检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2001年第5期21卷 540-541页

作者：吴丹郭瀛军王庆敏孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

囊虫病是由猪带绦虫幼虫-囊尾蚴寄生于人和猪体引起的人、畜共患病,在我国囊虫病也有广泛的流行区域.抗原cC1是以囊虫病患者、病猪血清为探针从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选出的具有高度特异性的人、猪共同抗原[1].以抗原cC1为目的基因构建... 详细信息

囊虫病是由猪带绦虫幼虫-囊尾蚴寄生于人和猪体引起的人、畜共患病,在我国囊虫病也有广泛的流行区域.抗原cC1是以囊虫病患者、病猪血清为探针从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选出的具有高度特异性的人、猪共同抗原[1].以抗原cC1为目的基因构建了含有全长cC1 cDNA的重组质粒p3-cC1,同时制备并纯化了重组抗原cC1,以p3-cC1为DNA疫苗,cC1蛋白加弗氏佐剂为抗原佐剂疫苗,用这两种不同形式的疫苗免疫接种小鼠观察免疫应答.

关键词：猪囊尾蚴抗原cCl 疫苗

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绿色荧光蛋白基因在小鼠胚胎干细胞中表达效率的影响因素分析

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 319-321页

作者：杨桦戴建新戴旭明傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因在小鼠胚胎干细胞系 R1中表达的影响因素。方法 :构建 3个不同的 GFP真核表达载体 ,并从转录、蛋白表达水平比较了它们整合于宿主细胞染色体中的表达效率。结果 :在 GFP蛋白表达水平上 ,含肽链延长因子... 详细信息

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因在小鼠胚胎干细胞系 R1中表达的影响因素。方法 :构建 3个不同的 GFP真核表达载体 ,并从转录、蛋白表达水平比较了它们整合于宿主细胞染色体中的表达效率。结果 :在 GFP蛋白表达水平上 ,含肽链延长因子 (EF)启动子的表达载体和所转染的克隆明显高于含 CMV启动子及含双拷贝 CMV - GFP表达单元的表达载体 ;而p CMV- GFP和 pd CMV - GFP所转染的克隆之间无显著差别 ;NIH3T3和 ES细胞之间比较 ,GFP的表达水平无显著差异。转录水平与蛋白质水平的测定结果相一致。结论 :(1)在 NIH 3T3和 R1胚胎干细胞系中 ,EF启动子引导下的 GFP基因表达效率明显高于 CMV启动子 ;(2 )外源基因表达单元的拷贝数在染色体中的少量增加 ,不能明显提高表达效率 ;(3)获得了在 R1胚胎干细胞系中稳定、高效表达 GFP的载体 ,为后续工作奠定了基础。

关键词：绿色荧光蛋白胚胎干细胞基因表达影响因素小鼠

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应用酵母单杂交系统筛选CpG免疫激活序列的特异性结合蛋白

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 542-545,T002页

作者：胡振林孙树汉戴建新周凤娟第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性... 详细信息

目的 :寻找与 Cp G免疫激活序列 (imm unostimulatory sequence,ISS)有选择性相互作用的蛋白 ,以进一步探讨其分子作用机制。方法 :采用酵母单杂交系统 ,以 4重复的 ISS为“诱饵”,对人骨髓细胞 c DNA文库进行初步筛选 ,并对部分阳性克隆以电泳迁移率变动分析 (EMSA )进行验证。结果 :已获得 4个双阳性克隆 ,其中两个编码功能未知的蛋白 ,而另外两个均属抗体轻链 ,分别与抗 DNA抗体和抗乙肝表面抗原抗体 (HBs Ab)高度同源 ;EMSA发现 HBs Ab可在偏酸 p H条件下 (p H6 .4和 5 .8时 )特异性地与含 ISS的寡核苷酸 (Cp G- ODN)结合。结论 :HBs Ab可与

关键词： CpG免疫激活序列酶母单杂交系统免疫球蛋白特异性结合蛋白

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基于Cre重组酶体系的小鼠HPRT定点整合打靶载体的构建及其应用

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 538-541页

作者：郑敬民李坚杨桦傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点... 详细信息

目的 :构建带有 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的针对小鼠 HPRT基因的基因打靶载体 ,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法 :利用含 HPRT基因组 DNA片段的质粒 p MP8和人工合成含 lox6 6序列的寡核苷酸 ,构建含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6的置换型打靶载体 ,经过限制性内切酶酶切鉴定其结构正确后 ,用电穿孔法对小鼠胚胎干细胞 R1株进行基因转染 ,经 G418/ 6 - TG(6 - thioguanine)分组药物筛选 ,进行 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo载体的应用研究。结果 :得到了与设计一致的置换型打靶载体 p SP- HPRT- lox6 6 - Neo;将线性化的打靶载体导入 ES细胞后 ,能与靶位点有效地发生同源重组 ,获得了 2 0个靶基因被灭活了的 ES细胞克隆。结论 :此研究成功构建了含 Cre重组酶识别位点变异体 lox6 6针对小鼠 HPRT基因位点的置换型打靶载体。

