检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第4期23卷 378-380页

作者：颜宏利孙树汉陈蕊雯杨湘越第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物... 详细信息

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。

关键词：膜联蛋白32 低相对分子质量单链尿激酶基因拼接基因表达重叠区扩增法大肠杆菌

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Annexin32酵母分泌型表达载体的构建及其高拷贝转化子的快速筛选

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 695-696页

作者：杨湘越武圣明陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

Annexin家族是20世纪70年代末发现的一类钙依赖性磷脂结合蛋白，广泛存在于真核生物细胞内，迄今为止已发现31个annexin亚家族。

关键词： Annexin32 酵母分泌型表达载体构建高拷贝转化子快速筛选毕赤酵母 G418抗性筛选

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猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达

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中国人兽共患病杂志 2002年第3期18卷 31-33,67页

作者：杨湘越孙树汉陈蕊雯郭瀛军颜宏利上海第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克... 详细信息

目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果　PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论　在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原。

关键词： cC1cDNA 克隆表达巴斯德毕赤酵母囊虫病猪囊尾蚴

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钩端螺旋体膜表面蛋白LipL41基因的克隆、序列分析及表达

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 374-377页

作者：寇志华孙树汉郭嬴军陈祖欢施柯胡振林张洪英周凤娟第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆... 详细信息

目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆至原核表达载体pGEX－5T进行原核表达，Western印迹分析其免疫原性。珐票：获得长 1068 hp的片段，DNA序列分析表明该菌株的LipL41基因与文献报道具有很高的同源性（95．0％～99．4％），在大肠杆菌中获得了表达，并与抗钩端螺旋体血清反应。结论：该抗原为致病性钩端螺旋体所具有的保守性抗原成分，可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。

关键词：免疫原性钩端螺旋体外膜蛋白 LipL41基因原核表达基因表达基因克隆

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猪囊尾蚴DNA疫苗在猪组织中的分布

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 833-835页

作者：郭瀛军王庆敏张洪英陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :分析猪囊尾蚴 DNA疫苗 pc DNA3- c C1肌肉接种后在猪体内的组织分布。方法 :分别于疫苗接种后 1d、7d、4周、8周 ,提取猪骨髓、肾、肝、脑、性腺、肠系膜淋巴结、脾、胸腺、外周血及肌注部位的肌肉和皮肤的总 DNA,通过 PCR的方... 详细信息

目的 :分析猪囊尾蚴 DNA疫苗 pc DNA3- c C1肌肉接种后在猪体内的组织分布。方法 :分别于疫苗接种后 1d、7d、4周、8周 ,提取猪骨髓、肾、肝、脑、性腺、肠系膜淋巴结、脾、胸腺、外周血及肌注部位的肌肉和皮肤的总 DNA,通过 PCR的方法检测疫苗质粒在各组织中的分布及随时间变化的情况。结果 :疫苗接种后的第 1天几乎所有组织中都检测到质粒 ;但随着时间的延续 ,仅在注射部位的肌肉和皮肤中检测到质粒的存在 ,并保持到 8周以上。结论 :肌注疫苗质粒后。

关键词：猪囊尾蚴 DNA疫苗猪组织分布药代动力学

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口蹄疫病毒融合表位基因在原核及真核表达系统中的正确表达

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1195-1197页

作者：张洪英郭瀛军陈祖欢林懿孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃... 详细信息

目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃培养2h后用IPTG诱导5h,融合蛋白在2×YT培养液中得到高效表达;全菌中相应蛋白条带与阳性抗体呈阳性反应,阳性反应强弱基本与表位特性及数量有关;得到4个P815细胞阳性克隆,培养上清、细胞膜和细胞质的抗原均为阳性,其中培养上清中浓度较低,细胞膜和细胞质中浓度较高。结论:CAD的融合表位基因在原核和真核系统均得到正确表达;CAD对于表位研究的设计很有帮助。

关键词：口蹄疫病毒表位基因表达真核系统原核系统计算机辅助设计

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大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的Annexin32的抗凝血活性分析

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 825-827页

作者：张毅杨湘越陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :比较大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的 Annexin32对凝血时间及大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法 :采用白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)法体外检测凝血指标 ,并观察大鼠下腔静脉血栓形成情况。结果 :两种表达体系制备的蛋白对 K... 详细信息

目的 :比较大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的 Annexin32对凝血时间及大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法 :采用白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)法体外检测凝血指标 ,并观察大鼠下腔静脉血栓形成情况。结果 :两种表达体系制备的蛋白对 KPTT有明显延长作用 ,且 1m g/ kg的蛋白均可显著抑制大鼠下腔静脉血栓形成。结论 :两种表达体系制备的

关键词： annexin32 大肠杆菌毕赤酵母基因表达抗凝血活性

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重组裂殖子表面蛋白质1特异性抗体有效抑制恶性疟原虫体外生长

