。较之70％肝切除组，70％肝切除联合肝固有动脉切除组对肝细胞能量代谢的影响更为显著，术后肝功能恶化，肝组织HGF和Bcl-2 mRNA含量显著减少，肝再生明显受抑制，细胞凋亡增多，死亡率显著增高（P〈0．05）。结论正常大鼠70％肝切除联合肝动脉切除术后肝再生不受影响，高胆红素血症时，70％肝切除联合肝动脉切除的大鼠死亡率高，因此术前引流减黄应是必要的措施。

关键词：黄疸,阻塞性大鼠高胆红素血症肝切除术

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膜联蛋白A2与消化系统肿瘤的研究进展

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中国肿瘤生物治疗杂志 2012年第5期19卷 556-560页

作者：江泓蝶王梁华焦炳华王凯慧第二军医大学医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学生物化学与分子生物学教研室上海200433

膜联蛋白A2(annexin A2,AXⅡ)是依赖钙离子调节的膜磷脂结合的蛋白质多基因家族中的一员,具有多种生物学功能,包括参与细胞增殖、凋亡、信号转导、细胞迁移、DNA的合成复制、RNA结合等。AXⅡ在肝癌、胰腺癌、骨肉瘤等组织尤其是消化系... 详细信息

膜联蛋白A2(annexin A2,AXⅡ)是依赖钙离子调节的膜磷脂结合的蛋白质多基因家族中的一员,具有多种生物学功能,包括参与细胞增殖、凋亡、信号转导、细胞迁移、DNA的合成复制、RNA结合等。AXⅡ在肝癌、胰腺癌、骨肉瘤等组织尤其是消化系统肿瘤中高表达,而在食管癌、前列腺癌组织中表达下调,说明AXⅡ在不同肿瘤发生、发展中起不同作用。AXⅡ在肿瘤细胞中主要发挥分子调节作用,如血管生成、增殖、凋亡、细胞侵袭、转移和黏附,因此,AXⅡ与肿瘤的临床诊断分期与预后、治疗密切相关。

关键词：膜联蛋白A2 肿瘤消化道肿瘤

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BMP-2 mRNA在实验性黄韧带骨化组织中的表达及其意义

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中国矫形外科杂志 2001年第8期8卷 787-790页

作者：陈雄生贾连顺倪斌戴建新第二军医大学长征医院骨科上海200003 第二军医大学分子遗传教研室

目的 :从分子水平研究BMP 2在黄韧带骨化过程中的作用机理。方法 :以rhBMP 2诱导的黄韧带骨化 (实验组 ,O组 )为研究对象 ,分别于诱导物植入后 2、4、6周取实验节段黄韧带 ,提取总RNA ,采用Dotblot和Northernblot方法检测其BMP 2mRNA的... 详细信息

目的 :从分子水平研究BMP 2在黄韧带骨化过程中的作用机理。方法 :以rhBMP 2诱导的黄韧带骨化 (实验组 ,O组 )为研究对象 ,分别于诱导物植入后 2、4、6周取实验节段黄韧带 ,提取总RNA ,采用Dotblot和Northernblot方法检测其BMP 2mRNA的表达程度 ,设立PBS溶液 /明胶海绵植入为实验对照组 (EC组 ) ,未手术动物为阴性对照组(N组 ) ,pSBMP 2质粒为阳性对照组 (P组 )。结果 :Dotblot和Northernbloe放射自显影图像显示 :rhBMP 2植入 2周时 ,黄韧带内BMP 2mRNA表达程度最高 ,然后逐渐下降 ,到 6周时明显减弱 ,与病理组织学研究中所见的韧带组织中成纤维细胞软骨化生的活跃程度呈正相关。实验对照组和阴性对照组均未见BMP 2mRNA表达。图像灰度扫描示 :0 2组、0 4组和 0 6组BMP 2mRNA的表达程度分别为 0 .6 15± 0 .14 84、 0 .443± 0 .0 982、 0 .2 32± 0 .0 749。结论 :rhBMP 2诱导的骨化过程中黄韧带组织内存在不同程度BMP 2mRNA的表达 ,其表达水平与成纤维细胞软骨化生的活跃程度呈正相关 ;内源性BMP -2可能参与黄韧带骨化的启动和持续发展。

关键词：脊柱黄韧带骨化骨形态发生蛋白-2 mRNA表达斑点 RNA印迹

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αB型干扰素基因在大肠杆菌中的表达

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海军军医大学学报 1988年第3期 208-212+295页

作者：温肇荣左平蔡龙荣冯根生周向军邹竹英第二军医大学分子遗传学教研室

通过Bal-31外切酶剪切及T4 DNA连接酶平端连接等DNA重组技术,将αB型干扰素基因切成长度不一的平末端片段,插入pUR222运载体的乳糖启动子下游的β半乳糖苷酶结构基因中,经转化大肠杆菌BMH71-18,共挑选了766个转化子,用微量细胞病变抑制... 详细信息