关键词：基因打靶胚胎干细胞 HPRT基因 Cre重组酶小鼠

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表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系的生物学特性

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 322-324页

作者：杨桦傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)在小鼠胚胎干细胞系 R1中整合并高效稳定表达后对宿主细胞生物学特性的影响。方法 :从生长曲线、碱性磷酸酶表达水平、正常核型率及体内多向分化能力等 4个方面 ,对整合有 GFP高效表达载体的 R1ES细胞亚克... 详细信息

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)在小鼠胚胎干细胞系 R1中整合并高效稳定表达后对宿主细胞生物学特性的影响。方法 :从生长曲线、碱性磷酸酶表达水平、正常核型率及体内多向分化能力等 4个方面 ,对整合有 GFP高效表达载体的 R1ES细胞亚克隆 ,进行生物学特性的比较分析。结果 :R1ES细胞与 4个高效稳定表达 GFP的 ES细胞克隆在细胞增殖速率、分化状态及正常核型率上均无显著差异 ;将 GFP(+ ) ES细胞接种裸鼠后 ,均可有效形成含有 3个胚层细胞的畸胎瘤。结论 :外源基因 GFP在 R1ES细胞中的整合及稳定高效表达对于 ES细胞的基本生物学特性无明显影响 ,为有效利用 GFP进行 ES细胞体内的示踪研究提供了保障。

关键词：绿色荧光蛋白胚胎干细胞生物学特性小鼠基因表达

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缺血性急性肾衰大鼠肾组织细胞周期调节蛋白表达的变化

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肾脏病与透析肾移植杂志 2001年第2期10卷 118-122页

作者：傅鹏崔若兰袁伟杰戴建新孙树汉倪灿荣第二军医大学附属长海医院肾内科上海200433 第二军医大学医学遗传学教研室第二军医大学病理学教研室

目的 :探讨缺血性急性肾功能衰竭大鼠肾组织细胞周期调节蛋白cyclinE和CDK 2的表达及与肾小管上皮细胞增生的关系。　方法 :建立缺血性急性肾功能衰竭大鼠模型 ,分别在第 0、2、7、10、14天处死。以生化法测定血清肌酐 (SCr)值 ,以免... 详细信息

目的 :探讨缺血性急性肾功能衰竭大鼠肾组织细胞周期调节蛋白cyclinE和CDK 2的表达及与肾小管上皮细胞增生的关系。　方法 :建立缺血性急性肾功能衰竭大鼠模型 ,分别在第 0、2、7、10、14天处死。以生化法测定血清肌酐 (SCr)值 ,以免疫组织化学染色技术观察肾组织内细胞增生程度以及cyclinE和CDK 2的表达和分布情况。　结果 :大鼠SCr值在缺血再灌注第 2天开始显著增高 ,第 7天最高 ,第 10天开始降低 ,第 14天基本降至正常。对照组肾组织细胞增生指数 (PI)为 0 1% ,肾缺血后第 2、7、10和 14天PI分别为 14 8%、30 9%、2 3 6 %和12 4%。cyclinE和CDK 2蛋白在肾组织内分布于皮质肾小管 ,少数在间质 ,且肾缺血后第 2天表达弱阳性 (+) ,第7天表达强阳性 (+++) ,第 10天表达阳性 (++) ,第 14天表达弱阳性 (+) ;肾小球内基本无表达。　结论 :缺血性急性肾功能衰竭大鼠肾组织cyclinE/CDK 2蛋白表达增强与肾小管上皮细胞增生程度相一致。表明cyclinE和CDK 2是调控缺血性急性肾衰大鼠肾小管上皮细胞增生的关键蛋白。

关键词：缺血性急性肾功能衰竭细胞周期调节蛋白周期素E 周围素依赖性激酶2

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肿瘤生长抑制因子——血管抑素和内皮抑素

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生物技术通讯 2001年第2期12卷 144-146页

作者：孙宁霞张平武第二军医大学医学遗传学教研室，上海200433

血管生成是肿瘤生长转移过程中的一个关键环节 ,因此控制血管生成成为抑制肿瘤生长的重要途径之一。目前已发现了许多血管生成抑制因子 ,尤以血管抑素和内皮抑素最为引人瞩目。综述了两种肿瘤生长抑制因子的发现、分子结构、生物学活性... 详细信息

血管生成是肿瘤生长转移过程中的一个关键环节 ,因此控制血管生成成为抑制肿瘤生长的重要途径之一。目前已发现了许多血管生成抑制因子 ,尤以血管抑素和内皮抑素最为引人瞩目。综述了两种肿瘤生长抑制因子的发现、分子结构、生物学活性等 ,尤其侧重于它们抗肿瘤作用的实验研究。