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第3期34卷 318-322页

作者：张冬梅潘卫庆陆德如第二军医大学病原生物学教研室第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所上海200433 第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所

42kD恶性疟原虫裂殖子表面蛋白质 1C末端片段 (MSP1 42 )是当今重要的疟疾疫苗候选抗原。为获得大量构象正确的MSP1 42重组蛋白进行疫苗有效性试验 ,在毕氏酵母系统中分泌表达了MSP1 42重组蛋白。通过与一组特异性识别构象表位的单抗反... 详细信息

42kD恶性疟原虫裂殖子表面蛋白质 1C末端片段 (MSP1 42 )是当今重要的疟疾疫苗候选抗原。为获得大量构象正确的MSP1 42重组蛋白进行疫苗有效性试验 ,在毕氏酵母系统中分泌表达了MSP1 42重组蛋白。通过与一组特异性识别构象表位的单抗反应 ,该重组蛋白在重要构象表位上与天然蛋白质一致。由该蛋白质诱生的抗体能有效地抑制恶性疟原虫的体外生长 ,这些结果为进一步开展MSP1 42重组蛋白疫苗有效性试验提供了基础

关键词：恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 毕氏酵母体外抑制试验

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庆大霉素诱导LLC-PK1细胞凋亡与p27^(Kip1)表达关系的研究

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中国抗生素杂志 2002年第8期27卷 485-489页

作者：傅鹏崔若兰袁伟杰周凤娟梅小斌戴建新孙树汉第二军医大学长海医院肾内科上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的　观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用 ;研究细胞周期调节蛋白 p2 7Kip1蛋白和mRNA表达在凋亡过程中的变化 ;并探讨细胞凋亡与p2 7Kip1之间的关系。方法　对体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株 (LLC PK1细胞 )... 详细信息

目的　观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用 ;研究细胞周期调节蛋白 p2 7Kip1蛋白和mRNA表达在凋亡过程中的变化 ;并探讨细胞凋亡与p2 7Kip1之间的关系。方法　对体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株 (LLC PK1细胞 )予以不同浓度的庆大霉素溶液分别作用 2 4～ 96h ,以MTT法测定庆大霉素对LLC PK1细胞增殖的抑制率 ,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡条带 ,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞增殖动力学 ,WesternBlot法检测细胞内p2 7Kip1的蛋白表达 ,RT PCR法检测细胞p2 7Kip1mRNA表达的变化。结果　庆大霉素对LLC PK1细胞增殖有抑制作用 ,具诱导LLC PK1细胞凋亡的作用 ,凋亡率呈药物浓度和作用时间依赖性 ;庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。p2 7Kip1蛋白在细胞内的表达随着干预的庆大霉素浓度增加而逐渐上调 ,蛋白水平与凋亡率之间呈正相关 ,其mRNA表达趋势与其蛋白表达一致。结论　庆大霉素诱导的LLC PK1细胞凋亡与细胞周期蛋白p2 7Kip1表达密切相关。

关键词：庆大霉素 LLC-PK1细胞 p27^Kip1 细胞凋亡 MTT法

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缺血性急性肾功能衰竭病程进展中p27^(kip1)作用的研究

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中华肾脏病杂志 2002年第4期18卷 301-302页

作者：傅鹏崔若兰袁伟杰戴建新孙树汉第二军医大学长海医院肾内科上海200433 第二军医大学长海医院基础部医学遗传学教研室上海200433

在缺血性急性肾功能衰竭(ARF)中,肾脏能否通过受损肾小管上皮细胞的再生、增殖而实现其结构和功能的自我修复是病程转归的关键。而作为细胞增殖和分化共同途径的细胞周期,其运转过程由一系列调控因子即细胞周期调节蛋白(cellcycle regul... 详细信息

在缺血性急性肾功能衰竭(ARF)中,肾脏能否通过受损肾小管上皮细胞的再生、增殖而实现其结构和功能的自我修复是病程转归的关键。而作为细胞增殖和分化共同途径的细胞周期,其运转过程由一系列调控因子即细胞周期调节蛋白(cellcycle regulatory proteins,CCRP)所控制[1]。其中p27kip1是重要的负性CCRP,表现为p27kip1抑制细胞增殖[1],同时还可促进细胞分化成熟、诱导细胞凋亡[2]。为此,我们动态观察了缺血性ARF大鼠肾脏细胞增殖程度以及肾组织内p27kip1的表达,并探讨了p27kip1的表达量与肾小管上皮细胞增殖程度之间的关系,以明确缺血性ARF病程中p27kip1的可能作用。

关键词：缺血性急性肾功能衰竭 p27^kipl 肾小管上皮细胞细胞增殖动物实验

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