检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2004年第2期20卷 156-161页

作者：颜宏利贺艳刘凡杨湘越孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

为获得低分子量、低免疫原性的膜联蛋白AnxB1的序列缺失突变体 ,以AnxB1C端的 4个内部同源结构域为基础 ,模拟构建了 4个突变体群 .利用同源模建的方法对各突变体进行结构模建和分子优化 ,最后选择 4个结构最为合理的突变体在大肠杆菌GS... 详细信息

为获得低分子量、低免疫原性的膜联蛋白AnxB1的序列缺失突变体 ,以AnxB1C端的 4个内部同源结构域为基础 ,模拟构建了 4个突变体群 .利用同源模建的方法对各突变体进行结构模建和分子优化 ,最后选择 4个结构最为合理的突变体在大肠杆菌GST融合表达系统中表达 .结果显示 :GST M3和GST M4均表达出较强的抗凝血活性 ,且免疫原性也降低为原来的 1 2 ,为进一步构建兼具抗凝、溶栓双重功能的靶向性溶栓药物奠定了基础 .

关键词：膜联蛋白 AnxB1 序列缺失突变体同源建模抗凝血活性溶栓药物

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猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 34-36页

作者：吴丹王庆敏陈蕊雯朱维佳陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 G... 详细信息

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以

关键词：猪囊尾蚴抗原 cC1 DNA疫苗蛋白质疫苗小鼠免疫应答

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单核苷酸多态性在复杂性状疾病易感基因研究中的应用

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 140-142页

作者：陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下... 详细信息

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下几个方面对 SNPs与复杂性状疾病易感基因研究的策略和方法学问题作了较为详细的综述 :(1 ) SNP特点及其有关网上资源 ;(2 )对直接测序法、单碱基延伸法、Taq Man法、基于实时动态荧光 (动力学 ) PCR的等位基因特异扩增法 ,变性高效液相色谱 (DHPL C)法和 OL A/ PCR的 SNPs基因分型方法的原理、通量和优缺点进行了比较 ;(3)

关键词：单核苷酸多态性复杂性状疾病易感基因发病机制基因组学

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融合蛋白AnxB1ScuPA表达质粒的构建及诱导条件优化

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第二军医大学学报 2004年第11期25卷 1205-1207页

作者：贺艳颜宏利陆一鸣张毅杨湘越孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/ L)诱导蛋白表达 ,并对表达条件进行优化 ,根据凝胶扫描定量结果确定合适的宿主菌和诱导表达条件。结果 :Anx B1Scu PA在具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL2 1- RIL 表达量较其他宿主菌为高。在菌液生长至 D6 0 0 =0 .8时 ,加入诱导剂 IPTG至终浓度0 .4 m mol/ L ,诱导 0 .5 h后加入利福平至终浓度 15 0μg/ ml,可使蛋白 Anx B1Scu PA的表达量提高至菌体总蛋白的 36 %。结论 :通过选择具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL 2 1- RIL和优化诱导条件 ,使 Anx B1Scu PA在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：膜联蛋白亚家族单链尿激酶融合基因稀有密码子表达利福平

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phP53-luc质粒的构建及其用于检测化学物质遗传毒性的初步分析

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 277-279页

作者：施柯黎怀星吴丹李雅慧孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建 2个分别由 p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性。方法 :通过 PCR扩增人 p5 3基因启动子片段 ,然后采用重组 DNA技术克隆入 p GL3- BASIC的荧光素酶报告... 详细信息

目的 :构建 2个分别由 p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性。方法 :通过 PCR扩增人 p5 3基因启动子片段 ,然后采用重组 DNA技术克隆入 p GL3- BASIC的荧光素酶报告基因的上游而获得 ph P5 3- luc表达质粒。用脂质体转染法将 ph P5 3- luc转染入 NIH3T3细胞并分别用 5 -氟尿嘧啶 (5 -FU)处理 ,最后裂解细胞用 Dual- L uciferase Reporter Assay System检测荧光素酶报告基因表达。结果 :构建了 2个分别由p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,位于这 2个质粒上的荧光素酶报告基因在 NIH3T3细胞内的表达显著地受遗传毒性化学物质的诱导 ,其表达比对照的 p GL 3- BASIC载体上的荧光素酶报告基因高近 2 4 0倍。结论 :基于人 p5

关键词： phP53—luc质粒检测化学物质遗传毒性 p53基因 5—氟尿嘧啶

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抗阿尔茨海默病重组真核表达载体的构建

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 55-57页

作者：何颖黄力章亚男黎怀星陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :将淀粉样蛋白 N端的抗原表位基因以 4种不同的组合与小鼠 Ig G重链区基因融合 ,构建抗阿尔茨海默病的重组质粒。方法 :通过 RT- PCR技术从小鼠脾组织中克隆 Ig G重链区 c DNA,将柔性接头与抗原表位基因序列设计在 5′端引物中 ,... 详细信息

