检索结果-内蒙古大学图书馆

中国科学（C辑） 1998年第3期28卷 264-269页

作者：黎怀星杨桦李建秀胡以平王肖鹏郝光荣傅继梁第二军医大学生物学教研室军队医学分子遗传学重点实验室上海200433 上海200433 第二军医大学实验动物中心

对D6 2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的自发突变率以及甲基磺酸乙酯 (ethylmethanesulfonate ,EMS)诱发的突变率和突变谱进行了研究 .将带有lacⅠ靶基因的pSPORT1质粒通过酶切、环化和转化DH1 0B宿主菌的方式从经和未经诱变处理... 详细信息

对D6 2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的自发突变率以及甲基磺酸乙酯 (ethylmethanesulfonate ,EMS)诱发的突变率和突变谱进行了研究 .将带有lacⅠ靶基因的pSPORT1质粒通过酶切、环化和转化DH1 0B宿主菌的方式从经和未经诱变处理的D6 2转基因小鼠骨髓组织基因组DNA中回收出来 ,lacⅠ靶基因突变体用M9/L选择性平板进行正向选择 .结果从经EMS诱变处理的小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 935个pSPORT1质粒中筛选到 6个lacⅠ-突变体 (EMS诱发的突变率为 5 0× 1 0 -5 ) ,而从对照组小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 6 4 9个质粒中没有检测到lacⅠ-突变体 (自发突变率则小于 8.6× 1 0 -5 ) .对 6个突变体的 2个突变高发区进行了序列分析 ,共检测出 1 6个点突变 .其中 ,碱基置换突变为主要突变类型 ,占 87.5 % ( 1 4) ,其余 1 2 .5 % ( 2 )的突变为缺失突变 .在碱基置换突变中 ,颠换占6 4 % ;而转换仅占 36 % ,这既不同于用BigBlue 转基因小鼠所测到的lacⅠ基因在小鼠体内的自发突变谱 ,又不同于用穿梭载体 /哺乳动物细胞系统所测到的EMS在体外的诱变谱 .而突变发生的位点则与其他的研究报道相同 ,主要出现在CpG二核苷酸 ,占全部点突变的 45 % .这些结果表明 :( 1 )基于含 pSPORT1质粒的D6 2转基因小鼠?

关键词：转基因小鼠骨髓组织细胞 EMS lacⅠ基因诱变率

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白血病抑制因子在CHO细胞中的表达及其对U937细胞增殖的抑制作用(英文)

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中国实验血液学杂志 1998年第3期6卷 190-193页

作者：朱奎刘厚奇刘小萍张树忠邹祝英刘建国傅继梁第二军医大学医学分子遗传学教研室上海200433 东方肝胆外科研究所肿瘤免疫与基因治疗中心上海200433

构建白血病抑制因子(LIF)表达质粒pEDr-LIF并通过磷酸钙-DNA共沉淀的方法转入CHO-dhfr细胞。使用不同浓度的MTX筛选高表达株。获得的最高表达株经ELISA试剂盒检测上清中LIF含量3天内达到0.2μg/ml。Southern blot检测表明LIF cDNA已经... 详细信息

构建白血病抑制因子(LIF)表达质粒pEDr-LIF并通过磷酸钙-DNA共沉淀的方法转入CHO-dhfr细胞。使用不同浓度的MTX筛选高表达株。获得的最高表达株经ELISA试剂盒检测上清中LIF含量3天内达到0.2μg/ml。Southern blot检测表明LIF cDNA已经稳固整合到了宿主细胞的基因组DNA中。MTT试验表明CHO-LIF的培养上清可以显著地抑制U937的细胞增殖。

关键词：白血病抑制因子基因表达 CHO细胞 U937细胞

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MHC DQA基因的分子进化研究——Ⅱ.基于核苷酸替换和SCU偏移的系统发育的分析

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Acta Genetica Sinica 1997年第5期24卷 394-402页

作者：潘星华傅继梁第二军医大学生物学教研室医学分子遗传学开放实验室上海200433

根据23个等位基因不同外显子(EN)的核苷酸(NT)替换及同义密码子使用谱(SCU)偏移研究了哺乳类7种动物MHC DQA座位的系谱发育关系。发现:(1)在大时间尺度内,MHC DQA基因进化速率(1.0×10^(-9),其中EN2为1.3×10^(-9)9NT/位点/年)... 详细信息

