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动脉脱细胞三维胶原支架的制备和血管平滑肌细胞种植

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医用生物力学 2003年第S1期18卷 90-90页

作者：张炎刘太华刘波李玉泉张秀花姜宗来第二军医大学解剖学教研室上海200433 上海交通大学医学院生物力学实验室上海200030

构建全生物化组织工程血管是血管组织工程研究中最有吸引力的研究方向之一.本文采用猪颈总动脉脱细胞胶原作三维支架构建全生物化组织工程血管,取得了初步成功.

关键词：颈总动脉脱细胞三维胶原支架血管平滑肌全生物化组织工程支架构建研究方向血管组织细胞胶原工程研究吸引力

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动脉脱细胞三维胶原支架主要组织相容复合体I(MHC I)抗原的免疫组化观察

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医用生物力学 2003年第S1期18卷 90-90页

作者：刘太华张炎李玉泉刘波张秀花姜宗来第二军医大学解剖学教研室上海200433 上海交通大学医学院生物力学实验室上海200030

采用异种动物血管制作组织工程血管的支架,再种植宿主自体平滑肌细胞和内皮细胞,是目前较理想的构建组织工程血管的模型.然而,胶原纤维、弹力纤维、细胞外基质和脱细胞后残留的细胞碎片都具有抗原性,尤其是细胞膜上的MHC是一种强烈的移... 详细信息

采用异种动物血管制作组织工程血管的支架,再种植宿主自体平滑肌细胞和内皮细胞,是目前较理想的构建组织工程血管的模型.然而,胶原纤维、弹力纤维、细胞外基质和脱细胞后残留的细胞碎片都具有抗原性,尤其是细胞膜上的MHC是一种强烈的移植抗原,如何处理生物支架的抗原性是构建全生物化组织工程血管的一个关键问题之一.同时,在支架种植细胞前检测其抗原性的强弱也是必须的基础技术之一.本文选择血管壁组织细胞高表达的MHC I作为检测指标,观察血管支架处理前后MHC I的变化情况.

关键词：动脉脱细胞三维胶原支架组织相容复合体抗原性全生物化组织工程构建组织工程血管细胞外基质平滑肌细胞组织细胞种植细胞异种动物移植抗原血管支架细胞碎片生物支架内皮细胞胶原纤维

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静压力对体外培养动脉中层血管平滑肌细胞的影响

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医用生物力学 2003年第S1期18卷 19-19页

作者：张峰张炎刘波刘艳春姜宗来第二军医大学解剖学教研室上海200433 上海交通大学医学院生物力学实验室上海200030

为探讨压力在血管重建中的作用,观察了不同静压力条件下,体外培养动脉中层平滑肌细胞的形态学变化、增殖与凋亡及其相关蛋白的变化趋向.本文选用成年雄性金华猪颈总动脉4～7cm,在不同静压力(160mmHg、100mmHg)下培养1、4、7天(控制血管... 详细信息

为探讨压力在血管重建中的作用,观察了不同静压力条件下,体外培养动脉中层平滑肌细胞的形态学变化、增殖与凋亡及其相关蛋白的变化趋向.本文选用成年雄性金华猪颈总动脉4～7cm,在不同静压力(160mmHg、100mmHg)下培养1、4、7天(控制血管内流体流量≤6ml/h)后,4%多聚甲醛固定,以新鲜血管为对照组,血管常规石蜡切片后,应用HE染色、免疫组织化学、TUNEL、Hoechst33258荧光染色、透射电镜等方法进行观察.

关键词：静压力体外培养颈总动脉血管平滑肌细胞免疫组织化学多聚甲醛固定增殖与凋亡形态学变化荧光染色压力条件血管重建相关蛋白透射电镜石蜡切片流体流量变化趋向血管内金华猪对照组应用

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小鼠胚胎干细胞p16^(INK4a)基因外显子1α打靶研究

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Acta Genetica Sinica 2002年第1期29卷 21-25页

作者：龚振明李坚傅继梁第二军医大学医学遗传教研室

在活体水平上 ,小鼠p16 INK4a基因是否具有抑制肿瘤发生和发展的功能是一个悬而未决的问题。利用筛选基因组文库得到的小鼠p16 INK4a基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠p16 INK4a 基因外显子 1α的基因打靶载体 ,其短臂为1.5kbEco81Ⅰ Acc... 详细信息