目的 :将淀粉样蛋白 N端的抗原表位基因以 4种不同的组合与小鼠 Ig G重链区基因融合 ,构建抗阿尔茨海默病的重组质粒。方法 :通过 RT- PCR技术从小鼠脾组织中克隆 Ig G重链区 c DNA,将柔性接头与抗原表位基因序列设计在 5′端引物中 ,然后以克隆出的小鼠 Ig G重链区 c DNA为模板 ,用 PCR法克隆出由柔性接头将抗原表位和 Ig G重链区基因融合在一起的序列 ,并插入到 p VAX质粒载体中。结果 :扩增出来的 4种不同组合的抗原表位基因和 Ig G重链区基因融合序列大小分别为 999、1 0 2 0、1 0 0 5、1 0 2 6 bp,均与 Gen Bank上登录的相符 ;p VAX重组质粒酶切结果表明融合基因正确地插入到 p VAX载体中 ,全自动测序亦显示抗原表位基因和 Ig G重链区基因为所需基因 ,接头序列也完全正确。结论 :成功构建了抗阿尔茨海默病的 4种表位基因 - Ig G重链区融合表达的重组质粒。

关键词：阿尔茨海默病重组真核表达载体抗原基因序列基因表达

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CpG-寡核苷酸对巨噬泡沫细胞形成相关基因表达的调控作用

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第二军医大学学报 2004年第4期25卷 458-459页

作者：万斌胡振林周凤娟孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)具有直接激活巨噬细胞的作用．但其是否影响巨噬泡沫细胞的形成未见报道。我们在利用基因表达谱芯片研究CpG-ODN对免疫细胞基因表达谱影响的过程中发现3条与泡沫细胞形成相关的基因表达受CpG-ODN调控。为确证芯片... 详细信息

CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)具有直接激活巨噬细胞的作用．但其是否影响巨噬泡沫细胞的形成未见报道。我们在利用基因表达谱芯片研究CpG-ODN对免疫细胞基因表达谱影响的过程中发现3条与泡沫细胞形成相关的基因表达受CpG-ODN调控。为确证芯片杂交的结果．我们采用RT—PCR技术对相关基因的表达作了进一步研究。

关键词： CpG-寡核苷酸巨噬泡沫细胞形成相关基因表达调控作用 RT—PCR技术

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Annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 44-46页

作者：王芳张毅颜宏利高远舰刘凡贺艳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1... 详细信息

目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1检测凋亡细胞和活化血小板。结果 :FITC标记的 annexin B1既能与凋亡细胞特异性结合 ,又能与活化血小板特异性结合 ,结合活性接近 annexin 。结论 :研究表明 annexin B1可结合于凋亡细胞和活化血小板膜上的磷脂酰丝氨酸 (PS) ,而非其他膜成分 ,也进一步阐明 annexin

关键词： Annexin B1 磷脂酰丝氨酸结合活性血小板活化细胞凋亡

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Annexin B1分子结构、Ca^(2+)结合位点与进化的分析

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1078-1081页

作者：王凯慧郭瀛军高远舰王开宇颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。结果 :An... 详细信息

目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。结果 :Annexin B1包含 4个序列和结构高度相似的结构域 ,含有 8个 Ca2 + 结合位点 ,二级结构显示蛋白主要由 α螺旋结构组成 ,具有寄生生物所特有的氨基酸残基。在物种进化上 ,Annexin B1和节肢动物为 1支 ,新杆线虫、植物、鸟类和脊椎动物为 1支 ,原虫、腔肠动物、两栖类和脊索动物为 1支。另外 ,Annexin B1与 Annexin A1在进化上有较强的亲缘关系 ,结构和功能上 An-nexin A1和 Annexin A5相似。结论 :Annexin B1具有膜联蛋白的结构特征 ,含有抗凝血、参与细胞凋亡、炎性反应、信号转导和细胞分化等细胞生理功能的氨基酸结构域和决定种属特异性的氨基酸序列 ,在进化上同源于 Annexin A1。

关键词： Annexin B1 结构功能进化

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膜联蛋白A5 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 41-43页

作者：颜宏利贺燕刘凡杨湘越孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :克隆人膜联蛋白 A5 c DNA并在大肠杆菌系统内作表达。方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织的总 RNA扩增膜联蛋白 A5的 c DNA序列 ,将该基因插入 GST融合表达载体 p GEX- 5 T,在 tac启动子控制下 ,IPTG诱导表达 GST融合蛋白。以... 详细信息

目的 :克隆人膜联蛋白 A5 c DNA并在大肠杆菌系统内作表达。方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织的总 RNA扩增膜联蛋白 A5的 c DNA序列 ,将该基因插入 GST融合表达载体 p GEX- 5 T,在 tac启动子控制下 ,IPTG诱导表达 GST融合蛋白。以亲合层析法纯化表达的融合蛋白 ,用 KPTT法验证抗凝血活性。结果 :凝胶电泳显示 PCR扩增产物的长度为 978bp,重组质粒测序结果表明 ,插入片段与人膜联蛋白 A5的序列完全一致。在 IPTG诱导下 ,K80 2重组菌高效表达出相对分子质量为 5 80 0 0的融合蛋白 ,表达量占菌体总蛋白的 2 6 %。纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。结论 :成功克隆人膜联蛋白

关键词：膜联蛋白A5 cDNA 克隆大肠杆菌基因表达

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