检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第7期24卷 710-712页

作者：黄力郭瀛军张术王开宇陈祖欢朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免... 详细信息

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免疫小鼠后 ,用 SARS- Co V抗体 EL ISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。结果 :构建了重组核酸疫苗质粒 p VCo- M,免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。结论 :以 M为抗原基因的 DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体 ,为进一步改进或探索同类 DNA疫苗提供有益启示。

关键词： SARS 冠状病毒M基因片段克隆 DNA疫苗体液免疫严重急性呼吸综合征

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Annexin B1:一种新的细胞凋亡检测用蛋白

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第二军医大学学报 2003年第3期24卷 333-334页

作者：张毅郭瀛军王芳高远舰颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC... 详细信息

目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC标记的AnnexinB1检测凋亡细胞。结果 :FITC标记的AnnexinB1与凋亡细胞膜表面磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合 ,使凋亡细胞呈阳性着色 ,能有效检测细胞凋亡。结论 :开发得到了一种新的细胞凋亡检测用蛋白AnnexinB1,为推广高效快捷的凋亡检测技术提供国产试剂奠定了基础。

关键词： AnnexinB1 细胞凋亡检测用蛋白

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结核抗原ESAT-6基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达

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中华传染病杂志 2003年第1期21卷 30-32页

作者：王庆敏胡振林孙树汉张巧敏第二军医大学医学遗传学教研室河北省胸科医院

目的　将结核分支杆菌ESAT抗原编码区基因克隆 ,并使其在大肠埃希菌中表达。方法　培养并抽提结核分支杆菌基因组 ,采用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码ESAT的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建 pGEX5T ESAT重组质粒。IPTG诱... 详细信息

目的　将结核分支杆菌ESAT抗原编码区基因克隆 ,并使其在大肠埃希菌中表达。方法　培养并抽提结核分支杆菌基因组 ,采用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码ESAT的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建 pGEX5T ESAT重组质粒。IPTG诱导使该基因在k80 2菌中表达 ,并用免疫印迹 (Westernblot)方法确证表达蛋白的特异性。结果　PCR扩增获得了单一的条带 ,大小约 0 .3kb ;全自动测序与Genbank中登录的序列完全相同。获得了 pGEX5T ESAT重组子并在k80 2菌中表达 ,该蛋白可被结核病患者血清特异地识别。结论　扩增和克隆了结核杆菌ESAT抗原的全长cDNA并在大肠埃希菌中获得表达 ,为进一步研究其在结核病诊断和防治中的应用打下了基础。

关键词：结核分支杆菌 ESAT-6 基因表达克隆大肠埃希菌结核病预防

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人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 937-940页

作者：刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫... 详细信息

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达。

关键词：人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因 Oct4 克隆基因克隆基因表达

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小鼠锌指蛋白基因ZF-12的克隆与基因结构以及5′端启动子活性的分析

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Acta Genetica Sinica 2003年第4期30卷 311-316页

作者：厉建中陈霞王水良孙霞张亚洲余龙傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433 中国科学院上海生物工程研究中心上海200233 上海南方模式生物研究中心上海201203 复旦大学遗传学研究所上海200433

人类锌指蛋白ZNF191为类kr櫣ｐｐｅｌ转录因子 ,其可能与神经精神病、心血管疾病和肝癌等疾病的发生或发展有关 ,为了采用基因敲除模型来探讨它的生理功能 ,克隆和定位其在模式生物 (小鼠 )中的同源基因 ,并阐明其结构特征是必需的。通... 详细信息

人类锌指蛋白ZNF191为类kr櫣ｐｐｅｌ转录因子 ,其可能与神经精神病、心血管疾病和肝癌等疾病的发生或发展有关 ,为了采用基因敲除模型来探讨它的生理功能 ,克隆和定位其在模式生物 (小鼠 )中的同源基因 ,并阐明其结构特征是必需的。通过筛选小鼠λ噬菌体基因组文库 ,获得了它在小鼠中的同源基因ZF 12基因组全长片段。序列分析表明 :该基因含有 4个外显子和 3个内含子 ,内含子都遵循GT AG的剪接模式 ;第 91密码子处存在单核苷酸多态性 ;可能存在 2种大小不同的 3′端的非翻译区 (3′ UTR) ;与锌指蛋白基因Zfp 35相连锁 ,可将其定位于 18号染色体的B3 C带上或附近 ;5′端上游存在 1个约 2 5 0bp高度富含GC的启动子序列。ZF 12基因的 5′端系列缺失荧光素酶基因报告载体的瞬时转染实验表明 :其上游序列 (- 76 2～ +70bp)具有启动子转录活性 ,在更上游的序列(- 82 4～ - 76 2bp)上可能存在负调控元件。这项研究结果为进一步的基因敲除研究奠定了基础。

