检索结果-内蒙古大学图书馆

河北医科大学学报 2009年第11期30卷 1163-1166页

作者：王静霍树平左连富孙树汉河北医科大学第四医院肿瘤研究所流式分析室河北医科大学第三医院麻醉科第二军医大学医学遗传学教研室

目的探索一种利用离子交换层析技术制备高纯度卡介菌基因组DNA(genomic DNA frommycobacterium bovis Bacillus calmette-Guerin,BCG-DNA)的方法,并探讨其免疫调控活性。方法运用超声、加热、胰酶消化、离子交换层析、凝胶过滤层析及冻... 详细信息

目的探索一种利用离子交换层析技术制备高纯度卡介菌基因组DNA(genomic DNA frommycobacterium bovis Bacillus calmette-Guerin,BCG-DNA)的方法,并探讨其免疫调控活性。方法运用超声、加热、胰酶消化、离子交换层析、凝胶过滤层析及冻干法制备高纯度BCG-DNA;小鼠脾细胞与BCG-DNA共同培养72h,采用ELISA方法检测细胞培养上清中干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的水平。结果所制备的BCG-DNA纯度较高(DNA 95.3%),片断大小均匀一致,集中于200～250bp;BCG DNA可显著诱导小鼠脾细胞产生IFN γ(P<0.01),且IFN-γ水平与BCG-DNA浓度呈正相关。结论利用层析法制备BCG-DNA,高效、重复性好。所制备的BCG-DNA纯度较高,具有较强的免疫调控作用。

关键词：分枝杆菌,牛基因组提取法小鼠

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BCG-DNA和BCG-PSN对诱导IFN-γ产生的比较研究

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河北医科大学学报 2009年第8期30卷 757-760页

作者：王静霍树平左连富孙树汉河北医科大学第四医院肿瘤研究所流式分析室河北石家庄050011 河北医科大学第三医院麻醉科河北石家庄050051 第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的比较研究卡介菌基因组DNA(genomic DNA from mycobacterium bovis bacillus calmetteguerin,BCG-DNA)和卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction from mycobacterium bovis bacilluscalmette-guerin,BCG-PSN)的免疫调控活性。方法制备高纯度BCG-DNA,小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cell,hPBMC)分别与BCG-DNA和BCG-PSN共同培养72h,采用酶联免疫吸附方法检测细胞培养上清中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的水平。结果所制备的BCG-DNA纯度较高(DNA95.3%),片断大小均匀一致,集中于200～250bp。BCG-DNA与BCG-PSN均可诱导小鼠脾细胞和hPBMC产生IFN-γ,且当浓度≥10mg/L时,BCG-DNA诱导产生IFN-γ水平显著强于BCG-PSN(P<0.01),IFN-γ水平与BCG-DNA浓度呈正相关。结论 BCG-DNA可显著诱导辅助性T细胞1型细胞因子IFN-γ的产生,其免疫调控活性优于BCG-PSN。

关键词：分枝杆菌,牛干扰素Ⅱ型小鼠

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孕妇血样采集后体外存放对血浆中胎儿游离DNA水平的影响

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第二军医大学学报 2008年第9期29卷 1042-1045页

作者：李勤张毅丁宇烽胡振林孙树汉惠宁第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活... 详细信息

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性,单相酶扩散法测定血浆DNA酶活性。结果:血样体外存放36h后,血浆中β-globin基因的拷贝数较存放6h的样品显著增加,而SRY基因拷贝数明显减少;4℃存放条件下,妊娠晚期孕妇外周血中胎儿DNA占总DNA百分比从6h的(10.3±5.6)%下降到36h的(3.0±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。体外存放6h的血样中基本未检出死亡细胞,而存放36h的血样中分别检出了坏死和凋亡的白细胞;36h样品血浆中LDH活性较6h样品显著升高(P<0.05)。单相酶扩散法结果表明,血浆DNA酶在4℃时虽然活性显著减弱,但仍然保持降解DNA的能力。结论:血样采集后体外存放时间过长会导致血浆总游离DNA增多,而胎儿DNA减少,这种变化可能与血样体外存放过程中白细胞死亡和血浆DNA酶对胎儿DNA的降解作用有关;胎儿DNA抽提应在血样采集后尽早(6h内)进行。

关键词：孕妇血浆胎儿游离DNA Dnase 乳酸脱氢酶

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肿瘤的表观遗传学研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2008年第1期15卷 8-13页

