检索结果-内蒙古大学图书馆

目的 :在毕赤酵母中表达 Annexin32并研究其功能。方法 :用 G4 18法快速筛选出的 9个高拷贝转化子 ,经平板培养法 (MD和 MM)及 PCR鉴定表型后 ,分别在 BMMY、BMM、MM 3种培养基中以甲醇诱导表达 ,培养上清行 SDS- PAGE和Western印迹鉴... 详细信息

目的 :在毕赤酵母中表达 Annexin32并研究其功能。方法 :用 G4 18法快速筛选出的 9个高拷贝转化子 ,经平板培养法 (MD和 MM)及 PCR鉴定表型后 ,分别在 BMMY、BMM、MM 3种培养基中以甲醇诱导表达 ,培养上清行 SDS- PAGE和Western印迹鉴定 ,用 (NH4 ) 2 SO4 +PI法沉淀 ,过 FPL C- Superdex75分子筛纯化蛋白并以此免疫小鼠。结果 :有两个表型为Muts的高拷贝转化菌表达量较高 ,以 BMMY为优 ,表达产物有两条带 ,相对分子质量分别约为 3.8万和 4万 ,占分泌总蛋白的 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0～ 35 0 m g/ L。Western印迹证实两条表达产物均具有天然 Annexin32分子的免疫原性。动物实验证明 ,酵母表达的 Annexin32的免疫原性明显高于原核表达者。结论 :在毕赤酵母中成功表达了 Annexin32 。

关键词： Annexin32 酵母表达免疫原性毕赤酵母基因表达膜联蛋白

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影响核酸疫苗应用研究的若干问题

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 353-354页

作者：孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗,这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原,刺激机体产生特异而有效的免疫应答,尤其是能诱导产生具细胞毒杀伤性功能的T淋巴细胞,可有效预防病毒、细胞内寄生细菌和寄生虫所引起的传染病.核酸疫苗由于... 详细信息

核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗,这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原,刺激机体产生特异而有效的免疫应答,尤其是能诱导产生具细胞毒杀伤性功能的T淋巴细胞,可有效预防病毒、细胞内寄生细菌和寄生虫所引起的传染病.核酸疫苗由于具有可诱发全面的免疫应答、提供同种异株交叉保护作用、能制备抗多种病原体的多价疫苗、兼有预防和治疗的作用等优点,且制备简单、成本较低、容易储存运输,自上世纪90年代初问世以来,已在多种疾病[1～3]的防治研究中显示出巨大的应用潜力.在美国,目前乙肝病毒、HIV 核酸疫苗、流感DNA疫苗、单纯疱疹病毒DNA疫苗已进入Ⅱ期临床研究,疟疾DNA 疫苗已进入Ⅲ期临床研究.在我国,某些兽用疫苗也已进入应用研究阶段.然而核酸疫苗是一个新生事物,围绕着增强核酸疫苗的免疫效果和安全性、改善纯化工艺等国际热点问题,在理论上还没有真正得到解决.这些问题大大限制了核酸疫苗的推广应用.

关键词：核酸疫苗免疫应答安全性应用研究免疫效果

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高密度培养大肠杆菌生产重组钩端螺旋体DNA疫苗

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 828-829页

作者：林懿陈祖欢郭瀛军孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :高密度、高质粒拷贝数培养大肠杆菌生产重组 DNA疫苗 pc D- fla B。方法 :应用 FU S- 5 L自控发酵罐 ,采用补料分批培养技术 ,控制补料的补加使溶氧控制在 30 %～ 6 0 % ,p H控制在 7左右 ,培养中后期采用 4 2℃培养以提高质粒... 详细信息

目的 :高密度、高质粒拷贝数培养大肠杆菌生产重组 DNA疫苗 pc D- fla B。方法 :应用 FU S- 5 L自控发酵罐 ,采用补料分批培养技术 ,控制补料的补加使溶氧控制在 30 %～ 6 0 % ,p H控制在 7左右 ,培养中后期采用 4 2℃培养以提高质粒拷贝数。结果 :重组菌 *** DH5α/ pc DNA 3- fla B发酵液光密度 (D6 0 0 )达到 4 5。经纯化后最终质粒 DNA得率为 5 0 m g/ L。质粒没有发生丢失现象。结论 :本实验为钩端螺旋体 DNA疫苗的大规模生产奠定了基础。

