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白血病抑制因子受体中gp130细胞内区诱导白血病细胞Meg-01内c-myc的表达

第二军医大学学报 2000年第6期21卷 522-525页

作者：刘厚奇汤淑萍刘善荣胡世杰傅继梁第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学医学遗传学教研室

目的 :观察人白血病细胞系 Meg- 0 1白血病抑制因子 (L IF)受体α亚基 (gp190 )和另一亚基 gp130细胞内区与 c- m yc的关系 ,以探明白血病细胞过度增殖和晚期分化异常的机制。方法 :用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体... 详细信息

目的 :观察人白血病细胞系 Meg- 0 1白血病抑制因子 (L IF)受体α亚基 (gp190 )和另一亚基 gp130细胞内区与 c- m yc的关系 ,以探明白血病细胞过度增殖和晚期分化异常的机制。方法 :用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体 (190 /130 ,130 /190 ) ,并分别在 Meg- 0 1表达 ,其与野生型受体竞争性结合 L IF,用免疫组化和蛋白质印迹法分析受体细胞内区形成同源性二聚体 (190 cyt- 190 cyt,130 cyt- 130 cyt)后的细胞状况和细胞内 c- m yc的表达。结果 :转染 p ED 190 /130后用 L IF作用 6 h,Meg- 0 1细胞 c- myc表达量增加 ,细胞增殖明显 ;而另一嵌合体受体对 Meg- 0 1细胞 c- myc的表达无影响。结论 :L IF受体中 gp130亚基的细胞内区参与白血病 Meg- 0 1细胞内增殖信号的传递。

关键词：白血病抑制因子免疫受体信号传导

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核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用

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第二军医大学学报 2000年第11期21卷 1090-1091,I002页

作者：孙树汉郭瀛军陈蕊雯杨桦第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞... 详细信息

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果 :非接种组 ,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色 ;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。结论 :首次观察到核酸疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象。

关键词：核酸疫苗囊尾蚴细胞凋亡 pcDNA3-γcC1

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核酸疫苗及其在疾病免疫防治中的应用

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 519-521页

作者：孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

自从发现质粒载体携带的基因能在小鼠肌细胞中表达 ,核酸免疫技术已愈来愈受到人们重视 ,并被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。仅在短短的几年时间内 ,有关的实验报道已涉及包括细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病... 详细信息

自从发现质粒载体携带的基因能在小鼠肌细胞中表达 ,核酸免疫技术已愈来愈受到人们重视 ,并被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。仅在短短的几年时间内 ,有关的实验报道已涉及包括细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病以及肿瘤等预防和治疗的研究。本文就核酸疫苗的免疫机制、优越性、安全性 ,以及目前的研究进展状况作一综述。

关键词：核酸类疫苗免疫机制免疫疗法

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乙肝核心抗原DNA疫苗的构建及其免疫原性分析

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 501-503页

作者：陈蕊雯林懿戴建新周凤娟孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建 HBV核心抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内的表达及其免疫原性。方法 :采用 PCR法从 HBV全基因 DNA中获得核心抗原 DNA片段 ,并将其重组到 pc DNA3载体。以此为候选疫苗分别免疫小鼠和树 ,并检测其抗HBc Ig G。结果 :... 详细信息

目的 :构建 HBV核心抗原 DNA疫苗 ,并探讨其在实验动物体内的表达及其免疫原性。方法 :采用 PCR法从 HBV全基因 DNA中获得核心抗原 DNA片段 ,并将其重组到 pc DNA3载体。以此为候选疫苗分别免疫小鼠和树 ,并检测其抗HBc Ig G。结果 :构建了乙肝核心抗原候选核酸疫苗 pc DNA3- HBc。免疫接种该疫苗后第 2周抗 HBc Ig G水平开始升高 ,小鼠至第 9周 ,树至第 7周升至峰值。结论 :构建的 pc DNA3- HBc

关键词： DNA 乙型肝炎核心抗原乙型肝炎 HBV

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猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 508-510页

作者：吴丹郭瀛军林懿孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水... 详细信息

目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水平 ,并进行仔猪的免疫保护实验。结果 :免疫小鼠第 3周出现特异性 Ig G应答 ,第 8周 Ig G水平达到最高 ;小鼠血清的 Ig G2 a检测显示 ,第 2周 Ig G2 a应答即为阳性 ,且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪使其获得了 73%的保护率。结论 :猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗能有效诱导仔猪的免疫保护效应。

关键词：猪囊尾蚴免疫保护保护性抗原CC1-cDNA

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钩端螺旋体DNA疫苗pcD-flaB的构建及其免疫机制的初步研究

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 511-514页

作者：寇志华张平武孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察钩端螺旋体 DNA疫苗的保护效果 ,并探讨该疫苗的免疫机制。方法 :应用定向克隆的方法构建 DNA疫苗 pc D- fla B,肌肉途径免疫豚鼠 ,观察豚鼠攻击感染钩体后的保护率 ,以 EL ISA法检测特异性抗体 Ig G水平 ,并观察疫苗对豚鼠... 详细信息

目的 :观察钩端螺旋体 DNA疫苗的保护效果 ,并探讨该疫苗的免疫机制。方法 :应用定向克隆的方法构建 DNA疫苗 pc D- fla B,肌肉途径免疫豚鼠 ,观察豚鼠攻击感染钩体后的保护率 ,以 EL ISA法检测特异性抗体 Ig G水平 ,并观察疫苗对豚鼠腹腔巨噬细胞分泌的 TNF活性的影响。结果 :该疫苗对同型钩体的保护率为 10 0 % ,特异性抗体水平在疫苗注射第 6周达到高峰 ,TNF的活性明显增高。结论 :DNA疫苗 pc D- fla B对同型钩体感染有较强的保护作用 ;能够有效地诱导机体的体液免疫应答 ,并增强巨噬细胞所产生的 TNF的活性。