作者：孙树汉第二军医大学遗传学研究所医学遗传学教研室上海200433

表观遗传学是研究不涉及DNA序列变化的、可遗传的基因表达调控方式的一门学科。肿瘤的发生、发展不仅取决于遗传因素,同时也受到表观遗传修饰的影响。表观遗传通过DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑以及非编码RNA等4种调控方式来实现... 详细信息

表观遗传学是研究不涉及DNA序列变化的、可遗传的基因表达调控方式的一门学科。肿瘤的发生、发展不仅取决于遗传因素,同时也受到表观遗传修饰的影响。表观遗传通过DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑以及非编码RNA等4种调控方式来实现对基因表达的控制,同时也就意味着异常的表观遗传修饰会导致肿瘤发生。肿瘤表观遗传学机制贯穿肿瘤发生、发展的整个过程,并具有一定的广泛性和组织特异性,因此对肿瘤的表观遗传学进行深入的研究对肿瘤的临床诊断、治疗和预防都具有重要的指导意义。

关键词：肿瘤表观遗传学 DNA甲基化组蛋白修饰染色质重塑非编码RNA

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MafA逆转录病毒表达载体的构建及其在肝原始细胞中的稳定表达

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第二军医大学学报 2008年第5期29卷 465-468页

作者：金彩霞李文林徐方胡以平第二军医大学基础部细胞生物学教研室上海200433 宁夏医学院医学遗传学与细胞生物学教研室银川750004

目的:构建表达MafA(v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homologue A)的逆转录病毒表达载体,并建立稳定表达MafA的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs)。方法:通过PCR方法克隆MafA基因全长.将其构建到pBMN—Z—IRES-Neo逆转录病毒载体中获得pBMN—MafA—Neo载体;将该载体导入Phoenix包装细胞系,收集病毒上清并感染LEPCs,筛选稳定表达MafA的LEPCs;RT-PCR方法检测MafA表达对LEPCs分子表型的影响。结杲:成功构建pBMN—MafA-Neo载体,并获得稳定表达MafA基因的肝原始细胞系(LEPCs—MafA)。LEPCs-MafA细胞GK和GLUT2基因表达高于LEPCs。结论:成功获得稳定表达MafA的肝原始细胞系,为研究MafA诱导肝干细胞向胰腺细胞转分化奠定了基础。

关键词： MafA 逆转录病毒载体肝原始细胞系

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^99Tc^m-联肼尼克酰胺-膜联蛋白B1的制备及其探测细胞凋亡的生物学评价

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中华核医学杂志 2008年第4期28卷 217-222页

作者：罗全勇王芳张志勇刘兴峰罗琼张毅陆汉魁孙树汉朱瑞森上海交通大学附属第六人民医院核医学科 200233 第二军医大学医学遗传学教研室上海欣科医药有限公司

目的制备^99Tc^m联肼尼克酰胺（HYNIC）-膜联蛋白（Annexin）B1并对其探测细胞凋亡的潜力进行生物学评价。方法应用^99Tc^m间接标记蛋白质的方法，以HYNIC作为双功能螯合剂制备^99Tc^mHYNIC—Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检... 详细信息

目的制备^99Tc^m联肼尼克酰胺（HYNIC）-膜联蛋白（Annexin）B1并对其探测细胞凋亡的潜力进行生物学评价。方法应用^99Tc^m间接标记蛋白质的方法，以HYNIC作为双功能螯合剂制备^99Tc^mHYNIC—Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检测^99Tc^m HYNIC—Annexin B1的体外生物活性。采用地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的动物模型和anti—Fas单克隆抗体诱导小鼠肝凋亡的动物模型（均设相应对照组），检测^99Tc^m HYNIC—Annexin B1探测体内细胞凋亡的潜力，并用原位末端标记法（TUNEL）染色证实细胞凋亡。采用配对t检验进行统计学处理。结果间接标记法制备的^99Tc^m HYNIC—Annexin B1具有很高的放化纯（〉96％）和较好的体外稳定性。与活化人血小板的结合实验表明，^99Tc^mHYNIC—Annexin B1具有与磷脂酰丝氨酸（PS）残基结合的生物活性。地塞米松诱导18h后，小鼠胸腺对^99Tc^mHYNIC—Annexin B1的摄取为对照组的3．50倍（t=5．234，P〈0．01）。anti—Fas诱导后2h时，小鼠肝对^99Tc^mHYNIC—Annexin B1的摄取为对照组的2．02倍（t=6．178，P〈0．01）。结论采用^99Tc^m间接标记法制备的^99Tc^mHYNIC—Annexin B1具有很高的放化纯及较好的体外稳定性。^99Tc^m-HYNIC—AnnexinB1具有与PS结合的体外生物活性和探测体内细胞凋亡的潜力，是一种新的细胞凋亡显像剂。