通过Bal-31外切酶剪切及T4 DNA连接酶平端连接等DNA重组技术,将αB型干扰素基因切成长度不一的平末端片段,插入pUR222运载体的乳糖启动子下游的β半乳糖苷酶结构基因中,经转化大肠杆菌BMH71-18,共挑选了766个转化子,用微量细胞病变抑制试验进行快速筛选,获得15个具有抗病毒活性的阳性株,其中pSM2317菌株经14次培养检测,干扰素的平均表达放价为1.1×10;U/L。

关键词：干扰素重组质粒基因表达微量细胞病变抑制试验

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克隆超基因家族中新基因的一种PCR同源引物

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第二军医大学学报 1998年第2期19卷 101-105页

作者：郭葆玉久野耕嗣张淑英松岛纲治第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室日本金泽大学癌症研究所第二军医大学科研处新药评价中心

目的：用同源引物克隆ＲＮＡ低丰度表达的小鼠β－趋化因子受体。方法：将β－趋化因子受体小鼠ＭＩＰ－１αＲ，人ＭＣＰ－１Ｒ和大鼠ＩＬ－８Ｒ跨膜区中高度保守的氨基酸序列中的核苷酸进行相似序列对比后，设计出同源引物，再用ＲＴ... 详细信息

目的：用同源引物克隆ＲＮＡ低丰度表达的小鼠β－趋化因子受体。方法：将β－趋化因子受体小鼠ＭＩＰ－１αＲ，人ＭＣＰ－１Ｒ和大鼠ＩＬ－８Ｒ跨膜区中高度保守的氨基酸序列中的核苷酸进行相似序列对比后，设计出同源引物，再用ＲＴ－ＰＣＲ扩增出ＤＮＡ片段，经基因库检索为该超基因家族中的新基因序列后设计特异引物，用ＭａｒａｔｈｏｎＰＣＲ扩增出该新基因。结果：成功克隆出小鼠β－趋化因子受体５（ＣＣＲ５）ｃＤＮＡ全基因序列，序列全长２８８８ｂｐ，开放阅读框１０６５个核苷酸，编码３５５个氨基酸。该序列经序列分析、配体结合试验及国际基因库检索证实为该超基因家族中的一个新基因成员。结论：该克隆策略的引物设计思路较为新颖，能有效捕获超基因家族中的新基因。该克隆方法敏感、高效。

关键词：克隆超基因家族同源引物 β趋化因子受体

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人αB干扰素在Saccharomyce cerevisiae中的合成和分泌

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海军军医大学学报 1988年第4期 316-321+398页

作者：武圣明邹竹英周向军蔡龙荣温肇荣第二军医大学分子遗传学教研室

将带人αB干扰素基因的HindⅢ片段,用sI酶处理后,插入载休YFD18的HindⅢ位点,使其与编码α因子前导肽的序列融合,构建成表达质粒YFD33,引入YFD33的α型酵母细胞可以合成和分泌人αB干扰素,分泌到培养基中的干扰素为14×10;U/立;,酵... 详细信息

将带人αB干扰素基因的HindⅢ片段,用sI酶处理后,插入载休YFD18的HindⅢ位点,使其与编码α因子前导肽的序列融合,构建成表达质粒YFD33,引入YFD33的α型酵母细胞可以合成和分泌人αB干扰素,分泌到培养基中的干扰素为14×10;U/立;,酵母菌抽提物中的干扰素为1.1×10;U/L。

关键词：人αB干扰素启动子酵母菌分泌

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人血小板生成素cDNA的克隆及在COS-7细胞中的表达

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第二军医大学学报 1998年第3期19卷 212-214页

作者：童涌戴建新陈蕊雯周永春孙树汉陆德如第二军医大学基础医学部医学生物技术和分子遗传学研究所第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的：克隆人血小板生成素（ｈＴＰＯ）ｃＤＮＡ，并研究其在ＣＯＳ－７细胞中的表达。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ法获得ｈＴＰＯｃＤＮＡ，测序后克隆到真核表达载体ｐＥＤ上，以ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，巨核细胞... 详细信息

目的：克隆人血小板生成素（ｈＴＰＯ）ｃＤＮＡ，并研究其在ＣＯＳ－７细胞中的表达。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ法获得ｈＴＰＯｃＤＮＡ，测序后克隆到真核表达载体ｐＥＤ上，以ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，巨核细胞集落形成培养法测表达产物活性。结果和结论：获得的ｈＴＰＯｃＤＮＡ和文献报道的序列一致。转染细胞ＲＮＡ斑点杂交结果显示ＴＰＯｃＤＮＡ获得转录，转染后４８和７２ｈ的细胞上清均可测到ＴＰＯ活性。ｐＥＤ是一个表达较高的真核表达载体。

关键词：人血小板生成素基因表达 cDNA COS-7细胞

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