关键词：小鼠锌指蛋白基因ZF-12 基因克隆基因结构启动子

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后基因组时代的基因工程小鼠

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 117-119页

作者：胡以平曾溢滔第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 上海医学遗传学研究所上海200040

基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代... 详细信息

基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代的到来 ,使得生物医药研究对基因工程小鼠的需求日趋增加 ,同时也促使基因工程小鼠技术体系得到了快速的发展。然而 ,在基因工程小鼠的产生中 ,仍存在着一些问题。它们的解决。

关键词：基因工程小鼠转基因小鼠基因剔除小鼠基因替换小鼠

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肝富集转录因子及其相互作用研究进展

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国外医学（遗传学分册） 2003年第1期26卷 20-24页

作者：王水良厉建中傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

肝细胞的分化及分化表型的维持与肝富集转录因子调控的特定基因表达有关。本文对六大类肝富集转录因子结构特征、生理功能及其相互作用作一简要介绍。

关键词：转录因子基因表达肝细胞肝脏发育综述

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SARS相关冠状病毒S2基因的克隆及其DNA疫苗的免疫效果

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 707-709页

作者：郭瀛军黄力王开宇张术陈祖欢朱维佳陈则孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 湖南师范大学生命科学学院

目的 :构建抗原基因为 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS- Co V) S2基因的DNA疫苗 ,将其接种小鼠后观察病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 S2基因片段克隆至真核表达载体 ,随之将质粒进行... 详细信息

目的 :构建抗原基因为 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS- Co V) S2基因的DNA疫苗 ,将其接种小鼠后观察病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 S2基因片段克隆至真核表达载体 ,随之将质粒进行小鼠肌内接种免疫 ,定期检测血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。结果 :疫苗接种后第 2周就能检测出病毒特异性抗体 ,随着时间的延续 ,抗体水平逐步升高 ,而空质粒对照组未检测出明显的特异性抗体。结论 :以 S2为抗原基因的 DNA疫苗能诱导

关键词： SARS 冠状病毒 S2基因基因克隆 DNA疫苗免疫效果严重急性呼吸综合征

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发现DNA双螺旋结构的故事

上海科坛

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上海科坛 2003年第2期 42-45页

作者：傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室

在20世纪，遗传学也许是发展最快、变化最剧烈的一门自然科学学科。1900年，孟德尔(***)揭示的生物遗传规律被重新发现。2000年，人类基因组全序列工作草图宣告完成。这一头一尾两件大事充分展现了100年来遗传学发展的轨迹。而连接首尾...

在20世纪，遗传学也许是发展最快、变化最剧烈的一门自然科学学科。1900年，孟德尔(***)揭示的生物遗传规律被重新发现。2000年，人类基因组全序列工作草图宣告完成。这一头一尾两件大事充分展现了100年来遗传学发展的轨迹。而连接首尾的关节点则是……

关键词：

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稳定表达结核分枝杆菌38抗原的EL-4细胞株的建立及鉴定

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第二军医大学学报 2003年第11期24卷 1253-1255页

作者：康林王庆敏胡振林周凤娟王磊孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室海军医学研究所舰艇卫生研究室上海200433 河北医科大学解剖教研室

将结核分枝杆菌的38抗原基因片段经PCR方法扩增并插入到pcDNA3真核表达载体中,通过脂质体转染EL-4细胞,经G418筛选,用RT-PCR方法和ELISA方法检测整合和表达情况。结果成功地构建了pcDNA3-38抗原重组质粒,转染细胞中可检测到38抗原的存在... 详细信息

将结核分枝杆菌的38抗原基因片段经PCR方法扩增并插入到pcDNA3真核表达载体中,通过脂质体转染EL-4细胞,经G418筛选,用RT-PCR方法和ELISA方法检测整合和表达情况。结果成功地构建了pcDNA3-38抗原重组质粒,转染细胞中可检测到38抗原的存在,PCR扩增也证实38抗原基因已稳定整合于EL-4细胞的染色体中。本实验为今后在小鼠体内检测结核DNA疫苗激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 38抗原 EL-4细胞株鉴定疫苗 T淋巴细胞

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