关键词：膜联蛋白B1 同位素标记锝细胞凋亡小鼠

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脓毒症和脓毒性休克大鼠的肺肾肠、内皮素-1和内皮素A受体基因表达变化及其意义

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中华实验外科杂志 2008年第6期25卷 740-742页

作者：陈学云张希洲戴建新孙树汉陈德昌杨兴易第二军医大学附属长征医院普外科上海200003 湖北宜昌市第一人民医院急救中心第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长征医院急救科

目的观察大鼠脓毒症和脓毒性休克时内皮素-1（ET-1）和内皮素A受体（ETAR）基因在肺、肾和小肠黏膜中的表达变化以及各脏器功能受损情况。方法24只雄性大鼠随机分为正常组、对照组、脓毒症组和脓毒性体克组；通过脓毒症和脓毒性休克大... 详细信息

目的观察大鼠脓毒症和脓毒性休克时内皮素-1（ET-1）和内皮素A受体（ETAR）基因在肺、肾和小肠黏膜中的表达变化以及各脏器功能受损情况。方法24只雄性大鼠随机分为正常组、对照组、脓毒症组和脓毒性体克组；通过脓毒症和脓毒性休克大鼠模型，采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）以葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）基因为内参照基因，分别检测脓毒症和脓毒性休克组肾、肺和小肠黏膜组织ET-1和ETAR基因表达情况，同时检测其血清丙氨酸转氨酶（ALT）、白蛋白（A）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）和动脉血气变化。结果脓毒症组肾肺肠组织ET-1 mRNA表达相对量分别为87％、74％、82％，ETAR mRNA为82％、65％、78％；脓毒性休克组肾肺肠组织ET-1 mRNA表达相对量分别为98％、85％、93％，ETAR mRNA为95％、80％、91％；较正常组和对照组均明显增加（P〈0．01）。脓毒性休克组大鼠血清ALT为288．50±194．10、BUN 58，00±5．20，Crl33．67±18．70，较正常组、对照组和脓毒症组均显著上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；脓毒症组血清ALT为97．17±6．30、BUN 30，17±2，30、Cr75．83±6．70，较正常组明显升高（P〈0．01）。脓毒症组和脓毒性休克组早期动脉血气分析为低氧和呼吸性碱中毒，脓毒性休克组后期出现明显的低氧血症和CO2潴留。结论ET-1和ETAR参与了脓毒症和脓毒性休克的病理生理过程，且可能是参与脓毒症和脓毒性休克并发多脏器功能障碍综合征（MODS）启动的因子之一。

关键词：败血症休克脓毒性内皮素基因表达

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膜联蛋白A5过表达对宫颈癌细胞系SiHa细胞凋亡的影响

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解剖学杂志 2008年第5期31卷 668-670,673页

作者：李欣高福禄窦志杰孙树汉承德医学院组织学与胚胎学教研室承德067000 承德医学院附属医院承德067000 第二军医大学遗传学教研室上海200433

目的:构建膜联蛋白A5的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞使其过表达后检测宫颈癌细胞的凋亡情况。方法:PCR法从pJLA503膜联蛋白A5中获得膜联蛋白A5基因;磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,免疫印迹法和免疫组织化学ABC法检测了细胞中... 详细信息

目的:构建膜联蛋白A5的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞使其过表达后检测宫颈癌细胞的凋亡情况。方法:PCR法从pJLA503膜联蛋白A5中获得膜联蛋白A5基因;磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,免疫印迹法和免疫组织化学ABC法检测了细胞中膜联蛋白A5蛋白的过表达;对过表达膜联蛋白A5的细胞采用免疫荧光法检测其细胞凋亡情况。结果:重组质粒中膜联蛋白A5基因序列正确;转染重组质粒后的SiHa细胞过表达膜联蛋白A5蛋白;过表达膜联蛋白A5的SiHa细胞凋亡显著增多。结论:膜联蛋白A5可促进宫颈癌细胞系SiHa细胞的凋亡。