根据23个等位基因不同外显子(EN)的核苷酸(NT)替换及同义密码子使用谱(SCU)偏移研究了哺乳类7种动物MHC DQA座位的系谱发育关系。发现:(1)在大时间尺度内,MHC DQA基因进化速率(1.0×10^(-9),其中EN2为1.3×10^(-9)9NT/位点/年)与一般核基因相似;鼠类DQA基因的NT替换速率大致是其他哺乳类的2倍;(2)证实DQA等位基因多态性是在哺乳动物分化以后才逐渐形成的;推测牛类也存在与绵羊DQA2即OLA-DQA(c17-2)对等的具有最近共同祖先的DQA2基因座位有待发现;HLA-DQA2系谱与HLA-DQA1祖先的分化年代在20～12Mya(百万年前),HLA-DQA1各等位基因分化时间在24Mya至1Mya以内,因此产生HLA-DQA2座位的基因重组发生在HLA-DQA1产生少数几个等位基因之后;(3)基于SCU分化度的进化树从一个新的角度体现了DQA基因的系统发育关系,并显示HLA-DQA2具有特殊的SCU,提示在DQA基因的进化中产生了SCU的分化,SCU系统树在进化上有重要价值和特殊意义。改进了基因的SCU分化度和SCU相似系数的估算方法。

关键词： MHC DQA基因分子遗传学分子进化

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P48L和D74N突变对P16基因功能影响的初步研究

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 126-127页

作者：黄长晖傅继梁第二军医大学生物教研室暨医学分子遗传学开放实验室上海200433

P16基因(CDKN2,P16INK4a,MTS1)是新发现的肿瘤抑制基因。目前对P16基因是否存在突变热点,以及突变与肿瘤的病程和预后间的关系,都还处于研究之中。为了研究突变对P16功能的影响,探讨P16结构与功能的关系,以进一步认识P16基因的功能,我... 详细信息

P16基因(CDKN2,P16^INK4a,MTS1)是新发现的肿瘤抑制基因。目前对P16基因是否存在突变热点,以及突变与肿瘤的病程和预后间的关系,都还处于研究之中。为了研究突变对P16功能的影响,探讨P16结构与功能的关系,以进一步认识P16基因的功能,我们应用体外定点诱变方法,构建了在原发性恶性肿瘤中存在的P48L和D74NP16突变体,并在缺失P16基因的肿瘤细胞株H460中表达。

关键词： P16基因功能影响体外定点诱变肿瘤抑制基因原发性恶性肿瘤 H460细胞株结构与功能的关系 P16表达突变体肿瘤细胞株

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通过ES细胞和转基因小鼠途径的基因诱捕

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国外医学（遗传学分册） 1997年第3期20卷 113-115页

作者：潘星华博继梁第二军医大学生物学教研室和医学分子遗传学开放实验室上海200433

将含无启动子报告基因的基因诱捕载体转染ES细胞，体外筛选内源基因的插入突变．建成嵌合小鼠，可以方便地研究突变基因的时空表达特征及时胚胎早期发育的影响；根据突变基因与报告基因形成的融合转录子，又为其克隆和进一步分析提供了... 详细信息

将含无启动子报告基因的基因诱捕载体转染ES细胞，体外筛选内源基因的插入突变．建成嵌合小鼠，可以方便地研究突变基因的时空表达特征及时胚胎早期发育的影响；根据突变基因与报告基因形成的融合转录子，又为其克隆和进一步分析提供了重要依据．基于区细胞和转基因小鼠途径基因诱捕技术的发展为深入认识哺乳动物发育的分子机制和基因调控提供了一种独特的工具，并已取得了重要成果．

关键词：基因诱捕 ES细胞转基因

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基于pSPORT1质粒的转基因小鼠突变检测系统的建立和应用

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癌变．畸变．突变 1997年第6期9卷 388-389页

