检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2000年第3期21卷 299-300页

作者：张平武邹蓓艳王慧丽孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 复旦大学遗传所

在基因克隆的方法选择中,构建基因组文库并筛选是克隆完整基因的经典方法, 但构建基因组文库技术复杂,步骤繁琐.若构建的文库不够大,常筛选不到所需的目的基因.因此我们尝试用另一种方法,即在试探性的Southern blot基础上构建基因小库,... 详细信息

在基因克隆的方法选择中,构建基因组文库并筛选是克隆完整基因的经典方法, 但构建基因组文库技术复杂,步骤繁琐.若构建的文库不够大,常筛选不到所需的目的基因.因此我们尝试用另一种方法,即在试探性的Southern blot基础上构建基因小库,从中筛选目的基因,可以大大减少筛库的工作量并提高筛到目的基因的成功率.现以克隆酵母Candida kefyr 的菊粉酶全基因为例将这两种方法加以比较.

关键词：基因组文库基因小库基因克隆

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p35^(Nck5a)基因重复性打靶载体的构建和ES细胞基因打靶研究

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Acta Genetica Sinica 2000年第8期27卷 659-665页

作者：周常文傅继梁薛红第二军医大学医学遗传学教研室上海200433 香港科技大学生物化学系

为了在小鼠胚胎于细胞（ＥＳ）中引起神经细胞ｃｄｃ２类激酶调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的定点重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约１２．２ｋｂ的基因重复性打靶载体ｐＧＤＴＶ。用电穿孔法将线性化的ｐＧＤＴＶ载体转入... 详细信息

为了在小鼠胚胎于细胞（ＥＳ）中引起神经细胞ｃｄｃ２类激酶调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的定点重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约１２．２ｋｂ的基因重复性打靶载体ｐＧＤＴＶ。用电穿孔法将线性化的ｐＧＤＴＶ载体转入ＥＳ细胞，经过Ｇ４１８和ＧＡＮＣ分组药物选择，获得２４５个双药物抗性的细胞克隆，细胞存活率为６．２２ × １０－５。经ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定，２个ＥＳ细胞克隆发生了ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因的重复，同源重组率为５．０８×１０－７、负向选择系统的应用使同源重组事件的富集效率提高了７倍。为建立Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的转基因小鼠模型打下了基础。

关键词： p35^Nch5a基因基因打靶基因重复 NclK NFTS AD

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转基因动物研究的现状与展望

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中国科学基金 2000年第1期14卷 23-26页

作者：戴旭明李坚傅继梁第二军医大学医学遗传教研室医学分子遗传学开放实验室上海200433

简要评述了国内外转基因动物研究的现状,归纳了目前常用的几种转基因动物遗传修饰的策略,比较分析了几种转基因动物建立途径的特点以及存在的问题。在此基础上介绍了国家自然科学基金重点项目“医学转基因动物模型研究”的研究内容,并... 详细信息

简要评述了国内外转基因动物研究的现状,归纳了目前常用的几种转基因动物遗传修饰的策略,比较分析了几种转基因动物建立途径的特点以及存在的问题。在此基础上介绍了国家自然科学基金重点项目“医学转基因动物模型研究”的研究内容,并对转基因动物研究的未来发展作了展望。

关键词：转基因动物遗传修饰基因组修饰

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用转基因动物研究神经特异性基因表达

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生命的化学 2000年第6期20卷 257-259页

作者：朱海英傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

神经组织中基因特异性表达的调控是由顺式作用元件和反式作用因子相互作用完成的，所以，寻找并鉴定这些顺式作用元件就成为这一研究领域中不可缺少的一个环节。利用报告基因在体外培养细胞的瞬时表达实验寻找和鉴定顺式作用元件是广泛... 详细信息

神经组织中基因特异性表达的调控是由顺式作用元件和反式作用因子相互作用完成的，所以，寻找并鉴定这些顺式作用元件就成为这一研究领域中不可缺少的一个环节。利用报告基因在体外培养细胞的瞬时表达实验寻找和鉴定顺式作用元件是广泛应用的重要手段之一，但这一方法有其明显的局限性，即(1)体外培养细胞脱离了整体动物发育和生长环境的调节；(2)体外构建的可能包含转录调控序列的报告基因表达载体使研究的片段脱离了整个基因组背景；(3)报告基因表达载体在体外培养细胞瞬时表达的研究体系使基因表达脱离了可能作为转录起始开关调节因子的控制。