关键词：膜联蛋白A5 重组质粒癌 SiHa细胞凋亡

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^(99m)Tc-Annexin B1的制备及其探测细胞凋亡的实验研究

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中国医学影像技术 2008年第8期24卷 1177-1181页

作者：罗全勇张志勇王芳张毅陆汉魁孙树汉朱瑞森上海交通大学附属第六人民医院核医学科上海200233 上海欣科医药有限公司上海201108 中国人民解放军第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的制备99mTc-Annexin B1并对其体外、体内生物分布以及探测体内细胞凋亡的潜力进行评价。方法应用99mTc直接标记蛋白质的方法制备99mTc-Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检测99mTc-Annexin B1的体外生物活性。在正常小鼠体内... 详细信息

目的制备99mTc-Annexin B1并对其体外、体内生物分布以及探测体内细胞凋亡的潜力进行评价。方法应用99mTc直接标记蛋白质的方法制备99mTc-Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检测99mTc-Annexin B1的体外生物活性。在正常小鼠体内进行生物分布研究。采用地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的动物模型和anti-Fas单抗诱导小鼠肝脏凋亡的动物模型检测99mTc-Annexin B1探测体内细胞凋亡的潜力,并用TUNEL染色证实细胞凋亡。结果直接标记法制备的99mTc-Annexin B1具有很高的放射化学纯度和很好体外稳定性。与活化人血小板的结合实验表明,99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性。99mTc-Annexin B1在体内具有较快的清除特性,主要聚集于肾脏。地塞米松诱导18h后,小鼠胸腺对99mTc-Annexin B1的摄取显著高于对照小鼠胸腺的摄取。Anti-Fas诱导后2h时后,小鼠肝脏对99mTc-AnnexinB1的摄取显著高于为对照动物的肝脏摄取。结论99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性和探测体内细胞凋亡的潜力,是一种新的细胞凋亡显像剂。

关键词：细胞凋亡膜联蛋白B1 生物分布放射性核素显像

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^99Tc^m-Annexin B1探测荷瘤鼠化疗后肿瘤细胞凋亡的实验观察

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中华肿瘤防治杂志 2008年第20期15卷 1524-1527,1539页

作者：罗全勇陈泽泉陈立波王芳袁志斌孙树汉陆汉魁朱瑞森上海交通大学附属第六人民医院核医学科上海200233 中国人民解放军第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的:探讨^(99)Tc^m-Annexin B1探测化疗后肿瘤细胞凋亡的潜力与可行性。方法:乳腺癌细胞MDA-MB-435荷瘤小鼠经大剂量(30mg/kg)紫杉醇单次化疗后,注射^(99)Tc^m-Annexin B1,计算化疗后不同时间(0、5、10、15、20和25h)每克肿瘤组织摄取^... 详细信息

目的:探讨^(99)Tc^m-Annexin B1探测化疗后肿瘤细胞凋亡的潜力与可行性。方法:乳腺癌细胞MDA-MB-435荷瘤小鼠经大剂量(30mg/kg)紫杉醇单次化疗后,注射^(99)Tc^m-Annexin B1,计算化疗后不同时间(0、5、10、15、20和25h)每克肿瘤组织摄取^(99)Tc^m-Annexin B1的百分注射剂量率(%ID/g)。肉瘤细胞W256荷瘤大鼠经大剂量(200mg/kg)环磷酰胺单次化疗后24h注射^(99)Tc^m-Annexin B1,对照组荷瘤大鼠注射生理盐水;行SPECT平面显像观察肿瘤摄取情况。结果:乳腺癌荷瘤小鼠化疗后15h,肿瘤摄取^(99)Tc^m-Annexin B1达高峰,由0h的(0.15±0.013)%ID/g上升至(0.22±0.026)%ID/g。肿瘤对^(99)Tc^m-Annexin B1的摄取与肿瘤细胞凋亡指数(AI)具有相关性,r=0.88,P<0.01。W256细胞荷瘤大鼠化疗后24h显像发现,肿瘤对^(99)Tc^m-Annexin B1的摄取较对照荷瘤大鼠显著升高,对照组的肿瘤与非肿瘤摄取比值(T/B)为1.39±0.21,化疗组为2.57±0.43。结论:^(99)Tc^m-Annexin B1对探测化疗后肿瘤细胞凋亡具有潜力与可行性。

关键词：膜联蛋白A5 细胞凋亡疾病模型动物环磷酰胺紫杉酚

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