关键词：肿瘤血管生成血管抑素内皮抑素抗肿瘤作用

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锌指蛋白基因ZNF191

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生命的化学 2001年第2期21卷 116-118页

作者：厉建中李坚傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

锌指是Miller等人(1985年)最初在爪蟾转录因子TFⅢA中发现的一种特殊结构，即在蛋白质一级结构上，存在着C-X2-4-C-X12-H-X3-H的序列单元(C：半胱氨酸；H：组氨酸；X：任意氨基酸)，其中的2个半胱氨酸和2个组氨酸通过配位键与一个锌离... 详细信息

锌指是Miller等人(1985年)最初在爪蟾转录因子TFⅢA中发现的一种特殊结构，即在蛋白质一级结构上，存在着C-X2-4-C-X12-H-X3-H的序列单元(C：半胱氨酸；H：组氨酸；X：任意氨基酸)，其中的2个半胱氨酸和2个组氨酸通过配位键与一个锌离子结合，成手指状结构，这类序列单元被称为锌指模体，含有锌指模体的蛋白质称为锌指蛋白。

关键词：锌指蛋白基因 ZNF191 SCAN 功能

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第四讲基因芯片在肝病研究中的应用

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肝脏 2001年第1期6卷 28-29页

作者：李坚傅继梁上海第二军医大学医学遗传学教研室 200433

随着 2 0世纪 90年代初人类基因组计划的启动 ,生物学和其它相关技术的飞速发展 ,原有的一些基因检测和分析系统也逐渐显示出其不足之处。基因组研究的推进迫切需要一种高通量 ,高准确率的研究系统。而ＤＮＡ芯片正是在这种背景下出现... 详细信息

随着 2 0世纪 90年代初人类基因组计划的启动 ,生物学和其它相关技术的飞速发展 ,原有的一些基因检测和分析系统也逐渐显示出其不足之处。基因组研究的推进迫切需要一种高通量 ,高准确率的研究系统。而ＤＮＡ芯片正是在这种背景下出现的极具时代特征的重大进展。它是融生命科学、物理学、化学、微电子学和计算机学为一体的崭新技术 ,既有重大的基础研究价值 ,又有明显的产业化前景 ,因而受到科学界、产业界和各国政府的高度重视。ＤＮＡ芯片 (ＤＮＡｃｈｉｐ)又称微点阵 (Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ) ,是指利用大规模集成电路的手段控制固相合成成千上万个寡核苷酸或ｃＤＮＡ探针 ,并将它们以非常高的密度固定在固相载体表面。将要研究的ＤＮＡ或ｃＤＮＡ样品做荧光标记后在芯片上与探针杂交 ,通过对杂交信号的扫描和计算机处理 ,可以非常迅速地得出所需的信息。 1996年底 ,美国加州Ａｆｆｙｍａｔｒｉｘ公司灵活运用各种技术制造了世界上第一块ＤＮＡ芯片。ＤＮＡ芯片的出现充分体现了生物学技术与其它学科和技术的相互交叉和渗透。由于其高通量、集成化、自动化和定量检测的特点使之成为基因组研究各个方面 ,包括功能基因组、结构基因组、环境基因组和药物基因组...

关键词：肝病基因芯片 DNA芯片分子遗传学

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乙肝核酸疫苗可使树鼠句抵御人乙肝病毒的攻击

乙肝核酸疫苗可使树鼠句抵御人乙肝病毒的攻击

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中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会

作者：戴建新周凤娟杨桦胡振林孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室第二军医大学医学遗传学教研室第二军医大学医学遗传学教研室第二军医大学医学遗传学教研室第二军医大学医学遗传学教研室

众所周知,乙肝核酸疫苗可在小鼠体内诱发全面的体液和细胞免疫应答,但是,该免疫应答能否抵御乙肝病毒的攻击?由于对人乙肝病毒敏感的物种很少,除人外只有黑猩猩和树鼠句。目前世界上只有几例在黑猩猩体内的成功报道。但由于黑猩猩的高... 详细信息

众所周知,乙肝核酸疫苗可在小鼠体内诱发全面的体液和细胞免疫应答,但是,该免疫应答能否抵御乙肝病毒的攻击?由于对人乙肝病毒敏感的物种很少,除人外只有黑猩猩和树鼠句。目前世界上只有几例在黑猩猩体内的成功报道。但由于黑猩猩的高昂价格,国内难以承担。为观察乙肝核酸疫苗在大量生物体内的免疫保护作用,我们用树鼠句为乙肝病毒急性感染模型,观察免疫接种乙肝核酸疫苗对乙肝病毒攻击的保护作用。方法:用树鼠句200只,免疫接种前尾部取血300ul,检测基础感染率;随机分为4组,按照1ug疫苗/g体重分别于腿部肌肉中接种pcDNA3、pcDNA3-HBsAg、pcDNA3-HBcAg、pcDNA3-HBsAg-IFN-α真核表达质粒,两周后追加免疫一次;两周后通过尾静脉推注乙肝大三阳患者血清0.5ml攻击。8周后处死动物,取肝组织于10％甲醛溶液中固定后,作病理切片观察肝脏受损情况。在此

关键词：乙肝核酸疫苗免疫接种急性感染免疫保护作用乙肝病毒乙肝大三阳

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