关键词：转基因动物表达调控神经特异性表达

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第三讲肝病的基因治疗

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肝脏 2000年第4期5卷 227-228页

作者：厉建中傅继梁上海第二军医大学医学遗传学教研室 200433

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第二讲转基因动物与肝脏疾病

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肝脏 2000年第3期5卷 155-156页

作者：姚真真傅继梁上海第二军医大学医学遗传学教研室 200433

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分子遗传学与肝脏学讲座——第一讲人类基因图

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肝脏 2000年第2期5卷 101-102页

作者：车文良傅继梁上海第二军医大学医学遗传学教研室 200433

随着分子遗传学研究突飞猛进地发展 ,肝脏疾病的相关本质日益得以揭示。为了让广大基础和临床工作者了解这方面的信息和知识 ,本刊特邀请第二军医大学副校长 ,医学遗传学教研室主任傅继梁教授组织撰写一组“分子遗传学与肝脏学”的系列... 详细信息

随着分子遗传学研究突飞猛进地发展 ,肝脏疾病的相关本质日益得以揭示。为了让广大基础和临床工作者了解这方面的信息和知识 ,本刊特邀请第二军医大学副校长 ,医学遗传学教研室主任傅继梁教授组织撰写一组“分子遗传学与肝脏学”的系列讲座。本期起始陆续刊出以飨读者。

关键词：人类基因图 HGP 遗传图谱物理图谱转录图谱

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第一讲人类基因图

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肝脏 2000年第2期5卷 101-102页

作者：车文良傅继梁上海第二军医大学医学遗传学教研室

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重组恶性疟原虫DNA质粒免疫小鼠及抗原表达的调控

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生物工程学报 2000年第1期16卷 13-16页

作者：谢文凯陈启宇汪群斌潘卫庆颜日辉陆德如中国科学院上海植物生理研究所上海200032 上海复星高科技集团有限公司上海200042 第二军医大学寄生虫学教研室上海200433 第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所上海200433

将恶性疟原虫MSP131基因序列,引入四环素(Tc)控制的真核表达载体pTRE,获得重组质粒pTRE31。将MSP131的原核表达载体pDS56T1转化大肠杆菌表达MSP131,亲和纯化后作检测用抗原。pTRE31与辅助质粒pTetoff(tTA)肌肉注射4周龄BALB/c小鼠,观察... 详细信息

将恶性疟原虫MSP131基因序列,引入四环素(Tc)控制的真核表达载体pTRE,获得重组质粒pTRE31。将MSP131的原核表达载体pDS56T1转化大肠杆菌表达MSP131,亲和纯化后作检测用抗原。pTRE31与辅助质粒pTetoff(tTA)肌肉注射4周龄BALB/c小鼠,观察DNA介导免疫情况。结果显示,四环素饲喂的小鼠4周时血清抗体阳转率为71%(1/14),而不饲喂四环素组可达100%(14/14),表明用pTRE31/pTetoff重组质粒组合直接注射小鼠有效地引发了针对疟原虫MSP131抗原的体液免疫反应,且可受控于四环素。不饲喂四环素组小鼠在12周后仍能维持抗体阳性,倍比稀释ELISA显示血清抗体滴度在4周、8周和12周内持续上升。饲喂四环素组小鼠4周后停止饲喂Tc,第8周和第12周检测仍有部分(60%)小鼠血清抗体阳转,而继续饲喂Tc的小鼠未有抗体阳转,暗示重组质粒DNA在小鼠体内可持续存在至少4周并仍具备表达功能。

关键词：恶性疟原虫 DNA疫苗四环素 Tet-off调控系统

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重组恶性疟原虫DNA质粒免疫小鼠制备单克隆抗体

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微生物学报 2000年第4期40卷 389-393页

作者：谢文凯钟平潘卫庆陈启宇汪群斌陆德如中国科学院上海植物生理研究所上海200032 卫生部上海生物制品研究所上海200052 第二军医大学寄生虫学教研室上海200433 上海复星高科技(集团)有限公司上海200042 第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所上海200433

用恶性疟原虫MSP1 31基因片段的重组质粒DNA直接免疫BALB/c小鼠 ,诱导产生体液 ,免疫后取脾细胞与SP2 /0小鼠骨髓瘤细胞在PEG1 450作用下进行融合 ,获得了 2株能分泌抗恶性疟原虫MSP1 31单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株 9H9和 8A2。用... 详细信息

用恶性疟原虫MSP1 31基因片段的重组质粒DNA直接免疫BALB/c小鼠 ,诱导产生体液 ,免疫后取脾细胞与SP2 /0小鼠骨髓瘤细胞在PEG1 450作用下进行融合 ,获得了 2株能分泌抗恶性疟原虫MSP1 31单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株 9H9和 8A2。用酶联免疫吸附试验检测 ,小鼠腹水抗体滴度最高为 1∶1 0 0 0 0。经免疫球蛋白类型和亚类鉴定 ,2株杂交瘤细胞株均为IgG1 。蛋白免疫印迹试验表明 ,此单克隆抗体与MSP1 31蛋白抗原有特异免疫反应 ,证明通过质粒DNA直接免疫小鼠可制备特异性单克隆抗体。

关键词：严重疟原虫 DNA疫苗单克隆抗体制备载体DNA

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