在活体水平上 ,小鼠p16 INK4a基因是否具有抑制肿瘤发生和发展的功能是一个悬而未决的问题。利用筛选基因组文库得到的小鼠p16 INK4a基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠p16 INK4a 基因外显子 1α的基因打靶载体 ,其短臂为1.5kbEco81Ⅰ AccⅡ片段 ,长臂为 5 .9kbXbaⅠ XhoⅠ片段。打靶载体经线性化和纯化后通过电穿孔转导小鼠R1ES细胞 ,获得 37个G418和Gancyclovir双药抗性克隆。用Southern杂交法对双药抗性克隆进行鉴定 ,获得一个敲除了p16 INK4a基因外显子 1α的阳性ES细胞克隆。

关键词： p16^INK4a 基因打靶小鼠胚胎干细胞外显子1a

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小鼠p16^(INK4a)基因外显子1α胚胎干细胞条件打靶研究

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中华医学遗传学杂志 2002年第4期19卷 285-289页

作者：龚振明郑敬民傅继梁第二军医大学医学遗传教研室上海200433 上海交通大学动物科学系

目的　研究打靶载体的结构与打靶效率的关系 ,探讨小鼠 p16 INK4 a基因在活体水平上抑制肿瘤发生和发展的功能。方法　利用筛选基因组文库得到的小鼠 p16 INK4 a基因组 DNA片段 ,设计并构建了针对小鼠 p16 INK4 a基因外显子 1α的条件... 详细信息

目的　研究打靶载体的结构与打靶效率的关系 ,探讨小鼠 p16 INK4 a基因在活体水平上抑制肿瘤发生和发展的功能。方法　利用筛选基因组文库得到的小鼠 p16 INK4 a基因组 DNA片段 ,设计并构建了针对小鼠 p16 INK4 a基因外显子 1α的条件打靶载体 ,其短臂为 2 .0 kb Eco R / Xba 片段 ,长臂为 5 .9kb Spe / Not 片段 ,上游交叉位点 (locus of crossing- over,lox P)位于外显子 1α起始密码上游 2 4 0 bp处 ,下游lox P位于外显子 1α起始密码下游 16 33bp处 ,经重组酶 (Cre)介导后可将外显子 1α和选择标记 Neo基因同时删除。结果　将此条件打靶载体通过电穿孔转导小鼠胚胎干细胞 ,获得 2 4个药物抗性克隆 ,其中 1个经 Southern杂交证实为正确同源重组克隆。结论　在同源臂两侧各用一个

关键词： p16^INK4a基因胚胎干细胞条件打靶打靶载体打靶效率

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低切应力作用下体外培养动脉内皮细胞内皮素的表达

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医用生物力学 2003年第S1期18卷 18-18页

作者：刘波周瑾滕海英姜宗来上海交通大学医学院生物力学实验室上海200030 第二军医大学生物化学与分子生物学教研室数理教研室上海200433

探讨"应力-生物学效应(血管活性物质变化)-血管重建"这一过程的奥秘,是当今血管生物力学研究的热点.内皮素(Endothelin ET)由内皮细胞(Endothelial Cell,EC)合成分泌,是强烈长效的血管收缩剂,也能促进血管平滑肌细胞(Vascular... 详细信息

探讨"应力-生物学效应(血管活性物质变化)-血管重建"这一过程的奥秘,是当今血管生物力学研究的热点.内皮素(Endothelin ET)由内皮细胞(Endothelial Cell,EC)合成分泌,是强烈长效的血管收缩剂,也能促进血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscle Cell,VSMC)分裂.切应力对EC内皮素表达的影响,虽有一些研究,但主要集中于培养的EC,且其报道的变化趋势各不相同.单纯切应力如何影响完整血管组织内ET-1的转录与表达仍不清楚.本文旨在研究切应力对完整血管的生物学作用,探讨应力引起血管重建过程中内皮素的变化.