关键词：钩端螺旋体 DNA疫苗大肠杆菌

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稳定表达HBsAg的P815细胞株的建立及鉴定

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 384-386页

作者：周凤娟戴建新胡振林孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了... 详细信息

目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了重组质粒pcDNA3－HBsAg（S），转染细胞及其培养上清中均可检测到HBsAg（S）的存在，PCR扩增也证实HBSAg（S）基因已稳定整合于p815细胞的染色体中。结论：获得了稳定表达HBsAg的P815细胞株，为今后在小鼠体内检测乙肝DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础。

关键词：乙肝DNA疫苗体外细胞感染 PCR方法乙型肝炎表面抗原 adr亚型 P815细株

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猪囊尾蚴Annexin32的组织定位

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 830-832页

作者：王庆敏胡振林王中川孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :用免疫组化方法对猪囊尾蚴抗原 Annexin32进行组织定位。方法 :首先将 Annexin32在大肠杆菌中进行表达 ,表达的 Annexin32蛋白经亲和层析、凝血酶切割纯化 ,以囊虫病病猪血清检测表达蛋白的抗原性 ;然后将纯化蛋白免疫新西兰白... 详细信息

目的 :用免疫组化方法对猪囊尾蚴抗原 Annexin32进行组织定位。方法 :首先将 Annexin32在大肠杆菌中进行表达 ,表达的 Annexin32蛋白经亲和层析、凝血酶切割纯化 ,以囊虫病病猪血清检测表达蛋白的抗原性 ;然后将纯化蛋白免疫新西兰白兔 ,获得抗 Annexin32的多克隆抗体 ;最后将新鲜剥离的囊尾蚴进行冰冻切片 ,用免疫组化方法进行定位研究。结果 :表达的 Annexin32蛋白可以被囊虫病病猪血清特异地识别。制备的多克隆抗体的效价为 1∶ 4 0万。免疫组化定位结果显示 ,Annexin32主要在囊壁中表达 ,头节部表达较少 ;囊尾蚴周边肌肉组织也有表达。结论 :Annexin32主要分布于囊尾蚴的囊壁 ,而且它可能是一种分泌性蛋白。

关键词：猪囊尾蚴 Annexin32 组织定位

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猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1192-1194页

作者：吴丹郭瀛军王庆敏孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗... 详细信息

目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。

关键词：猪白细胞介素4 基因克隆囊尾蚴 DNA疫苗佐剂作用

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乙肝表面抗原核酸疫苗的构建及其与宿主染色体整合的可能性分析

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 816-818页

作者：周凤娟胡振林戴建新孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建乙肝表面抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内整合到宿主细胞基因组上的可能性。方法 :采用PCR法扩增乙肝病毒的 S基因片段后装入 p VAX载体 ,并以此为候选疫苗免疫 (BAL B/c)小鼠 ,在不同时间、不同部位取其组织抽提基因... 详细信息

目的 :构建乙肝表面抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内整合到宿主细胞基因组上的可能性。方法 :采用PCR法扩增乙肝病毒的 S基因片段后装入 p VAX载体 ,并以此为候选疫苗免疫 (BAL B/c)小鼠 ,在不同时间、不同部位取其组织抽提基因组 DNA,用 PCR检测 DNA整合情况。结果 :构建了乙肝核酸疫苗 p VAX- HBs Ag。免疫接种该疫苗第 3周时在小鼠肌肉、肝脏、脾脏、胸腺均有不同量的游离质粒存在 ;第 6周除在股四头肌可检测到外 ,其余组织中均为阴性 ;第 12、18周时检测所有组织中均为阴性。结论 :构建的 p VAX- HBs Ag DNA疫苗在小鼠体内无染色体整合。

关键词：乙型肝炎表面抗原核酸疫苗 DNA疫苗宿主染色体整合

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肿瘤基因治疗研究若干新进展

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1258-1260页

作者：贺艳王水良孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病,在其发病的分子机制逐渐被人们认识以及基因治疗的措施日趋可行的同时, 肿瘤基因治疗吸引了越来越多的注意。本文就肿瘤免疫基因治疗、抑癌基因治疗、诱导凋亡基因治疗及载体靶向性研究等方面的研究... 详细信息

肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病,在其发病的分子机制逐渐被人们认识以及基因治疗的措施日趋可行的同时, 肿瘤基因治疗吸引了越来越多的注意。本文就肿瘤免疫基因治疗、抑癌基因治疗、诱导凋亡基因治疗及载体靶向性研究等方面的研究进展作一综述。

关键词：肿瘤基因治疗病毒载体综述文献

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