关键词：钩端螺旋体 DNA 疫苗巨噬细胞肿瘤坏死因子

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新城疫病毒HN基因真核表达质粒的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 515-518页

作者：魏林戴建新孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建新城疫病毒 (NDV )血凝素神经氨酸酶 (HN)基因真核表达质粒 ,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法 :用 RT- PCR从 NDV中克隆 HN c DNA,并构建 HN的真核表达载体 ,转染 COS- 7细胞表达。注射至小鼠B16黑素瘤模... 详细信息

目的 :构建新城疫病毒 (NDV )血凝素神经氨酸酶 (HN)基因真核表达质粒 ,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法 :用 RT- PCR从 NDV中克隆 HN c DNA,并构建 HN的真核表达载体 ,转染 COS- 7细胞表达。注射至小鼠B16黑素瘤模型 ,检测其抗肿瘤作用。结果 :成功地克隆了 NDV HN c DNA,所构建的 pc DNA3- HN有良好的表达 ,动物实验显示 ,pc DNA3- HN有增强荷瘤小鼠 CTL ,NK杀伤活性的作用。结论 :NDV HN的真核表达质粒具有增强荷瘤小鼠抗肿瘤CTL ,NK细胞反应的作用。

关键词：新城疫病毒抗肿瘤作用 HN基因真核表达质粒

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猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护性研究

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 504-507页

作者：王庆敏陈蕊雯郭瀛军孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究猪囊尾蚴副肌球蛋白 (Ag B)核酸疫苗诱发的免疫应答。方法 :将 pc DNA3- Ag B核酸疫苗肌注 4～ 6周龄的昆明种小鼠 ,从 2周后开始用 EL ISA方法检测小鼠体内 Ig G和 Ig G2 a的水平。另外将该核酸疫苗注射 C5 7BL / 6小鼠 ,... 详细信息

目的 :研究猪囊尾蚴副肌球蛋白 (Ag B)核酸疫苗诱发的免疫应答。方法 :将 pc DNA3- Ag B核酸疫苗肌注 4～ 6周龄的昆明种小鼠 ,从 2周后开始用 EL ISA方法检测小鼠体内 Ig G和 Ig G2 a的水平。另外将该核酸疫苗注射 C5 7BL / 6小鼠 ,体外培养小鼠脾细胞 ,用刀豆蛋白 A (Con A)和特异性抗原刺激 ,EL ISA试剂盒检测细胞因子 IL - 2和 IL - 4的水平 ,并观察脾淋巴细胞增殖反应。另外 ,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪 ,进行攻击实验 ,计算相对保护率。结果 :注射疫苗后的第 3周起 ,Ig G即为阳性 ,持续升高至第 8周 ;从第 2周起 ,小鼠血清 Ig G2 a为阳性 ,第 4周达到高峰。细胞因子检测表明 ,IL- 2水平远远高于空载体对照组 ,而 IL- 4含量却与空载体对照组无显著差异 ;实验组刺激指数明显高于空载体对照组。副肌球蛋白核酸疫苗对仔猪的相对保护率为 80 %。结论 :猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗在小鼠动物实验中引发了以 Th1型免疫应答占优势的全面免疫应答。pc DNA3- Ag B核酸疫苗对仔猪具有较好的免疫保护性。

关键词：猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸类疫苗 Th1免疫应答

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一种简便的蛋白质N端氨基酸测定方法

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第二军医大学学报 2000年第3期21卷 253-253,262页

作者：张平武魏林项洪刚孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

蛋白质(或多肽)的两端氨基酸序列测定是分析未知蛋白质的结构和功能的基础.目前蛋白质N端序列分析的技术已较为成熟,可达20～40个氨基酸残基,但由于N端氨基酸序列分析成本高(1 400～4 000元/次),不大可能反复多次检测.有些多肽N端氨基... 详细信息

蛋白质(或多肽)的两端氨基酸序列测定是分析未知蛋白质的结构和功能的基础.目前蛋白质N端序列分析的技术已较为成熟,可达20～40个氨基酸残基,但由于N端氨基酸序列分析成本高(1 400～4 000元/次),不大可能反复多次检测.有些多肽N端氨基酸是封闭的,降解后才能进行氨基酸序列分析.如果事先知道N端氨基酸是否封闭,一方面有利于选择序列分析的方式(N端、C端或降解后测序),另一方面可节省费用,也利于测序结果的分析.一个结构未知的酵母分泌蛋白,其相对分子质量为7.9×104,我们在分析其结构时采用DNS-Cl法对其N端氨基酸进行了测定,知其N端未封闭,然后进行氨基酸序列分析,取得了很好的效果.

关键词：蛋白质 N端氨基酸序列分析 DNS-C1法测定

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基于pMTR1质粒的转基因小鼠突变研究模型的建立

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 537-540页

作者：卢洋黎怀星李建秀傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分... 详细信息

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分别移入 45只受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 44只 ,存活 35只 ,采用 PCR,PCR- Southern和基因组 Southern杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以 4只经基因组 Southern杂交证实在基因组 DNA中整合有多拷贝结构完整的 p MTR1质粒的小鼠作Founder小鼠 ,进行转基因小鼠的建系工作。对每个 Founder小鼠已有的 F1代及 F2代转基因小鼠的基因组 DNA进行p MTR1质粒回收实验。结果 :从转基因小鼠基因组中可以回收出结构、功能完整的 p MTR1质粒。结论 :(1)建立了在基因组 DNA中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ;(2 )

关键词：转基因小鼠基因突变 PMTR1质粒

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