关键词：应力作用体外培养动脉内皮细胞血管重建切应力内皮素 Smooth Muscle Cell 血管平滑肌细胞应力对生物力学研究血管收缩剂生物学作用生物学效应血管组织血管活性物质变化合成分泌变化趋势转录

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人IL-2真核表达质粒对副肌球蛋白核酸疫苗的免疫调节作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第6期22卷 622-624页

作者：王庆敏陈蕊雯吴丹孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的　观察IL 2表达质粒对副肌球蛋白 (AgB)核酸疫苗的免疫调节作用。方法　将人的IL 2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3 IL 2重组质粒 ;然后接种C5 7BL 6小鼠 (分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组 ) ,ELISA法检测小鼠血... 详细信息

目的　观察IL 2表达质粒对副肌球蛋白 (AgB)核酸疫苗的免疫调节作用。方法　将人的IL 2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3 IL 2重组质粒 ;然后接种C5 7BL 6小鼠 (分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组 ) ,ELISA法检测小鼠血清中的IgG和IgG2a的水平 ;用MTT法检测小鼠脾细胞增殖反应 ,用ELISA法检测其分泌的IL 2和IL 4的水平。最后在仔猪中进行攻击实验 ,观察pcDNA3 IL 2质粒的免疫刺激作用。结果　注射疫苗后 ,pcDNA3 IL 2协同注射组增强了副肌球蛋白特异性的IgG和IgG2a的水平 ,增强了脾细胞的增殖反应 ,提高了其分泌IL 2的水平 ,但对IL 4的水平产生轻微影响。仔猪攻击实验中 ,共同注射IL 2基因组提高了仔猪的相对保护率。结论对于副肌球蛋白核酸疫苗而言 ,人的IL

关键词：副肌球蛋白猪囊尾蚴人IL-2 核酸疫苗免疫保护 ELISA法囊虫病

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低切应力在动脉粥样硬化形成中的作用--动物模型的建立和形态学观察

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医用生物力学 2003年第S1期18卷 20-20页

作者：王溪涛黄荣国覃开蓉张炎姜宗来第二军医大学解剖学教研室上海200433 复旦大学生物力学实验室上海200433 上海交通大学医学院生物力学实验室上海200030

为了阐明低切应力在动脉粥样硬化形成中的作用机制,为动脉粥样硬化防治提供实验基础,本文建立了低切应力+高脂的动脉粥样硬化动物模型,观察了低切应力对动脉粥样硬化形成的影响.

关键词：低切应力动脉粥样硬化动物模型作用机制实验基础应力对防治

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基于凝血因子IX基因剔除小鼠建立血友病乙转基因动物模型

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Acta Genetica Sinica 2002年第7期29卷 594-598页

作者：车文良贺艳姚真真李坚傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载... 详细信息

为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体 ,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因(hFIXml)、4个拷贝的MCK增强子 (MCKe)、鸡 β -肌动蛋白启动子 (bA)及PolyA ,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核 ,再将它们分别回输 4 5只假孕受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 6 9只 ,存活 6 3只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠 ,证实 6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒 ,并对 1只小鼠的PCR产物进行测序。

关键词：血友病乙转基因小鼠模型点突变人凝血因子IX基因

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小鼠锌指蛋白基因ZF-12基因剔除的ES细胞系的建立

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Acta Genetica Sinica 2002年第10期29卷 860-864页

作者：厉建中杨桦傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

利用小鼠锌指蛋白ZF 12基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠ZF 12基因座的替换型打靶载体pSSC TV 10 .5。经限制性核酸内切酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,通过电穿孔将线性化打靶载体导入ES细胞内 ,经G4 18/GANC双药筛选和分子鉴定 ,获... 详细信息

利用小鼠锌指蛋白ZF 12基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠ZF 12基因座的替换型打靶载体pSSC TV 10 .5。经限制性核酸内切酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,通过电穿孔将线性化打靶载体导入ES细胞内 ,经G4 18/GANC双药筛选和分子鉴定 ,获得 4个ZF 12 + /-基因的ES细胞杂合子克隆 ,其生长状态良好 ,为进一步建立ZF 12基因剔除的小鼠动物模型创造了条件。

关键词：小鼠锌指蛋白基因 ZF-12 基因剔除 ES细胞系基因打靶胚胎干细胞

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