作者：黎怀星李建秀等第二军医大学生物学教研室，军队医学分子遗传学重点实验室，上海200433

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乙型肝炎病毒B基因组在转基因小鼠内的表达和复制

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 125-126页

作者：胡以平雷章恒余宏宇郑文超李建秀王新民胡卫江孙伟郝光荣潘星华王肖鹏傅继梁第二军医大学分子生物学教研室和医学分子遗传学开放实验室第二军医大学病理解剖学教研室上海200433 中国科学院生物化学研究所第二军医大学实验动物中心

采用受精卵显微注射方法,产生了41只整合有完整的乙型肝炎病毒(HBV)B基因组的转基因小鼠建立者。建立者基因组中所整合的HBV基因组都能以孟德尔方式向后代传递。在这些建立者中,有33只为HBsAg阳性,同时也为HBeAg阳性的有18只。对血清HB... 详细信息

采用受精卵显微注射方法,产生了41只整合有完整的乙型肝炎病毒(HBV)B基因组的转基因小鼠建立者。建立者基因组中所整合的HBV基因组都能以孟德尔方式向后代传递。在这些建立者中,有33只为HBsAg阳性,同时也为HBeAg阳性的有18只。对血清HBsAg和HBeAg同时阳性的8只小鼠进行免疫组化分析,发现在它们的肝和肾组织中也有HBsAg和HBeAg的存在,但不存在于脾、脑、肺、睾丸、皮呋、卵巢及肌肉组织中。

关键词：肝炎病毒转基因 B基因组分子遗传学小鼠开放实验室军医大学分子生物乙型 HBsAg和HBeAg

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乙型肝炎病毒基因组在转基因小鼠的表达和复制

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癌变．畸变．突变 1997年第6期9卷 387-387页

作者：胡以平于宏宇等第二军医大学生物学教研室医学分子遗传学开放实验室，上海200433 病理解剖学教研室

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基因狩猎:功能克隆、定位克隆和表型克隆

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自然杂志 1996年第2期18卷 80-87页

作者：潘星华傅继梁第二军医大学生物学教研室医学分子生物学开放实验室上海200433遗传学博士副教授第二军医大学

致病基因的成功分离使人类能够深入洞察遗传性疾病的发病机理,并能对其进行科学的诊断和防治,同时也直接促进了生物高技术的进步,因此,它是现代遗传学最激动人心的领域.本文论述了基因克隆的发展历程和三种主要策略即功能克隆、定位克... 详细信息

致病基因的成功分离使人类能够深入洞察遗传性疾病的发病机理,并能对其进行科学的诊断和防治,同时也直接促进了生物高技术的进步,因此,它是现代遗传学最激动人心的领域.本文论述了基因克隆的发展历程和三种主要策略即功能克隆、定位克隆和表型克隆及其基本原理和重要成就,并展望了发展趋势.随着人类基因组计划的进展,定位克隆的一个新版本——定位候选基因技术正成为基因克隆的一种快捷高效的策略;表型克隆具有高度覆盖面和解析力,对复杂遗传病相关基因的围猎有独特的价值.

关键词：功能克隆定位克隆表型克隆基因细胞遗传学

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Hela细胞P16^(ink4)cDNA的克隆及序列分析

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生物技术通讯 1996年第1期7卷 21-24页

作者：黄长晖邓炜奚建华邹祝英王肖鹏傅继梁第二军医大学生物教研室医学分子遗传学开放实验室上海200433 复旦大学遗传学研究所上海200433

P16^(ink4)是CDK抑制蛋白,参与调控细胞G1期至S期的转换。目前发现P16`(ink4)基因损伤与多种肿瘤的发生、发展有关,可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能,以及突变对该基因功能的影响,本文应用RT-PCR方法,从Hela细胞... 详细信息

P16^(ink4)是CDK抑制蛋白,参与调控细胞G1期至S期的转换。目前发现P16`(ink4)基因损伤与多种肿瘤的发生、发展有关,可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能,以及突变对该基因功能的影响,本文应用RT-PCR方法,从Hela细胞中克隆了P16^(ink4)cDNA。扩增得到556bp片段(包括引物两端酶切位点的16bp)克隆于M13载体,测定了其DNA序列。该序列包括了P16^(ink4)cDNA编码区全部471bp,以及3’端69bp序列。表明P16^(ink4)cDNA已成功地得到克隆。

关键词： P16ink4/CDKN2/MTS1 cDNA 序列测定 RT-PCR

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